Analysis of HEV Neutralization Sites Using Monoclonal Antibodies Directed Against a Virus Capsid Protein

戊型肝炎是发展中国家的一种主要的急性肠道传染病。其在孕妇感染者的病死率却可高达20%，尤其是后3个月的妊娠晚期者最高可达56%。1986~1988年间我国新疆南部的HEV大流行造成了12万人发病，千余人死亡。目前，越来越多的证据表明戊型肝炎是一种人畜共患病。其危害日益被人们所重视。但由于至今尚未建立有效的HEV细胞培养模型或简便的病毒繁殖模型，国内外学者对戊型肝炎病毒的发病、致病机理和疫苗的研究都相对缓慢。HEV是一种无包膜二十面体对称结构RNA病毒，其主要免疫表位集中在病毒衣壳，由ORF2编码的单一蛋白。在大肠杆菌中表达的ORF2的一个片段（NE2）可以自发形成以二聚体为基础的多种聚合结构，...Hepatitis E Virus (HEV) has emerged to be one of the significant pathogens of acute hepatitis, and it often causes epidemic outbreaks. The large epidemic, which occurred in South Xinjiang of China, in 1986~1988, consisted of ~120 000 cases of hepatitis. More than 1 000 patients died in that outbreak. HEV is a non-enveloped RNA virus with an isosahedral capsid which consists of a single structural ...学位：理学博士院系专业：生命科学学院生物学系_细胞生物学学号：B20022600

单克隆抗体人源化研究进展

目前单克隆抗体大多数是鼠源的 ,在临床重复给药的治疗过程中有许多副作用。由于技术限制 ,最好的解决方法就是研制人源化抗体 ,以代替鼠源单抗用于临床。本文概述了几种常用的异源单抗人源化的方

网络综艺节目语言的语音特征及语音失范

网络综艺节目语言,是网络综艺节目中进行传播和交际的语言。网络综艺节目,作为"快餐"式娱乐文化的产物,具有较强的娱乐性、幽默性和随意性。网络综艺节目语言在语音方面,具有重音夸张化、语速多变化、语调丰富化及谐音随意化的特征。网络综艺节目语言的语音失范,表现为声韵调变异、多音字发音错误及字词音读错。国家社科基金项目——“国家语文政策视野下的网络语言规范化研究”(16BYY063

人CD4胞外区蛋白在杆状病毒-昆虫细胞系统中的表达纯化及性质鉴定

目的:通过条件优化实现人CD4蛋白胞外区在杆状病毒-昆虫细胞表达系统中的高效表达,并对纯化获得的人CD4蛋白胞外区进行抗原性与免疫原性分析。方法:通过选择人CD4分子胞外片段构建重组杆状病毒(p Ac-CD4),然后感染昆虫细胞进行蛋白的表达,采用镍离子亲和层析纯化。运用SDS-PAGE、Western blot、体积排阻色谱、ELISA、SPR法等分析纯化得到目的蛋白的理化性质和抗原性。通过弗氏佐剂与目的蛋白混合免疫BALB/c小鼠,监测小鼠免疫血清的抗体生成。结果:经纯化可获得纯度90%以上的人CD4蛋白,每升细胞培养液最终可获得11.2 mg的目的蛋白,且该人CD4胞外区蛋白具有良好的抗原性。小鼠血清监测结果显示人CD4蛋白能有效刺激机体产生免疫应答,显示其具有良好的免疫原性。结论:本研究通过杆状病毒-昆虫细胞系统进行高效表达,获得抗原性和免疫原性良好的人CD4胞外区蛋白,为HIV受体和感染的研究奠定基础。国家自然科学基金(No.81671645

HIV-1 Env三聚体抗原改造研究进展

HIV-1疫苗研发是当前艾滋病研究的一大热点,其病毒表面包膜糖蛋白Env三聚体介导病毒与细胞融合,是HIV-1疫苗研究的重要靶点。因此,设计并在体外表达类天然Env三聚体对HIV-1疫苗的研发具有重要的意义。近年来,Env三聚体研究取得了显著的进展。SOSIP、NFL2P、UFO等抗原改造方法实现了类天然Env三聚体的体外表达,逐步解决了改造抗原产量低、结构不稳定等问题,且表达的Env三聚体抗原能在动物免疫中诱导机体产生较高的中和抗体水平。Env三聚体改造方法促进了HIV-1疫苗的研究。文中综述了SOSIP、NFL2P、UFO三种HIV-1 Env三聚体抗原改造方法,对比各个改造方法优缺点,并结合自身工作提出相关建议,为后续HIV-1抗原的相关设计提供指导。国家自然科学基金(No.81671645)资助~

应用噬菌体随机肽库技术筛选戊型肝炎病毒中和表位模拟肽

以识别戊型肝炎病毒 (HEV)构象依赖性中和表位的单克隆抗体 8C11、8H3作为固相筛选分子 ,对噬菌体随机 7肽库进行 4轮筛选后 ,随机挑取单克隆噬菌体进行测序。合成优势 7肽序列基因 ,将其插入HBcAgAA78 83位置之中 ,进行原核表达 ,所获重组蛋白经蛋白印迹实验证实可与相应单抗结合 ,电镜下可见重组蛋白能形成与HBcAg相似的类病毒颗粒。化学合成单抗 8H3筛选出的优势 7肽 ,所获 7肽经生物传感器结合实验证实与单抗8H3结合。这些结果提示用噬菌体 7肽库可以筛选出部分模拟构象性表位的短肽 ,为亚单位疫苗的研制提供了新的思路

Efficacy and safety of raltegravir-based therapy in antiretroviral-naive patients with HIV-1 infection: A Meta-analysis

目的评价联合雷特格韦治疗方案用于人类免疫缺陷病毒-1 human immunodeficiency virus; 1,HIV-1)初次抗病毒治疗的安全性和有效性。方法检索联合雷特格韦用于HIV-1感染者初次抗病毒治疗的临床随机对照试验(randomized; controlled trial,RCT),采用Rev Man 5.2软件和Stata; 12.0进行Meta分析。结果纳入17个RCT,Meta分析结果:以血浆病毒载量0.05);治疗240周,试验组有效率高于对照组(70.2%和61.5%),合并效应量(RR = 1.15,95% CI: 1.03 ~; 1.28,P = 0.010)。试验组与对照组在腹泻、恶心、头晕、头痛、失眠等常见不良反应差异均无统计学意义(均有P; >0.05);其中96周及144/156周时脂质代谢异常增高合并效应量RR(95%; CI)分别低密度脂蛋白0.16(0.05~0.49)、0.20(0.08~0.48),甘油三酯0.12(0.02~; 0.59)、0.12(0.03~0.59),总胆固醇0.04(0.00~0.40)、0.04(0.00 ~; 0.34)。脂质代谢指标异常增高发生率,试验组均少于对照组,差异均有统计学意义(均有P 0.05) between the; raltegravir group and control group, proportion of patients with; virological response (plasma viral load 0.05) at weeks 48 and 96, respectively.; At weeks 96,144/156, the mean changes from baseline in LDL-cholesterol; (LDL) 0.16(0.05-0.49), 0.20 (0.08-0.48), triglyceride (TG); 0.12(0.02-0.59), 0.12(0.03-0.59) and total cholesterol (TC),; 0.04(0.00-0.40), 0.04(0.00-0.34) concen-trations, the raltegravir-based; regimens group had a lower incidence rate than the control group (all P; < 0.05). Conclusions Current evidence shows that the raltegravir-based; therapy had long-term and well tolerated antiretroviral activity, which; was non-inferior to current regimens recommended for; antiretroviral-native adults and adolescents with HIV-infection. Due to; limited quality and quantity of the included studies, more high quality; studies would be needed to verify the above conclusion.国家自然科学基金; 福建省科技创新平

抗HEV中和抗体13D8的单链抗体的构建及表达

目的 :降低HEV中和性单抗 (mAb) 13D8的鼠源性 ,表达其单链抗体 (scFv)。方法 :从分泌 13D8鼠mAb的杂交瘤细胞中 ,通过RT PCR克隆mAb的VL、VH 基因 ,并进一步组装成VH linker VL 型的scFv片段。将scFv片段克隆到pTO T7载体中 ,在大肠杆菌中进行表达。用ELISA、Westernblot检测scFv的活性。结果 :SDS PAGE表明 ,13D8的scFv在E .coli中得到高效表达 ,表达量达菌体总蛋白的 2 6 .8%左右 ,表达产物主要以包涵体的形式存在。间接ELISA和Westernblot检测表明 ,表达的 13D8的scFv能与HEVOFR2区中一段重组蛋白(NE2 )特异结合。竞争ELISA表明 ,scFv与原鼠mAb识别的为同一表位。结论 :成功地表达出具有免疫学活性的 13D8的scFv

可捕获HBV的preS1单克隆抗体的制备及性质初探

用天然乙型肝炎病毒(HBV)颗粒(Dane颗粒和管状颗粒)和HBV前S1(preS1)区基因工程重组蛋白GST-preS1联合免疫Balb/c小鼠,经杂交瘤技术制备了7株单克隆抗体(mAb),采用ELISA、免疫捕获PCR等方式鉴定其有关特性.各株mAb分别为IgG1和IgG2a,轻链均为κ型.腹水mAb的滴度为1×107~1×109.用间接法ELISA显示,所有7株preS1 mAb均可以识别HBV天然抗原,其中mAb 4D11与HBV天然抗原的结合能力最强.通过竞争抑制法ELISA检测推断preS1(21-47)上至少含有两个B细胞表位,mAb 4D11、1G5、7B6和7H11具有共同的B细胞抗原识别位点;mAb 3H5、6F1和2A6识别另外一个位点.本研究获得的可与HBV天然抗原结合的preS1单抗为HBV preS1检测试剂的研制提供了重要工具,对HBV preS1具有中和免疫活性抗原的设计及相关研究有重要帮助

戊型肝炎病毒衣壳蛋白中和表位间的构象诱导

重组蛋白NE2包含了戊型肝炎病毒(HEV)衣壳蛋白(pORF2)的aa394～606片段。在NE2上已鉴定出了2个HEV中和表位,并获得了3个识别中和表位的单克隆抗体(MAb)8C11、13D8和8H3。这3个MAb间的交叉阻断ELISA实验发现,8C11和13D8可以彼此完全阻断,8H3对8C11和13D8均不能阻断,而8C11非但不能阻断8H3,反而显著增强了8H3与抗原的结合。用生物传感器进行的抗体与抗原结合的动力学分析也证实了这一现象。这些结果提示,在NE2上8H3表位区域受到抗原上某些结构的掩盖,而8C11与NE2的结合引起了抗原空间结构的改变,导致了掩盖8H3表位的结构的去除和8H3表位的充分暴露。免疫捕获RT PCR发现,8C11同样可以显著增强8H3对天然HEV病毒的捕获能力,提示这种结合诱导的衣壳蛋白空间构象改变在天然HEV病毒颗粒上同样存在