Expression of the coat protein gene of IHHNV in shrimp in Pichia Pastoris

对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒是“须向OIE申报的甲壳动物重要疾病“之一。将该病毒主要结构蛋白基因克隆至毕赤酵母穿梭表达质粒PPIC9k,构建重组表达载体(命名为PPIC9k-IV),限制性内切酶bglⅡ对其进行酶切线性化,采用电穿孔法转化到毕赤酵母gS115宿主菌。采用PCr方法分析和g418筛选来鉴定重组的毕赤酵母,诱导表达的产物分别进行ElISA分析或WESTErn blOT免疫印迹鉴定,分泌表达产物分子量大小为40ku左右,原核表达时制备的兔抗对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒衣壳蛋白的血清可与真核表达的目的蛋白发生特异性反应。The infectious hypodermal & haematopoietic necrosis virus is one of the main diseases of the penaeid shrimp.The gene of coat protein of IHHNV was constructed into Pichia Pastoris secretory expression vectors pPIC9K,named pPIC9K-IV.The recombinant plasmid pPIC9K-IV was linearized with BglⅡ,and then was transformed into Pichia Pastoris GS115 by electroporation.After PCR analysis and G418 screening,the pPIC9KIV recombinant was expressed with 0.8%(V/V) methanol.The expression product was confirmed by Western blot and ELISA analysis.The results showed that the coat protein was successfully expressed,its product was about 40ku,and could recognized specifically by rabbit polyclonal anti-serum.国家质检总局科技基金资助项目(2006IK015

Characterization and immunoprotective effect of SjIrV1,a 66 kDa calcium-binding protein from Schistosoma japonicum

钙结合蛋白是日本血吸虫生长发育不可缺少的蛋白,具有非常广泛而重要的功能。在课题组日本血吸虫体被表膜蛋白研究基础上,利用PCr技术克隆了中国大陆株日本血吸虫66 kdA钙结合蛋白(SJIrV1)编码基因的CdnA序列,blAST分析与菲律宾株日本血吸虫SJIrV1 CdnA编码序列一致,荧光定量PCr分析表明该基因在童虫和成虫期不同发育阶段均有表达,其中在35 d和42 d成虫中表达量较高,在42 d雌虫中该基因表达水平远高于42 d雄虫。构建重组表达质粒PET28A(+)-SJIrV1,在大肠杆菌中成功诱导表达,重组蛋白主要以可溶性形式存在,通过高效液相色谱法(rP-HPlC)以及串联质谱法(MS/MS)鉴定所获蛋白为目的蛋白SJIrV1。蛋白质印迹(WESTErn blOTTIng)分析结果显示重组蛋白能被感染日本血吸虫鼠血清和免疫鼠血清所识别,SJIrV1蛋白在虫体各发育阶段中均表达。免疫荧光染色实验观察表明SJIrV1主要分布在日本血吸虫成虫的表膜。应用重组蛋白免疫bAlb/C小鼠后,免疫鼠血清中检测到较高水平的特异性Igg、Igg1和Igg2A抗体。结果表明SJIrV1可能在日本血吸虫的生长发育过程中起着重要作用。Calcium-binding protein is an indispensable protein which performs extensive and important functions in the growth of Schistosoma japonicum.Based on our primary study on tegument surface proteins of S.japonicun,a cDNA encoding a 66 kDa calcium-binding protein of S.japonicum(Chinese strain) was cloned,sequence analysis revealed that it was identical with that of SjIrV1 of Philippines strains S.japonicum.The expression of SjIrV1 were detected by Real-time PCR,using cDNA templates isolated from 7,14,21,28,35 and 42 days worms and the results revealed that the gene was expressed in all investigated stages,and the mRNA level of SjIrV1 is much higher in 42 d female worms than that in 42 d male worms.The cDNA containing the open reading frame of IrV1 was subcloned into a pET28a(+) vector and transformed into competent Escherichia coli BL21 for expression.The recombinant protein was purified using a Ni-NTA purification system,and confirmed by high performance liquid chromatography(RP-HPLC) and tandem mass spectrometry(MS/MS).Western blotting analysis showed that recombinant SjIrV1(rSjIrV1) could be recognized by the S.japonicum infected mouse serum and the mouse serum specific to rSjIrV1,respectively.Immunofluorescence observation exhibited that SjIrV1 was mainly distributed on the tegument of the 35-day adult worms.ELISA test revealed that IgG,IgG1 and IgG2a antibodies are significantly increased in the serum of rSjIrV1 vaccinated mice.The study suggested that rSjIrV1 might play an important role in the development of S.japonicum.国家自然科学基金(No.31172315); 上海科技发展基金(No.12140902700); 中国博士后科学基金(No.2012M510630)资助~

儿童考试焦虑量表简版的修订

为修订儿童考试焦虑量表(Children&rsquo;s Test Anxiety Scale,CTAS)的简版,使用儿童考试焦虑量表对563名3～6年级小学生进行测试,并对测试数据进行探索性因素分析和验证性因素分析。结果表明,儿童考试焦虑量表简版共12题,总量表Cronbach&rsquo;s&alpha;系数为0.82,担忧思维、生理反应、任务外行为的Cronbach&rsquo;s&alpha;系数分别为0.83、0.72、0.68;重测信度为0.55;儿童考试焦虑与学业效能感、抑郁、焦虑呈显著相关(P&lt;0.05)。说明儿童考试焦虑量表简版的信效度良好,适用于3-6年级小学生群体。</p

水孔蛋白协助玉米副卫细胞中Ｈ２Ｏ２ 的跨膜转运

【目的】探索玉米气孔副卫细胞中Ｈ２Ｏ２ 的来源，以阐明禾本科植物气孔运动过程中保卫细胞和副卫 细胞协同调节的机理。【方法】采用细胞化学方法对Ｈ２Ｏ２ 进行亚细胞荧光定位，以Ｔｕｂｕｌｉｎ 和ＧＡＰＤＨ 为内参基 因，利用ｑＰＣＲ技术，对玉米水孔蛋白基因ＺｍＰＩＰ２；４、ＺｍＰＩＰ２；５和ＺｍＰＩＰ２；６表达量进行分析，从而确定水孔蛋 白协助玉米副卫细胞中Ｈ２Ｏ２ 的跨膜转运。【结果】光暗处理组，加水孔蛋白抑制剂ＡｇＮＯ３ 与不加ＡｇＮＯ３ 副卫细胞 中的Ｈ２Ｏ２ 积累相反；外源Ｈ２Ｏ２ 引起副卫细胞中Ｈ２Ｏ２ 积累，先加入水孔蛋白抑制剂ＡｇＮＯ３ 再加外源Ｈ２Ｏ２ 处理 后副卫细胞中Ｈ２Ｏ２ 不积累；短细胞发生后，副卫细胞中的Ｈ２Ｏ２ 开始积累，同时ＺｍＰＩＰ２；５基因的相对表达量上调； 随着水分胁迫程度增加，ＺｍＰＩＰ２；４、ＺｍＰＩＰ２；５、ＺｍＰＩＰ２；６基因的相对表达量随短细胞发生上调。【结论】水孔蛋白具 有转运Ｈ２Ｏ２ 的功能，玉米叶片下表皮副卫细胞中的Ｈ２Ｏ２ 是外源的，其积累和清除可能与水孔蛋白ＺｍＰＩＰ２；５的转运 有关。</p

离子液体中催化解聚木质素研究现状

木质素是木质纤维素的重要组成部分,在木质纤维素中的含量达15%~35%,仅次于纤维素.木质素是一种具有无定形复杂结构的高分子芳香聚合物,由三种苯丙烷类单体芥子醇、松柏醇和p-香豆醇的酶促脱氢聚合产生.离子液体(ILs)作为一种功能化介质具有高沸点、难挥发、可设计性等特质,对木质素具有较好的溶解能力,这对木质素转化过程中的均相化意义重大.因此,离子液体中催化转化木质素为高附加值化学品的研究越来越受关注.本文综述了离子液体作为溶剂和催化剂将木质素或木质素模型化合物有效转化为增值芳香化合物的相关研究,分析并展望了该领域面临的挑战和机遇

离子液体中催化解聚木质素研究现状

木质素是木质纤维素的重要组成部分,在木质纤维素中的含量达15%~35%,仅次于纤维素.木质素是一种具有无定形复杂结构的高分子芳香聚合物,由三种苯丙烷类单体芥子醇、松柏醇和p-香豆醇的酶促脱氢聚合产生.离子液体(ILs)作为一种功能化介质具有高沸点、难挥发、可设计性等特质,对木质素具有较好的溶解能力,这对木质素转化过程中的均相化意义重大.因此,离子液体中催化转化木质素为高附加值化学品的研究越来越受关注.本文综述了离子液体作为溶剂和催化剂将木质素或木质素模型化合物有效转化为增值芳香化合物的相关研究,分析并展望了该领域面临的挑战和机遇

黄芪水提取物对apoe小鼠动脉粥样硬化斑块部位基质金属蛋白酶9表达及斑块形成的影响

目的探讨黄芪水提取物对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-) 小鼠主动脉粥样硬化斑块部位基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达及斑块形成的影响。 方法将48只8周龄雄性ApoE-/-小鼠给予高脂饮食喂养，小鼠20周龄时根据随机表按照完全随机法分为4组各12只,即对照组、阿托伐他汀组、黄芪水提取物低剂量组及黄芪水提取物高剂量组。对照组给予生理盐水0.2 ml/d，阿托伐他汀组给予阿托伐他汀10 mg·kg~(-1)·d~(-1)，黄芪水提取物低剂量给予黄芪水提取物 1.25 g·kg-1·d-1、黄芪水提取物高剂量给予黄芪水提取物 5 g·kg-1·d-1灌胃。予给药12周末处死各组小鼠。应用ELISA法测定血清氧化低密度脂蛋白（oxLDL）含量；HE染色、油红O染色观察小鼠主动脉粥样斑块内脂质的形成；用免疫荧光、免疫组化染色法检测观察粥样斑块部位巨噬细胞浸润水平及MMP-9表达。 结果黄芪水提取物明显降低ApoE-/-小鼠，其中黄芪水提取物高剂量组血清oxLDL含量明显低于对照组（5.2±6.1）μg/ml比（15.8±5.4）μg/ml，P<0.01；与对照组比较，黄芪水提取物高剂量组ApoE-/-小鼠动脉粥样斑块面积明显减小（17.24%±4.22%比49.87%±9.37%，P<0.01），动脉管壁斑块弥漫程度较轻(P<0.01)。黄芪水提取物高剂量组斑块中Mac3表达低于对照组(P<0.01)；黄芪水提取物高剂量组与对照组主动脉斑块中MMP-9阳性表达面积平均吸光度值(MA)分别为0.0154±0.0014与0.0263±0.0065 (P<0.01）。 结论黄芪水提取物能够抑制ApoE-/-小鼠动脉MMP-9表达，延缓动脉粥样硬化斑块形成。其机制可能是通过降低ApoE-/-小鼠血清oxLDL水平，抑制巨噬细胞的浸润、迁移及分泌MMP-9，从而抑制斑块形成