Subcutaneous tissue response of isogenic mice to calcium hydroxide-based pastes with chlorhexidine

This study was evaluated the response of subcutaneous connective tissue of isogenic mice to calcium hydroxide-based pastes with chlorhexidine digluconate (CHX). Seventy isogenic male BALB/c mice aged 6-8 weeks and weighing 15-20 g were randomly assigned to 8 groups. The animals received polyethylene tube implants as follows: Groups I, II, and III (n=10) - Calen® paste mixed with 0.4% CHX (experimental paste; Calen/CHX) for 7, 21, and 63 days, respectively; Groups IV, V, and VI (n=10) - UltraCal™ paste mixed with 2% CHX (experimental paste supplied by Ultradent Products Inc.; Ultracal/CHX) for 7, 21, and 63 days, respectively; and Groups VII and VIII (n=5): empty tube for 7 and 21 days, respectively. At the end of the experimental periods, the implants were removed together with the surrounding tissues (skin and subcutaneous connective tissue). The biopsied tissues were subjected to routine processing for histological analysis. Using a descriptive analysis and a four-point (0-3) scoring system, the following criteria were considered for qualitative and quantitative analysis of the tissue around the implanted materials: collagen fiber formation, tissue thickness and inflammatory infiltrate. A quantitative analysis was performed by measuring the thickness (µm), area (µm²) and perimeter (µm) of the reactionary granulomatous tissue formed at the tube ends. Data were analyzed statistically by the Kruskal-Wallis test and Dunn's post-test (α=0.05). Calen/CHX showed biocompatibility with the subcutaneous and reactionary tissues, with areas of discrete fibrosis and normal conjunctive fibrous tissue, though without statistically significant difference (p>0.05) from the control groups. In Groups I to III, there was a predominance of score 1, while in Groups IV to VI scores 2 and 3 predominated for all analyzed parameters. UltraCal/CHX, on the other hand, induced the formation of an inflammatory infiltrate and abundant exudate, suggesting a persistent residual aggression from the material, even 63 days after implant placement. In conclusion, the Calen paste mixed with 0.4% CHX allowed an adequate tissue response, whereas the UltraCal paste mixed with 2% CHX showed unsatisfactory results.O objetivo do presente estudo foi avaliar a resposta do tecido conjuntivo subcutâneo de camundongos isogênicos frente a pastas à base de hidróxido de cálcio, associadas ao digluconato de clorexidina (CHX). Setenta camundongos isogênicos BALB/c machos, com 6-8 semanas e pesando 15-20 g foram aleatoriamente divididos em 8 grupos. Os animais receberam implantes de tubos de polietileno contendo: Grupos I, II e III (n=10) - pasta Calen® associada à CHX a 0,4% (Calen/CHX), por 7, 21 e 63 dias, respectivamente; Grupos IV, V e VI (n=10) - pasta UltraCal™ associada à CHX a 2% (pasta experimental fornecida pela Ultradent Products Inc.; Ultracal/CHX), por 7, 21 e 63 dias, respectivamente; e Grupos VII e VIII (n=5) - tubo de polietileno vazio, por 7 e 21 dias, respectivamente. Decorridos os períodos experimentais, os implantes foram removidos juntamente com os tecidos circundantes (pele e tecido conjuntivo). Os tecidos foram submetidos ao processamento histotécnico de rotina, para análise histopatológica. Empregando um sistema de escores, os seguintes critérios foram considerados para a análise qualitativa e quantitativa: fibrosamento, espessura tecidual e infiltrado inflamatório. Foi efetuada, também, a análise quantitativa da medida da espessura (µm), área (µm²) e perímetro (µm) do tecido granulomatoso reacional formado na abertura dos tubos. Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística, empregando o teste de Kruskal-Wallis e o pós-teste de Dunn. O nível de significância adotado foi de 5%. Os resultados demonstraram biocompatibilidade da pasta Calen associada à CHX a 0,4% com o tecido adjacente, com fibrosamento discreto, assim como tecido conjuntivo normal, sem diferença estatística significante com os controles (p>0,05). Nos Grupos I, II e III houve predominância do escore 1, enquanto que nos Grupos IV, V e VI houve predominância dos escores 2 e 3, em todos os parâmetros analisados. Em relação à pasta à base de hidróxido de cálcio associada à CHX a 2% (UltraCal™) observou-se infiltrado inflamatório e exsudato severo, sugerindo uma agressão residual persistente do material testado, mesmo após 63 dias da sua implantação. Em conclusão, a adição de CHX a 0,4% à pasta Calen permitiu adequada resposta tecidual, enquanto o hidróxido de cálcio associado à CHX na concentração de 2% (UltraCal/CHX) evidenciou resultados insatisfatórios

A importância da endotoxina bacteriana (LPS) na endodontia atual

New knowledge of the structure and biological activity of endotoxins (LPS) has revolutionized concepts concerning their mechanisms of action and forms of inactivation. Since the 1980's, technological advances in microbiological culture and identification have shown that anaerobic microorganisms, especially Gram-negative, predominate in root canals of teeth with pulp necrosis and radiographically visible chronic periapical lesions. Gram-negative bacteria not only have different factors of virulence and generate sub-products that are toxic to apical and periapical tissues, as also contain endotoxin (LPS) on their cell wall. This is especially important because endotoxin is released during multiplication or bacterial death, causing a series of biological effects that lead to an inflammatory reaction and resorption of mineralized tissues. Thus, due to the role of endotoxin in the pathogenesis of periapical lesions, we reviewed the literature concerning the biological activity of endotoxin and the relevance of its inactivation during treatment of teeth with pulp necrosis and chronic periapical lesion.O conhecimento mais aprofundado sobre a estrutura e atividade biológica das endotoxinas (LPS) revolucionou os conceitos sobre seu mecanismo de ação e formas de inativação. A partir da década de 80, os avanços tecnológicos na cultura e identificação microbiológica demonstraram que, em canais radiculares de dentes portadores de necrose pulpar e lesão periapical crônica, visível radiograficamente, predominam microrganismos anaeróbios, particularmente os gram-negativos. Como se sabe, os microrganismos gram-negativos, além de possuírem diferentes fatores de virulência e gerarem produtos e sub-produtos tóxicos aos tecidos apicais e periapicais, contêm endotoxina em sua parede celular. Esse conhecimento é particularmente importante, uma vez que a endotoxina é liberada durante a multiplicação ou morte bacteriana, exercendo uma série de efeitos biológicos relevantes, que conduzem a uma reação inflamatória e à reabsorção dos tecidos mineralizados. Tendo em vista o papel da endotoxina na patogênese das lesões periapicais, os autores realizaram uma revisão da literatura específica, abordando suas atividades biológicas e a importância de sua inativação durante o tratamento de dentes portadores de necrose pulpar e lesão periapical

Subcutaneous connective tissue response to primary root canal filling materials

This study evaluated the response of the subcutaneous connective tissue of BALB/c mice to root filling materials indicated for primary teeth: zinc oxide/eugenol cement (ZOE), Calen paste thickened with zinc oxide (Calen/ZO) and Sealapex sealer. The mice (n=102) received polyethylene tube implants with the materials, thereby forming 11 groups, as follows: I, II, III: Calen/ZO for 7, 21 and 63 days, respectively; IV, V, VI: Sealapex for 7, 21 and 63 days, respectively; VII, VIII, IX: ZOE for 7, 21 and 63 days, respectively; X and XI: empty tube for 7 and 21 days, respectively. The biopsied tissues were submitted to histological analysis (descriptive analysis and semi-quantitative analysis using a scoring system for collagen fiber formation, tissue thickness and inflammatory infiltrate). A quantitative analysis was performed by measuring the area and thickness of the granulomatous reactionary tissue (GRT). Data were analyzed by Kruskal-Wallis, ANOVA and Tukey's post-hoc tests (?=0.05). There was no significant difference (p&gt;0.05) among the materials with respect to collagen fiber formation or GRT thickness. However, Calen/ZO produced the least severe inflammatory infiltrate (p<0.05). The area of the GRT was significantly smaller (p<0.05) for Calen/ZO and Sealapex. In conclusion, Calen/ZO presented the best tissue reaction, followed by Sealapex and ZOE.Neste estudo avaliou-se a resposta do tecido conjuntivo subcutâneo de camundongos BALB/c a materiais obturadores de canal radicular de dentes decíduos: óxido de zinco/eugenol (OZE), pasta Calen® espessada com óxido de zinco (Calen/OZ) e cimento Sealapex®. Os camundongos (n=102) receberam implantes de tubos de polietileno??? e foram divididos em grupos: I, II, III - Calen/OZ (7, 21 e 63 dias, respectivamente); IV, V, VI - Sealapex (7, 21 e 63 dias, respectivamente); VII, VIII, IX - OZE (7, 21 e 63 dias, respectivamente); X, XI - tubo vazio (7 e 21 dias, respectivamente). Os tecidos foram submetidos ao processamento e análise histopatológica descritiva e por meio de escores do fibrosamento, espessura tecidual e infiltrado inflamatório. Para a análise quantitativa mensurou-se a área e a espessura do tecido granulomatoso reacional (TGR). Os resultados foram analisados pelos testes de Kruskal-Wallis, ANOVA e pós-teste de Tukey (?=0,05). Não houve diferença significante (p&gt;0,05) entre os materiais, com relação ao fibrosamento e à espessura do TGR. Contudo, Calen/OZ apresentou infiltrado inflamatório de menor intensidade (p<0,05). A área do TGR foi menor (p<0,05) para Calen/OZ e Sealapex. Pôde-se concluir que Calen/OZ foi o material que apresentou a melhor compatibilidade tecidual, seguido pelos cimentos Sealapex e OZE

Antibacterial activity of root canal filling materials for primary teeth: zinc oxide and eugenol cement, Calen paste thickened with zinc oxide, Sealapex and EndoREZ

This study evaluated in vitro the antibacterial activity of 4 root canal filling materials for primary teeth - zinc oxide and eugenol cement (ZOE), Calen paste thickened with zinc oxide (Calen/ZO), Sealapex sealer and EndoREZ sealer - against 5 bacterial strains commonly found in endodontic infections (Kocuria rhizophila, Enterococcus faecalis, Streptococcus mutans, Escherichia coli and Staphylococcus aureus) using the agar diffusion test (agar-well technique). Calen paste, 1% chlorhexidine digluconate (CHX) and distilled water served as controls. Seven wells per dish were made at equidistant points and immediately filled with the test and control materials. After incubation of the plates at 37oC for 24 h, the diameter of the zones of bacterial growth inhibition produced around the wells was measured (in mm) with a digital caliper under reflected light. Data were analyzed statistically by analysis of variance and Tukey's post-hoc test (?=0.05). There were statistically significant differences (p<0.0001) among the zones of bacterial growth inhibition produced by the different materials against all target microorganisms. K. rhizophila was inhibited more effectively (p<0.05) by ZOE, while Calen/ZO had its highest antibacterial activity against E. faecalis (p<0.05). S. mutans was inhibited by Calen/ZO, Sealapex and ZOE in the same intensity (p>0.05). E. coli was inhibited more effectively (p<0.05) by ZOE, followed by Calen/ZO and Sealapex. Calen/ZO and ZOE were equally effective (p>0.05) against S. aureus, while Sealapex had the lowest antibacterial efficacy (p<0.05) against this microorganism. EndoREZ presented antibacterial activity only against K. rhizophila and S. aureus. The Calen paste and Calen/ZO produced larger zones of inhibition than 1% CHX when the marker microorganism was E faecalis. In conclusion, the in vitro antibacterial activity of the 4 root canal filling materials for primary teeth against bacterial strains commonly found in endodontic infections can be presented in a decreasing order of efficacy as follows: ZOE>Calen/ZO>Sealapex>EndoREZ.Este estudo avaliou in vitro a atividade antibacteriana de 4 materiais obturadores de canais radiculares de dentes decíduos - cimento de óxido de zinco e eugenol (OZE), pasta Calen espessada com óxido de zinco (Calen/OZ), cimento Sealapex e cimento EndoREZ - sobre 5 cepas bacterianas comumente encontradas em infecções endodônticas: Kocuria rhizophila, Enterococcus faecalis, Streptococcus mutans, Escherichia coli e Staphylococcus aureus, usando o teste de difusão em ágar (técnica do poço). A pasta Calen, digluconato de clorexidina a 1% (CHX) e água destilada foram usados como controle. Sete poços por placa foram preparados em pontos eqüidistantes e imediatamente preenchidos com os materiais experimentais e controle. Após incubação das placas a 37oC por 24 h, o diâmetro dos halos de inibição do crescimento bacteriano formados ao redor dos poços foi medido (em mm) com um paquímetro digital sob luz refletida. Os dados obtidos foram submetidos à análise de variância e ao pós-teste de Tukey (?=0,05). Com relação à atividade antibacteriana, evidenciaram-se diferenças estatisticamente significantes (p<0,0001) entre os halos de inibição formados pelos diferentes materiais, para todos os microrganismos avaliados. A K. rhizophila foi inibida mais eficazmente pelo OZE (p<0,05), enquanto que o E. faecalis foi inibido mais eficazmente pela Calen/OZ (p<0,05). O S. mutans foi inibido pela Calen/OZ, cimento Sealapex e OZE na mesma intensidade (p>0,05). A E. coli foi inibida mais eficazmente pelo OZE, seguido pela Calen/OZ e pelo cimento Sealapex (p<0,05). O S. aureus foi inibido pela Calen/OZ e OZE na mesma intensidade (p>0,05), e menos intensamente pelo cimento Sealapex (p<0,05). O cimento EndoREZ apresentou atividade antibacteriana apenas frente a K. rhizophila e ao S. aureus. A pasta Calen e a Calen/OZ ocasionaram halos de inibição maiores que a CHX quando o microrganismo indicador foi o E. faecalis. Pode-se concluir que a atividade antibacteriana, in vitro, dos 4 materiais obturadores de canais radiculares de dentes decíduos sobre cepas bacterianas comumente encontradas em infecções endodônticas pode ser apresentada numa ordem decrescente de eficácia da seguinte maneira: OZE>Calen/OZ>Sealapex>EndoREZ

Efeito antibacteriano do preparo biomecânico e do curativo de demora com pasta à base de hidróxido de cálcio (Calen) em dentes decíduos com lesão periapical

The aim of this study was to evaluate the antibacterial action of root canal mechanical preparation using 2.5% sodium hypochlorite as the irrigating solution and a calcium hydroxide paste as the antibacterial intracanal dressing in human primary teeth root canals with pulp necrosis and apical periodontitis by means of microbial culture. A total of 26 root canals of human primary teeth with pulp necrosis and apical periodontitis were used. Samples were collected before, 72h after biomechanical treatment and 72h after removal of the intracanal dressing. Comparison by Wilcoxon test showed that root canal mechanical preparation effectively eliminated all microorganisms in 20% of the root canals, and the intracanal dressing in 62.5%; however, the cumulative action of biomechanical treatment and intracanal dressing eliminated the microorganisms of 70% of the root canals (pO objetivo do presente estudo foi avaliar, por meio de cultura bacteriológica, a ação antibacteriana do preparo biomecânico utilizando como solução irrigadora o hipoclorito de sódio a 2,5% e da pasta Calen utilizada como curativo de demora em canais radiculares de dentes decíduos de humanos com necrose pulpar e lesão periapical. Foram selecionados 26 dentes decíduos de humanos portadores de necrose pulpar e lesão periapical. As colheitas microbiológicas foram efetuadas antes e 72 horas após o preparo biomecânico e 72 horas após a remoção do curativo de demora. A comparação por meio do teste de Wilcoxon mostrou que o preparo biomecânico foi eficaz na eliminação dos microrganismos dos canais radiculares em 20% dos casos e o curativo de demora em 62,5%, enquanto que a ação cumulativa do preparo biomecânico e do curativo de demora eliminou os microrganismos em 70,0% dos casos (

Vertical alveolar crest bone maintenance around implants in two-stage surgery: an in situ study in dogs

The aim of this study was to evaluate in situ changes in the alveolar crest bone height around immediate implant-supported crowns in comparison to tooth-supported crowns (control) with the cervical margins located at the bone crest level, without occlusal load. In Group I, after extraction of 12 mandibular premolars from 4 adult dogs, implants from Branemark System (MK III TiU RP 4.0 x 11.5 mm) were placed to retain complete acrylic crowns. In Group II, premolars were prepared to receive complete metal crowns. Sixteen weeks after placement of the crowns (38 weeks after tooth extraction), the height of the alveolar bone crest was measured with a digital caliper. Data were analyzed statistically by the Mann-Whitney test at 5% significance level. The in situ analysis showed no statistically significant difference (p=0.880) between the implant-supported and the tooth-supported groups (1.528 + 0.459 mm and 1.570 + 0.263 mm, respectively). Based on the findings of the present study, it may be concluded that initial peri-implant bone loss may result from the remodeling process necessary to establish the biological space, similar to which occurs with tooth-supported crowns.O objetivo do presente estudo foi comparar in situ modificações ocorridas na crista óssea alveolar induzidas por implantes imediatos e às induzidas por dentes naturais, ambos preparados para suportarem dispositivos protéticos situados sobre a margem óssea cervical, sem carga oclusal. No grupo I, após a extração de 12 pré-molares inferiores de 4 cães adultos, foram instalados implantes do Sistema Branemark (MK III TiU RP 4,0 x 11,5 mm) e coroas totais acrílicas. No grupo II, os pré-molares, foram submetidos a preparos convencionais, sendo cimentadas coroas totais metálicas. Após 16 semanas da instalação das coroas (38 semanas após a extração), a reabsorção da crista óssea alveolar foi avaliada in situ, por meio da mensuração das peças, com paquímetro digital. Para obtenção das medidas do grupo I, os pontos de referência foram a plataforma de assentamento do implante e a crista óssea alveolar. No grupo II, a posição do limite cervical da prótese e o início da crista óssea. Os valores obtidos foram comparados pelo teste de Mann-Whitmey com nível de significância de 5%. A média de reabsorção da crista óssea foi de 1,528 + 0,459 mm para o grupo I e de 1,570 + 0,263 mm para o grupo II, não havendo diferença estatisticamente significante (p=0,880) entre os grupos. Os resultados do presente estudo permitiram concluir que a reabsorção perimplantar inicial que ocorre na crista óssea resulta de um padrão de remodelação necessário para o estabelecimento do espaço biológico na área, assim como ocorre nos dentes naturais preparados para receberem próteses convencionais

Histological study of the effect of some irrigating solutions on bacterial endotoxin in dogs

O objetivo deste estudo foi avaliar, histopatologicamente, o efeito do preparo biomecânico com diferentes soluções irrigadoras em dentes de cães preenchidos com LPS bacteriano após pulpectomia. Foram utilizados 120 canais radiculares de 6 cães, os quais foram preenchidos com solução de LPS após pulpectomia. As soluções irrigadoras usadas foram solução de hipoclorito de sódio a 1, 2.5 e 5% e solução de clorexidina a 2%. Nenhuma irrigação foi realizada no grupo controle. Os animais foram mortos após 60 dias, e os dentes foram fixados e desmineralizados. em seguida, cortes seriados de 6 µm de espessura foram corados com hematoxilina e eosina e Tricrômico de Mallory para análise histopatológica e Brown e Brenn para verificação da contaminação bacteriana. A avaliação demonstrou que o infiltrado inflamatório foi estatisticamente menos intenso nos grupos cujos canais radiculares foram irrigados com solução de hipoclorito de sódio a 5% e de clorexidina a 2%. Contudo, nenhuma das soluções irrigadoras inativou completamente os efeitos deletérios do LPS. O preparo biomecânico coadjuvado por diferentes soluções irrigadoras não inativaram completamente a endotoxina.The aim of this study was to evaluate, histopathologically, the effectiveness of mechanical preparation of root canals using different irrigating solutions in dog teeth filled with LPS after pulpectomy. A total of 120 root canals of 6 mongrel dogs were filled with a solution of LPS after pulpectomy. The irrigating solutions used were saline, 1, 2.5, and 5% sodium hypochlorite, and 2% chlorhexidine. No irrigation was used in the control group. The animals were sacrificed after 60 days and the teeth were fixed and demineralized. Subsequently, serial 6-µm sections were stained with hematoxylin and eosin and Mallory's trichrome for histopathological analysis and Brown-Brenn for verification of bacterial contamination. Analysis showed that the inflammatory infiltrate was statistically less intense in the groups in which the root canals were irrigated with 5% sodium hypochlorite and 2% chlorhexidine. However, none of the irrigating solutions completely inactivated the harmful effects of LPS. Mechanical preparation associated with different irrigating solutions did not completely inactivate LPS.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP