Desenvolvimento de metodologias eficientes de diagnóstico molecular dos fungos Phyllocista citricarpa e Phyllocista capitalensis

Orientador: Chirlei GlienkeMonografia (Bacharelado) - Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Curso de Graduação em Ciências BiológicasResumo : Diversas ferramentas para a detecção e identificação molecular de espécies vem sendo utilizadas no diagnóstico de fitopatógenos. Uma destas doenças, Mancha Preta dos Citros (MPC, agente causal fungo Phyllosticta citricarpa), é causa de perdas financeiras ao agronegócio citrícola – graças a depreciação visual e queda prematura dos frutos. Entretanto, outro fungo do gênero, P. capitalensis, não é patogênico a citros, mas filogeneticamente relacionado e morfologicamente semelhante, compartilha o mesmo hospedeiro e habita outras lesões similares a da MPC, gerando uma demanda pela distinção entre as duas espécies, dada a existência de barreiras fitossanitárias à primeira. Assim, o presente trabalho visou construir conhecimento sob duas regiões genômicas previamente utilizadas para a detecção de P. citricarpa (GCP) – até então não utilizada em qPCR – e P. capitalensis (GMF) – com problema de especificidade perante a novas espécies descritas dentro do gênero. Buscou-se a obtenção de sequências homólogas tanto a GCP em P. capitalensis quanto a GMF em P. citricarpa, P. brazilianiae, G. mangiferae e P. citribraziliensis. Também sua obtenção a partir de DNA extraído de tecidos foliares de pomares com sintomas de MPC e das próprias linhagens obtidas destes, pelo método de isolamento tradicional. Procedeu-se com a extração de ácidos nucléicos do respectivo material (kit MoBio UltraCleantm Microbial DNA Isolation), amplificação do fragmento GCP e GMF (em condições menos restringentes quando em outras espécies), clonagem no vetor pGEM®-T, avaliação dos transformantes e sequenciamento, ou o sequenciamento direto em alguns casos. Em seguida, foram desenhados e avaliados primers com base nas sequencias obtidas, visando detecção utilizando PCR quantitativa (qPCR) com o sistema TaqMan® para P. citricarpa e uma alteração na PCR convencional para P. capitalensis, com a substituição do primer reverso. Na região GCP foram observados polimorfismos escassos nas diversas linhagens de P. citricarpa, porém não foi encontrada uma região com alta homologia em P. capitalensis através do método utilizado. Esse resultado demonstra a especificidade destes primers para a espécie P. citricarpa o que diminui o risco de falsos positivos. Foi observada a amplificação de produtos diversos quando utilizado o material extraído diretamente de folhas cítricas, provavelmente associados a artefatos na reação de PCR, que justificam a tentativa de aperfeiçoamento da detecção, visando mais especificidade e sensibilidade. O ensaio de qPCR proposto mostrou-se mais específico entretanto menos sensível que o previamente disponível na literatura. Para a região GMF foram, igualmente, observados polimorfismos escassos nas linhagens de P. capitalensis e não foi encontrado um homólogo em P. citricarpa e P. citribraziliensis através do método utilizado. Tal ausência reforça a especificidade destes primers para P. capitalensis e diminui a possibilidade de falsos positivos para P. citricarpa. O diagnóstico via PCR convencional proposto foi capaz de distinguir o fungo P. capitalensis de todos os demais avaliados. Com o obtido pode-se concluir que os primers propostos para a detecção através de qPCR de P. citricarpa são uma alternativa aos previamente disponíveis e que a alteração no ensaio de detecção de P. capitalensis deixou o mesmo mais específico

A ação de impugnação de mandato eletivo e a questão do prazo para ajuizamento

Orientador: Prof. Romeu Felipe Bacellar Filho, Guilherme de Salles GonçalvesMonografia (graduação) - Universidade Federal do Paraná,Setor de Ciências Jurídicas, Curso de Graduação em DireitoDentro do Direito Eleitoral e Direito Processual Eleitoral, a Ação de Impugnação de Mandato Eletivo surge como um meio para os legitimados buscarem o saneamento da vida política do país. O Brasil, na comparação com os países vizinhos, destaca-se por ter um meio de desconstruir um mandato irregular, pois mesmo depois do candidato estar em pleno uso do poder político, ode vir a perdê-lo, tudo na mais perfeita ordem e segurança jurídica. Isto demonstra um grande avanço no aperfeiçoamento do Estado Democrático de Direito. Esta obra pretende mostrar a origem, a evolução, o procedimento, quando se utiliza e o resultado efetivo deste instrumento. Analisa também a questão do prazo para ajuizamento. O método consiste na pesquisa, leitura, apreensão e desenvolvimento das ideias da doutrina e da jurisprudência brasileiras a respeito do tema. O resultado é uma obra que contrapõe as principais ideias em busca de uma visão unificadora. Conclui-se que esta ação ainda na alcançou toda a plenitude de aplicação, mas que já se presta a extirpar grande parte do mal que insiste em tentar sobrevir na política do Brasil

Composition of endophytic fungal community associated with leaves of maize cultivated in south Brazilian field

The objective of this study was to conduct a survey about fungi associated with leaves from two different maize plant lineages and to analyze their microbiota diversity. Isolated fungi were identified by morphological analysis and molecular taxonomy was performed using ITS1-5.8S-ITS2 rDNA. About 27 fungi morphotypes were obtained, 15 of them were from the first maize lineage. About 86.7% of the individuals belonged to the Dothideomycetes class (Phoma sorghina, Epicocum nigrum, Cladosporium sp., Bipolaris zeicola, and Alternaria alternata complex) and 13.3% to the Sordariomycetes class (Diaporthe/Phomopsis sp. and Nigrospora sp.). This ratio was opposite in the other maize lineage with 25.0% of Dothideomycetes (E. nigrum and Pleosporales) and 75.0% of Sordariomycetes (Gibberella fujikuroi complex, Fusarium graminearum complex, Diaporthe/Phomopsis sp., and Nigrospora sp.). By concerning the analyses of morphological characteristics and molecular phylogeny, this study intended to identify the groups of saprophytic, phytopathogenic, and mycotoxin fungi, which differently co-inhabit leaf tissue of maize plants in both tested lineages

Caracterização morfofisiológica e genética de bactérias endofíticas isoladas de raízes de diferentes genótipos de milho (Zea mays L.).

A cultura do milho (Zea mays L.) tem relevante expressão no cenário mundial e o Estado do Paraná desempenha importante papel como maior produtor de milho no Brasil. Assim, todas as estratégias que permitam otimizar a produção deste importante cultivo são importantes para a pesquisa aplicada. Bactérias endofíticas apresentam alto potencial na elevação dos índices de produtividade, por mecanismos como a fixação biológica do nitrogênio, a promoção do crescimento de plantas pela produção de fitohormônios, o controle de patógenos, entre outros. Objetivos: Isolar bactérias que se associam endofiticamente com diferentes genótipos de milho (linhagens e híbridos) e caracterizá-las quanto a diversas propriedades morfofisiológicas e genéticas. Métodos: Inicialmente foi estabelecida uma coleção de 217 isolados de bactérias endofíticas de raízes de milho e destes, 98 foram mantidos em condições de laboratório. Foram realizadas caracterizações morfofisiológicas, incluindo morfologia de colônias, diversos testes bioquímicos (crescimento em diferentes meios de cultura, redução do nitrato, urease, catalase, tolerância intrínseca a antibióticos) e avaliação da capacidade de fixação do nitrogênio in vitro. Como etapa subsequente, avaliou-se o perfil genético das bactérias através da amplificação do DNA com o primer BOX-PCR, relacionado a regiões repetitivas e não codificantes do DNA. Foi realizado, ainda, o sequenciamento parcial do gene 16S RNAr de bactérias representantes dos principais agrupamentos obtidos com os dados morfofisiológicos, sendo identificados os gêneros Pantoea, Bacillus, Burkholderia e Klebsiella. Resultados: Foi observada alta variabilidade entre os isolados obtidos em todos os parâmetros analisados, confirmando que populações com elevado grau de diversidade morfofisiológica e genética se estabelece endofiticamente com o milho. É interessante constatar que essa diversidade ocorre mesmo em linhagens e híbridos de milho obtidos em condições normais de melhoramento para a gramínea, que não consideram a capacidade de associação com bactérias endofíticas. Conclusão: O estabelecimento dessa importante coleção, com microrganismos pertencentes a gêneros pouco estudados com a cultura do milho no Brasil permitirá a condução de estudos para a avaliação da capacidade promotora de crescimento ou mesmo fixação biológica de nitrogênio nesses isolados bacterianos

Architecture and regulation of filamentous human cystathionine beta-synthase

\ua9 The Author(s) 2024. Cystathionine beta-synthase (CBS) is an essential metabolic enzyme across all domains of life for the production of glutathione, cysteine, and hydrogen sulfide. Appended to the conserved catalytic domain of human CBS is a regulatory domain that modulates activity by S-adenosyl-L-methionine (SAM) and promotes oligomerisation. Here we show using cryo-electron microscopy that full-length human CBS in the basal and SAM-bound activated states polymerises as filaments mediated by a conserved regulatory domain loop. In the basal state, CBS regulatory domains sterically block the catalytic domain active site, resulting in a low-activity filament with three CBS dimers per turn. This steric block is removed when in the activated state, one SAM molecule binds to the regulatory domain, forming a high-activity filament with two CBS dimers per turn. These large conformational changes result in a central filament of SAM-stabilised regulatory domains at the core, decorated with highly flexible catalytic domains. Polymerisation stabilises CBS and reduces thermal denaturation. In PC-3 cells, we observed nutrient-responsive CBS filamentation that disassembles when methionine is depleted and reversed in the presence of SAM. Together our findings extend our understanding of CBS enzyme regulation, and open new avenues for investigating the pathogenic mechanism and therapeutic opportunities for CBS-associated disorders

HuR Controls Glutaminase RNA Metabolism

Glutaminase (GLS) is directly related to cell growth and tumor progression, making it a target for cancer treatment. The RNA-binding protein HuR (encoded by the ELAVL1 gene) influences mRNA stability and alternative splicing. Overexpression of ELAVL1 is common in several cancers, including breast cancer. Here we show that HuR regulates GLS mRNA alternative splicing and isoform translation/stability in breast cancer. Elevated ELAVL1 expression correlates with high levels of the glutaminase isoforms C (GAC) and kidney-type (KGA), which are associated with poor patient prognosis. Knocking down ELAVL1 reduces KGA and increases GAC levels, enhances glutamine anaplerosis into the TCA cycle, and drives cells towards glutamine dependence. Furthermore, we show that combining chemical inhibition of GLS with ELAVL1 silencing synergistically decreases breast cancer cell growth and invasion. These findings suggest that dual inhibition of GLS and HuR offers a therapeutic strategy for breast cancer treatment

Analysis of the genetic diversity of Candida isolates obtained from diabetic patients and kidney transplant recipients

Yeasts of the genu