Establishment of a nude mouse model of glioma orthotopic xenograft with double-fluorescent labeling

目的建立一种稳定、可实时监测的胶质瘤原位移植瘤裸鼠模型。方法用带有荧光素酶（luciferase-Luc）和绿色荧光蛋白（green fluorescent protein-GFP）基因的慢病毒感染U251神经胶质瘤细胞,流式细胞仪筛选稳定表达GFP-Luc荧光的细胞系,并通过CCK-8实验、细胞周期实验、Transwell肿瘤迁移及侵袭实验等评价荧光细胞的增殖、迁移和侵袭能力是否改变;将细胞接种至裸鼠大脑尾状核,建立胶质瘤原位移植瘤模型,利用小鼠活体成像系统监测脑内肿瘤的生长情况,并通过石蜡切片,HE染色评价细胞在裸鼠脑内的病理特征及成瘤能力。结果成功构建稳定表达GFP荧光和luciferase荧光的U251胶质瘤细胞系及动物模型,慢病毒整合并未改变细胞的增殖、迁移及侵袭能力;模型生长周期适中,成瘤率高,瘤体在颅内生长稳定,HE切片符合人胶质瘤特征。结论双荧光标记的胶质瘤细胞相比于传统细胞更有利于胶质瘤动物模型的实验研究;U251-GFP-Luc胶质瘤细胞裸鼠模型,其肿瘤生长和病理特性与人胶质瘤相似,且可实时观察肿瘤生长,可作为胶质瘤实验研究的理想动物模型。Objective To establish a stable and real-time monitorable nude mouse model of orthotopic glioma xenograft. Methods U251 glioma cell line was infected by a leutiviral vector containing green fluorescent protein （GFP） and luciferase （Luc） gene. Ceils stably expressing fluorescence of GFP and Luc were sorted by flow cytometry. CCK-8 test and Transwell tumor invasion and migration assay were used to compare the biological features between the ceils stably expressing GFP-Luc fluorescence and cells without fluorescence. Then the ceils were implanted intracranially in the right caudate nucleus of athymic BaIb/c nude mice to establish the tumor model. The growth of intracerebral tumor was monitored over time by a bioluminescence imaging （BLI） system. Hematoxylin-eosin （HE） staining was used to evaluatethe histopathological features and tumorigenicity of the transplanted glioma cells in the brain of nude mice. Results U251 glioma cell line with stably expressing GFP-Luc fluorescence and the corresponding orthotopic xenograft model were successfully established. There was no statistically significant difference in the proliferation, invasion and migration abilities between the cells with stably expressing GFP-Luc fluorescence and the control cells. This model showed a high tumor formation rate and stable tumor growth, and takes a moderate time to establish this model. Conclusions Compared with the traditional glioma cells, GFP-Luc-transfected human glioma cells are more feasible for the studies of glioma in vivo. The tumor growth and pathological characteristics in this U251-GFP-Luc glioma model are similar to human glioma, and the growth of this tumor can be real-time monitored. It can be used as an ideal animal model for experimental studies of glioma.国家自然科学基金（编号：30970733）

遥感-岩石力学(III)——交汇断层粘滑的热红外辐射与声发射规律及其构造地震前兆意义

以构造地震孕震机制之三即交汇断层粘滑发震为模拟对象,利用双轴加载实验系统和红外热像仪对自然界经常出现的断层组合模式——不同交汇角度的组合断层的物理模型进行了室内加载实验,利用红外热像仪和声发射仪分别测定了加载过程中试样表面的红外辐射及断层活动的声发射时间序列。结果表明:(1) 声发射及红外辐射的时间序列特征受加载过程中试样的力学行为所控制,并表现出阶段性变化特点;(2) 声发射与红外辐射特征与断层几何结构有密切关系,当主应力与主断层成45°角时,红外辐射异常区主要沿主断层发育;(3) 垂直交汇的断层与斜交断层的声发射及红外辐射特征有明显差异,交汇角度(1°～90°)越大,交汇点处的红外辐射异常越明显

东北地区部分行业增值税转型的效应分析

东北部分行业增值税转型试点不会造成财政收入的较大波动;它对宏观经济的影响取决于获得抵扣资金的企业对抵扣资金的使用途径;转型对内资企业有利,尤其是对新设内资企业有利;本次转型对企业结构和投资决策有一定的影响,会导致企业行为一定扭曲;它还会促使企业进行避税。因此,在局部地区推行消费型增值税的正面作用并不明显,实行具有中国特色的收入型增值税将更有利于解决现行增值税的问题。国家自然科学基金资助项目;; 教育部“十五”规划项目

健康小鼠进食绣球菌对腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α的影响

测定健康小鼠进食绣球菌对腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响.SPF级Balb/C健康小鼠分组进食普通饲料、分别含绣球菌饲料、干品、浸汁饮水或其添加物组合、分别含酵母β-葡聚糖饲料、浸汁饮水或其添加物组合;进食一定时间后,分离腹腔巨噬细胞,使用含质量分数10%胎牛血清的RPMI1640培养液培养,TNF-α试剂盒检测上清液中的TNF-α质量浓度.结果表明,强化进食绣球菌组合(绣球菌饲料+干品+浸汁)的小鼠与对照组或酵母β-葡聚糖组合(酵母β-葡聚糖饲料+浸汁)小鼠相比,体质量不升反降;分离的腹腔巨噬细胞培养6 d,酶联免疫吸附测定技术检测上清液TNF-α,其质量浓度远高于其它两组.研究提示,强化绣球菌进食组合能够提高健康小鼠免疫力,并可能有利于控制体质量.福建省自然科学基金资助项目(2013J01394);;吴阶平医学基金会临床科研项目(320.6750.15231);;空军军医大学国重开放课题(CBSKL201729);;福建省中医药大学校管课题(XB2015077

二种多管水母光蛋白基因的分离、表达及生物活性初步研究

分别从厦门东海域的大型多管水母和细小多管水母中分离到了新的光蛋白基因aeqxm和aeqxxm,并在大肠杆菌中进行了表达.aeqxm和aeqxxmDNA序列的编码区总长均为585bp,无内含子序列,推导的氨基酸序列总长均为195个氨基酸.aeqxm,aeqxxmDNA和AEVAQ440XcDNA之间的核苷酸序列同源性分别为80 7%,85 1%,aeqxm和aeqxxmDNA的核苷酸序列同源性为87 2%.原光蛋白apoaeqxm,apoaeqxxm与AEVAQ440X编码的氨基酸序列之间的同源性分别为84 7%,84 2%,apoaeqxm和apoaeqxxm的氨基酸序列之间的同源性为94 4%.分别将aeqxm和aeqxxm基因克隆至pTO-T7表达载体,apoaeqxm,apoaeqxxm在大肠杆菌中的表达量都达到40%左右.取菌体超声上清与腔肠动物荧光素f、巯基乙醇混合再生后,加入CaCl2,用荧光全谱仪检测到470nm处的瞬时发光,表明表达的apoaeqxm,apoaeqxxm具有正常的生物学功能

压缩拐角激波与旁路转捩边界层干扰数值研究

为了研究激波与旁路转捩边界层的干扰机理,采用直接数值模拟(DNS)方法对来流马赫数Ma∞=2.9,24°压缩拐角内激波与转捩边界层的相互作用进行了系统的研究。考察了旁路转捩干扰下压缩拐角内分离区形态和激波波系结构的典型特征。比较了转捩干扰与湍流干扰流动结构的差异,并分析了造成差异的原因。研究了拐角内转捩边界层的演化特性,探讨了转捩干扰下脉动峰值压力和峰值摩阻的分布规律及形成机制。研究结果表明:相较于湍流干扰,两侧发卡涡串的展向挤压使得分离区起始点以V字型分布,且分离激波沿展向以破碎状态为主,激波脚呈现多层结构;拐角内的干扰作用急剧加速了边界层的转捩过程;转捩干扰下的拐角内峰值脉动压力以单峰结构出现在分离区的下游,同时干扰区内的强湍动能和高雷诺剪切应力使得其局部峰值摩阻系数要高于湍流干扰

一种高效、稳定的分泌型原核表达载体的构建及应用

以本室构建的原核表达载体pTO-T7为基础载体,PCR合成ompT引导序列,插入该载体多克隆位点上游,构建了分泌型原核表达载体pTO-OT。将2个外源基因克隆至pTO-OT,2个重组质粒在大肠杆菌中均得以高效表达,表达产量在25％～34％之间。Western blot分析证实了融合蛋白可被大肠杆菌信号肽酶有效地切割,并具有良好的免疫学活性。对重组表达菌株的连续传代实验证实了该表达载体具有良好的表达稳定性,显示了其在基因工程中的应用价值

一种高效、稳定的分泌型原核表达载体的构建及应用

以本室构建的原核表达载体pTO-T7为基础载体,PCR合成ompT引导序列,插入该载体多克隆位点上游,构建了分泌型原核表达载体pTO-OT。将2个外源基因克隆至pTO-OT,2个重组质粒在大肠杆菌中均得以高效表达,表达量为25％-30％。Western印迹分析证实了重组蛋白在大肠杆菌中表达后可被信号肽酶有效识别,切割后的重组蛋白具有良好的免疫学活性。对重组表达菌株的连续传代实验证实了该表达载体具有良好的遗传稳定性,显示了该原核表达载体在基因工程中的应用价值

轴对称主动冷却发动机燃烧室耦合传热分析方法研究

本文针对轴对称圆形截面的主动冷却发动机燃烧室开展了耦合传热分析方法的研究，提出了一套燃气/固壁/冷却油耦合传热分析的分析与设计方法，对设计的模型亚燃主动冷却燃烧室进行了闭环试验测试。试验测量结果与使用分析方法预测的计算结果符合的较好，说明此套耦合分析方法具有一定的可靠性和准确性，能够应用于指导工程设计。此外，比较研究了不同燃料组分替代模型计算结果的异同

影响根癌农杆菌介导的香蕉遗传转化因素研究

以香蕉 (Musa spp.)的横切薄层切片 (transverse thin cell layer,t TCL)外植体作为转化受体 ,通过对外植体 GUS基因瞬时表达率的研究以及受体材料对抗生素的敏感性实验 ,找出了较适合的外植体转化条件和培养条件。研究表明 :用低代香蕉无菌苗为材料 ,横切薄层切片芽再生率高 ,有较高的 GUS基因瞬时表达率 ;香蕉对头孢霉素 (Cefotaxime)和羧苄霉素 (Carbenicillin)不敏感 ,而对潮霉素(Hygromycin)很敏感 ;菌液的预处理是影响香蕉转化的主要因子 ,重悬液中的蔗糖浓度也是影响转化的因素之一 ,对遗传转化有明显的促进作