Molecular cloning and functional characterization of brefeldin A-ADP-ribosylated substrate. A novel protein involved in the maintenance of the Golgi structure.

Brefeldin A (BFA) is a fungal metabolite that disassembles the Golgi apparatus into tubular networks and causes the dissociation of coatomer proteins from Golgi membranes. We have previously shown that an additional effect of BFA is to stimulate the ADP-ribosylation of two cytosolic proteins of 38 and 50 kDa (brefeldin A-ADP-riboslyated substrate (BARS)) and that this effect greatly facilitates the Golgi-disassembling activity of the toxin. In this study, BARS has been purified from rat brain cytosol and microsequenced, and the BARS cDNA has been cloned. BARS shares high homology with two known proteins, C-terminal-binding protein 1 (CtBP1) and CtBP2. It is therefore a third member of the CtBP family. The role of BARS in Golgi disassembly by BFA was verified in permeabilized cells. In the presence of dialyzed cytosol that had been previously depleted of BARS or treated with an anti-BARS antibody, BFA potently disassembled the Golgi. However, in cytosol complemented with purified BARS, or even in control cytosols containing physiological levels of BARS, the action of BFA on Golgi disassembly was strongly inhibited. These results suggest that BARS exerts a negative control on Golgi tubulation, with important consequences for the structure and function of the Golgi complex

Indagaciones sobre la experiencia de alumnos en el aprendizaje de la investigación científica en psicología

El presente trabajo continúa las indagaciones docentes que venimos realizando respecto a los procesos de enseñanza y de aprendizaje de la metodología de la investigación científica. Nuestro interés prioritario está dirigido a que los estudiantes puedan considerar la actividad de investigación en la disciplina como un ámbito importante de aplicación y desempeño profesional. En esta oportunidad, presentamos conclusiones parciales a partir de los resultados obtenidos sobre las expectativas, intereses y/o motivaciones de los alumnos de grado respecto del área de la investigación y metodología científica en Psicología. A partir de los mismos, sostenemos la necesidad de una revisión constante de las prácticas docentes en el área mencionada, contextualizándolas en el marco de los desafíos actuales. Reflexionamos, finalmente, sobre las carencias académicas del conocimiento trasmitido en cuestiones metodológicas y consideramos de suma importancia la articulación de lo enseñado con proyectos de investigación propios de la disciplina.Trabajo publicado en Memorias del III Congreso Internacional de Investigación y Práctica Profesional en Psicología, XVIII Jornadas de Investigación y Séptimo Encuentro de Investigadores en Psicología del MERCOSUR: Estudios interdisciplinarios y nuevos desarrollos. Facultad de Psicología, Universidad de Buenos Aires, 2011.Facultad de Psicologí

Indagaciones sobre la experiencia de alumnos en el aprendizaje de la investigación científica en psicología

El presente trabajo continúa las indagaciones docentes que venimos realizando respecto a los procesos de enseñanza y de aprendizaje de la metodología de la investigación científica. Nuestro interés prioritario está dirigido a que los estudiantes puedan considerar la actividad de investigación en la disciplina como un ámbito importante de aplicación y desempeño profesional. En esta oportunidad, presentamos conclusiones parciales a partir de los resultados obtenidos sobre las expectativas, intereses y/o motivaciones de los alumnos de grado respecto del área de la investigación y metodología científica en Psicología. A partir de los mismos, sostenemos la necesidad de una revisión constante de las prácticas docentes en el área mencionada, contextualizándolas en el marco de los desafíos actuales. Reflexionamos, finalmente, sobre las carencias académicas del conocimiento trasmitido en cuestiones metodológicas y consideramos de suma importancia la articulación de lo enseñado con proyectos de investigación propios de la disciplina.Trabajo publicado en Memorias del III Congreso Internacional de Investigación y Práctica Profesional en Psicología, XVIII Jornadas de Investigación y Séptimo Encuentro de Investigadores en Psicología del MERCOSUR: Estudios interdisciplinarios y nuevos desarrollos. Facultad de Psicología, Universidad de Buenos Aires, 2011.Facultad de Psicologí

Pupillary Light Reflexes are Associated with Autonomic Dysfunction in Bolivian Diabetics But Not Chagas Disease Patients

Autonomic dysfunction is common in Chagas disease and diabetes. Patients with either condition complicated by cardiac autonomic dysfunction face increased mortality, but no clinical predictors of autonomic dysfunction exist. Pupillary light reflexes (PLRs) may identify such patients early, allowing for intensified treatment. To evaluate the significance of PLRs, adults were recruited from the outpatient endocrine, cardiology, and surgical clinics at a Bolivian teaching hospital. After testing for Chagas disease and diabetes, participants completed conventional autonomic testing (CAT) evaluating their cardiovascular responses to Valsalva, deep breathing, and orthostatic changes. PLRs were measured using specially designed goggles, then CAT and PLRs were compared as measures of autonomic dysfunction. This study analyzed 163 adults, including 96 with Chagas disease, 35 patients with diabetes, and 32 controls. PLRs were not significantly different between Chagas disease patients and controls. Patients with diabetes had longer latency to onset of pupil constriction, slower maximum constriction velocities, and smaller orthostatic ratios than nonpatients with diabetes. PLRs correlated poorly with CAT results. A PLR-based clinical risk score demonstrated a 2.27-fold increased likelihood of diabetes complicated by autonomic dysfunction compared with the combination of blood tests, CAT, and PLRs (sensitivity 87.9%, specificity 61.3%). PLRs represent a promising tool for evaluating subclinical neuropathy in patients with diabetes without symptomatic autonomic dysfunction. Pupillometry does not have a role in the evaluation of Chagas disease patients

La experiencia académica en la enseñanza y el aprendizaje de la investigación científica en Psicología

El propósito general de este trabajo es presentar algunas puntualizaciones respecto de la formación del psicólogo en metodología científica. En primer lugar, se hará referencia a dos niveles de análisis interdependientes: el macro y el microcontextual, planteando situaciones propias de la Psicología como disciplina y profesión. En segundo lugar, exponemos algunas reflexiones sobre las prácticas de enseñanza y de aprendizaje surgidas de nuestra experiencia de grado en el área de la metodología. A partir de un trabajo de reconstrucción crítica de la tarea docente, y teniendo en cuenta los niveles de contextos mencionados, nos hemos formulado los siguientes interrogantes: ¿qué contenidos puede enseñarse y aprenderse en el área de la metodología científica?; ¿hay prácticas científicas determinadas que deberían transmitirse?; ¿cómo se enseña y se aprende a “hacer ciencia”? Sostenemos que la metodología científica presenta peculiaridades que no se agotan en la transmisión de un saber; sino que siempre se pone en juego un saber-hacer específico, convocando la creatividad propia de la tarea docente para tal fin. Desde una perspectiva de enfoque multirreferencial concluimos que es necesario recuperar la naturaleza propia de la relación educativa en cada espacio curricular, atendiendo a la tensión siempre existente entre lo que debe y merece ser enseñado.Trabajo publicado en Memorias II Congreso Internacional de Investigación y Práctica Profesional en Psicología, XVII Jornadas de Investigación y VI Encuentro de Investigadores en Psicología del MERCOSUR Clínica e Investigación. Contribuciones a las Problemáticas Sociales. Tomo III. Facultad de Psicología, Universidad de Buenos Aires, 2010.Facultad de Psicologí

La experiencia académica en la enseñanza y el aprendizaje de la investigación científica en Psicología

El propósito general de este trabajo es presentar algunas puntualizaciones respecto de la formación del psicólogo en metodología científica. En primer lugar, se hará referencia a dos niveles de análisis interdependientes: el macro y el microcontextual, planteando situaciones propias de la Psicología como disciplina y profesión. En segundo lugar, exponemos algunas reflexiones sobre las prácticas de enseñanza y de aprendizaje surgidas de nuestra experiencia de grado en el área de la metodología. A partir de un trabajo de reconstrucción crítica de la tarea docente, y teniendo en cuenta los niveles de contextos mencionados, nos hemos formulado los siguientes interrogantes: ¿qué contenidos puede enseñarse y aprenderse en el área de la metodología científica?; ¿hay prácticas científicas determinadas que deberían transmitirse?; ¿cómo se enseña y se aprende a “hacer ciencia”? Sostenemos que la metodología científica presenta peculiaridades que no se agotan en la transmisión de un saber; sino que siempre se pone en juego un saber-hacer específico, convocando la creatividad propia de la tarea docente para tal fin. Desde una perspectiva de enfoque multirreferencial concluimos que es necesario recuperar la naturaleza propia de la relación educativa en cada espacio curricular, atendiendo a la tensión siempre existente entre lo que debe y merece ser enseñado.Trabajo publicado en Memorias II Congreso Internacional de Investigación y Práctica Profesional en Psicología, XVII Jornadas de Investigación y VI Encuentro de Investigadores en Psicología del MERCOSUR Clínica e Investigación. Contribuciones a las Problemáticas Sociales. Tomo III. Facultad de Psicología, Universidad de Buenos Aires, 2010.Facultad de Psicologí

La experiencia académica en la enseñanza y el aprendizaje de la investigación científica en Psicología

El propósito general de este trabajo es presentar algunas puntualizaciones respecto de la formación del psicólogo en metodología científica. En primer lugar, se hará referencia a dos niveles de análisis interdependientes: el macro y el microcontextual, planteando situaciones propias de la Psicología como disciplina y profesión. En segundo lugar, exponemos algunas reflexiones sobre las prácticas de enseñanza y de aprendizaje surgidas de nuestra experiencia de grado en el área de la metodología. A partir de un trabajo de reconstrucción crítica de la tarea docente, y teniendo en cuenta los niveles de contextos mencionados, nos hemos formulado los siguientes interrogantes: ¿qué contenidos puede enseñarse y aprenderse en el área de la metodología científica?; ¿hay prácticas científicas determinadas que deberían transmitirse?; ¿cómo se enseña y se aprende a “hacer ciencia”? Sostenemos que la metodología científica presenta peculiaridades que no se agotan en la transmisión de un saber; sino que siempre se pone en juego un saber-hacer específico, convocando la creatividad propia de la tarea docente para tal fin. Desde una perspectiva de enfoque multirreferencial concluimos que es necesario recuperar la naturaleza propia de la relación educativa en cada espacio curricular, atendiendo a la tensión siempre existente entre lo que debe y merece ser enseñado.Trabajo publicado en Memorias II Congreso Internacional de Investigación y Práctica Profesional en Psicología, XVII Jornadas de Investigación y VI Encuentro de Investigadores en Psicología del MERCOSUR Clínica e Investigación. Contribuciones a las Problemáticas Sociales. Tomo III. Facultad de Psicología, Universidad de Buenos Aires, 2010.Facultad de Psicologí

Toward Improving Early Diagnosis of Congenital Chagas Disease in an Endemic Setting.

BACKGROUND: Congenital Trypanosoma cruzi transmission is now estimated to account for 22% of new infections, representing a significant public health problem across Latin America and internationally. Treatment during infancy is highly efficacious and well tolerated, but current assays for early detection fail to detect >50% of infected neonates, and 9-month follow-up is low. METHODS: Women who presented for delivery at 2 urban hospitals in Santa Cruz Department, Bolivia, were screened by rapid test. Specimens from infants of infected women were tested by microscopy (micromethod), quantitative PCR (qPCR), and immunoglobulin (Ig)M trypomastigote excreted-secreted antigen (TESA)-blots at birth and 1 month and by IgG serology at 6 and 9 months. RESULTS: Among 487 infants of 476 seropositive women, congenital T. cruzi infection was detected in 38 infants of 35 mothers (7.8%). In cord blood, qPCR, TESA-blot, and micromethod sensitivities/specificities were 68.6%/99.1%, 58.3%/99.1%, and 16.7%/100%, respectively. When birth and 1-month results were combined, cumulative sensitivities reached 84.2%, 73.7%, and 34.2%, respectively. Low birthweight and/or respiratory distress were reported in 11 (29%) infected infants. Infants with clinical signs had higher parasite loads and were significantly more likely to be detected by micromethod. CONCLUSIONS: The proportion of T. cruzi-infected infants with clinical signs has fallen since the 1990s, but symptomatic congenital Chagas disease still represents a significant, albeit challenging to detect, public health problem. Molecular methods could facilitate earlier diagnosis and circumvent loss to follow-up but remain logistically and economically prohibitive for routine screening in resource-limited settings

Molecular mechanism and functional role of brefeldin A-mediated ADP-ribosylation of CtBP1/BARS

ADP-ribosylation is a posttranslational modification that modulates the functions of many target proteins. We previously showed that the fungal toxin brefeldin A (BFA) induces the ADP-ribosylation of C-terminal-binding protein-1 short-form/BFA-ADP-ribosylation substrate (CtBP1-S/BARS), a bifunctional protein with roles in the nucleus as a transcription factor and in the cytosol as a regulator of membrane fission during intracellular trafficking and mitotic partitioning of the Golgi complex. Here, we report that ADP-ribosylation of CtBP1-S/BARS by BFA occurs via a nonconventional mechanism that comprises two steps: (i) synthesis of a BFA-ADP-ribose conjugate by the ADP-ribosyl cyclase CD38 and (ii) covalent binding of the BFA-ADP-ribose conjugate into the CtBP1-S/BARS NAD(+)-binding pocket. This results in the locking of CtBP1-S/BARS in a dimeric conformation, which prevents its binding to interactors known to be involved in membrane fission and, hence, in the inhibition of the fission machinery involved in mitotic Golgi partitioning. As this inhibition may lead to arrest of the cell cycle in G2, these findings provide a strategy for the design of pharmacological blockers of cell cycle in tumor cells that express high levels of CD38

Novel Coronin7 interactions with Cdc42 and N-WASP regulate actin organization and Golgi morphology

YesThe contribution of the actin cytoskeleton to the unique architecture of the Golgi complex is manifold. An important player in this process is Coronin7 (CRN7), a Golgi-resident protein that stabilizes F-actin assembly at the trans-Golgi network (TGN) thereby facilitating anterograde trafficking. Here, we establish that CRN7-mediated association of F-actin with the Golgi apparatus is distinctly modulated via the small Rho GTPase Cdc42 and N-WASP. We identify N-WASP as a novel interaction partner of CRN7 and demonstrate that CRN7 restricts spurious F-actin reorganizations by repressing N-WASP ‘hyperactivity’ upon constitutive Cdc42 activation. Loss of CRN7 leads to increased cellular F-actin content and causes a concomitant disruption of the Golgi structure. CRN7 harbours a Cdc42- and Rac-interactive binding (CRIB) motif in its tandem β-propellers and binds selectively to GDP-bound Cdc42N17 mutant. We speculate that CRN7 can act as a cofactor for active Cdc42 generation. Mutation of CRIB motif residues that abrogate Cdc42 binding to CRN7 also fail to rescue the cellular defects in fibroblasts derived from CRN7 KO mice. Cdc42N17 overexpression partially rescued the KO phenotypes whereas N-WASP overexpression failed to do so. We conclude that CRN7 spatiotemporally influences F-actin organization and Golgi integrity in a Cdc42- and N-WASP-dependent manner.This work was supported by SFB 670 and DFG NO 113/22. K.B. was supported by a fellowship from the NRW International Graduate School “From Embryo to Old Age: the Cell Biology and Genetics of Health and Disease” (IGSDHD), Cologne