pBR322-Red Mediated Gene Knockin,Sites and Expression in E.coli Chromosome

应用pBR322-Red介导的重组工程系统,kan/sacB选择反选择系统,双链线性DNA重组技术和重叠引物介导的DNA重组技术,将长度为1 653 bp的luc报告基因分别敲入到E.coliW 3110染色体lacZ,lacY和lacA基因的位置,建立了一系列具有新遗传表型的菌株:CWL2、CWL4和CWL6。荧光素酶分析表明,外源报告基因luc能在这3个结构基因处有效的组成型表达。为了进一步确定外源基因的表达情况,用霍乱毒素B亚单位基因ctxb替换了lacZ基因,构建了新菌株CWD1。证明了以单拷贝形式存在在大肠杆菌染色体CWD1上的ctxb基因能有效的表达CTB蛋白并能将其分泌至细胞外培养液中。结果初步确定了大肠杆菌染色体上的lac操纵子结构基因位点适合外源基因的敲入和表达。Genes lacZ,lacY and lacA in the lac opron of E.coli chromosome were respectively substituted with gene luc by using plasmid pBR322-Red,selection-counterselection system kan/sacB and various strategies of Red homologous recombination including Red mediated linearized double-stranded DNA homologous recombination and Red mediated recombineering with overlapping single stranded DNA oligonucleotides.Then,a series of new strains,CWL2,CWL4 and CWL6,were constructed and we found that they can express protein Luc efficiently.To further study the expression of exogenous genes at the site of lacZ,we have constructed a strain named CWD1 by knockin the cholera toxin B subunit(ctxb) gene at the lacZ site,then we found that CWD1 can express protein CTB efficiently and CTB was secreted out of the cell.So we assured that the sites of structure genes in the lac operon of Escherichia coli chromosome were suitable for expressing foreign genes.军队“十五”医药卫生科学基金资助(编号:01MA089)~

中国海及邻近区域碳库与通量综合分析

中国海总面积约470万平方公里,纵跨热带、亚热带、温带、北温带等多个气候带.其中,南海北依\"世界第三极\"青藏高原、南邻\"全球气候引擎\"西太平洋暖池,东海拥有全球最宽的陆架之一,跨陆架物质运输显著,黄海是冷暖流交汇区域,渤海则是受人类活动高度影响的内湾浅海.中国海内有长江、黄河、珠江等大河输入,外邻全球两大西边界流之一的黑潮.这些鲜明的特色赋予了中国海碳储库和通量研究的典型代表意义.文章从不同海区（渤海、黄海、东海、南海）、不同界面（陆-海、海-气、水柱-沉积物、边缘海-大洋等）,以及不同生态系统（红树林、盐沼湿地、海草床、海藻养殖、珊瑚礁、水柱生态系统等）多层面对海洋碳库与通量进行了较系统地综合分析,初步估算了各个碳库的储量与不同碳库间的通量.就海气通量而言,渤海向大气中释放CO2约0.22Tg Ca-1,黄海吸收CO2约1.15Tg Ca-1,东海吸收CO2约6.92～23.30Tg Ca-1,南海释放CO2约13.86～33.60Tg Ca-1.如果仅考虑海-气界面的CO2交换,中国海总体上是大气CO2的\"源\",净释放量约6.01～9.33Tg Ca-1.这主要是由于河流输入以及邻近大洋输入所致.河流输入渤黄海、东海、南海的溶解无机碳（DIC）分别为5.04、14.60和40.14Tg Ca-1,而邻近大洋输入DIC更是高达144.81Tg Ca-1,远超中国海向大气释放的碳量.渤海、黄海、东海、南海的沉积有机碳通量分别为2.00、3.60、7.40、7.49Tg Ca-1.东海和南海向邻近大洋输送有机碳通量分别为15.25～36.70和43.39Tg Ca-1.就生态系统而言,中国沿海红树林、盐沼湿地、海草床有机碳埋藏通量为0.36Tg Ca-1,海草床溶解有机碳（DOC）输出通量为0.59Tg Ca-1;中国近海海藻养殖移出碳通量0.68Tg Ca-1,沉积和DOC释放通量分别为0.14和0.82Tg Ca-1.总计,中国海有机碳年输出通量为81.72～103.17Tg Ca-1.中国海的有机碳输出以DOC形式为主,东海向邻近大洋输出的DOC通量约15.00～35.00Tg Ca-1,南海输出约31.39Tg Ca-1.综上,尽管从海-气通量看中国海是大气CO2的\"源\",但考虑了河流、大洋输入、沉积输出以及微型生物碳泵（DOC转化输出）作用后,中国海是重要的储碳区.需要指出的是,文章数据是基于中国海各海区碳循环研究报道,鉴于不同研究方法上的差异,所得数据难免有一定的误差范围,亟待将来统一方法标准下的更多深入研究和分析.国家重点研发计划项目(编号:2016YFA0601400);;国家自然科学基金项目(批准号:91751207、91428308、41722603、41606153、41422603);;中央高校基础研究项目(编号:20720170107);;中海油项目(编号:CNOOC-KJ125FZDXM00TJ001-2014、CNOOCKJ125FZDXM00ZJ001-2014)资

The Study on Children’s Waste Sorting in Shenyang City, China.

We conducted a survey on the waste disposal situation and elementary school children’s waste sorting in Shenyang city, China, to check if the “class on waste” in elementary schools that we undertake in Japan is effective also in China. China’s population of 1,307.6 million (2005) accounts for 20% of the world population. Accompanying China’s economic progress, the waste problem is now a major issue. Also, local governments’ waste disposal costs are increasing every year. In this study, we researched the outline of waste disposal based on the case examples in Shenyang city, Liaoning province, an inland area of China. Furthermore, we conducted a questionnaire survey on how elementary school students considered and actually practiced waste sorting as citizens. The result revealed that the children’s enthusiasm for study on the environment and waste sorting was strong, but information supply by the government and education at school were insufficient

三相氧化法从大洋多金属结核中提取有价金属

研究采用三相氧化法从大洋多金属结核中提取有价金属的工艺过程。结果表明,在反应温度280～320℃,反应时间2～4h,碱锰比40～55,结核粒度68～90μm,空塔气速0.071～.127m/s的条件下,多金属结核中锰的转化率大于95%,铁、镍富集率高于98%,铜、钴富集率在95%以上。三相氧化法是一种切实可行的湿法处理大洋多金属结核的方法,既可实现产品的系列化和高值化,又能体现清洁生产和再生循环思想

深海锰结核液相氧化动力学

通过考察反应时间、反应温度以及氧分压对深海锰结核中锰的氧化的影响,研究深海锰结核在高浓氢氧化钾介质中的液相氧化宏观动力学.结果表明,在试验条件下,结核中锰的氧化反应符合未反应核收缩模型,表观活化能为53.26kJ/mol,反应受界面化学反应控制

海底锰结核中锰的提取与转化

为实现海底锰合理开发利用，文中采用三相氧化新方法从锰结核中提取锰，采用歧化和热分解对锰进行深度转化，实现了锰产品系列化、高值化，并为锰结核开发提供了新思路。初步实验研究表明：在适宜条件下，海底锰结核中的锰可以被有效提取与转化，该新工艺在技术上是切实可行的

深海锰结核处理技术及其发展趋势

深海锰结核中含有大量金属元素，若开发得当将是一种宝贵的陆地金属矿产替代资源。对半个世纪以来国内外开展的深海锰结核主要处理技术及其发展趋势进行了介绍。现有火法技术较适于处理高品位矿，工艺流程相对较短，但能耗较高；湿法技术较适于处理低品位及复杂矿，能耗低，但流程相对较长；火湿联合技术适用于不同含量、不同类型矿，但仍存在流程长、能耗高的缺点。近年来众多学者对湿法还原浸出作了有益的尝试，开辟了新的思路。指出更加注重综合利用和环保要求，开展现场加工等是未来锰结核处理技术的发展趋势

深海锰结核液相氧化动力学

通过考察反应时间、反应温度以及氧分压对深海锰结核中锰的氧化的影响,研究深海锰结核在高浓氢氧化钾介质中的液相氧化宏观动力学.结果表明,在试验条件下,结核中锰的氧化反应符合未反应核收缩模型,表观活化能为53.26kJ/mol,反应受界面化学反应控制

中国海底锰结核处理技术研究概况

21世纪是海洋的世纪。海底锰结核中含有大量的锰、铁、铜、钴、镍等金属元素,被公认为是一种重要的陆地矿产替代资源。自其被发现以来就引起了各国相关人士的极大关注,而如何合理开发利用海底锰结核、早日实现商业化生产则一直是关注的焦点所在。半个世纪以来,国内外众多学者进行了大量研究工作,提出了许多处理海底锰结核的工艺和方法,新的探索也一直在继续。本文重点对中国开展的海底锰结核处理技术及其非冶金加工利用的研究情况进行了介绍

深海锰结核处理技术及其发展趋势

深海锰结核中含有大量金属元素,若开发得当将是一种宝贵的陆地金属矿产替代资源。对半个世纪以来国内外开展的深海锰结核主要处理技术及其发展趋势进行了介绍。现有火法技术较适于处理高品位矿,工艺流程相对较短,但能耗较高;湿法技术较适于处理低品位及复杂矿,能耗低,但流程相对较长;火湿联合技术适用于不同含量、不同类型矿,但仍存在流程长、能耗高的缺点。近年来众多学者对湿法还原浸出作了有益的尝试,开辟了新的思路。指出更加注重综合利用和环保要求,开展现场加工等是未来锰结核处理技术的发展趋势