控制肝脏组织发育、再生重塑与大小的关键蛋白质机器

肝脏损伤、功能衰竭及肝癌等疾病是我国重大健康问题,它们的发生发展与肝脏再生重塑及大小调控异常密切相关。针对肝脏发育、再生及大小控制机理的基础研究对于解决上述重大肝脏疾病的临床需求具有重要意义。前期研究发现Hippo信号通路在调控细胞增殖及分化、干细胞命运等方面起着关键作用,而Hippo通路的失调可导致肝脏等器官发育和大小异常,严重影响受损组织再生与重塑,或导致肿瘤迅速发生。本项目拟以肝脏为研究对象,聚焦Hippo相关信号网络如何感知器官大小并适时调控细胞生长、分化与死亡以实现器官发育、再生重塑和器官大小控制这一关键科学问题,整合基础、临床、药学领域的先进研究技术,拟通过基因编辑、内胚层干细胞肝向分化、肝细胞移植和肝脏重建、肝脏损伤修复等模型、临床病理分析、蛋白结构解析和靶向药物设计等方法,深入探讨该通路失控导致肝脏发育异常、再生重塑障碍、癌症发生的致病机理,并提出靶向干预新策略。控制肝脏组织发育、再生重塑与大小的关键蛋白质机器(2017YFA0504500

厦门海域水体无机氮和活性磷酸盐含量的变化趋势

根据2003～2008年每年丰水期、枯水期和平水期于厦门海域开展的海洋环境调查的资料,研究了该海域水体无机氮和活性磷酸盐含量区域分布和时间变化趋势.结果表明,调查期间该海域水体无机氮和活性磷酸盐平均含量都较高,分别为0.50、0.031 mg/dm3.其营养盐含量的区域分布相差较大,其中九龙江口水体无机氮含量最高,年均含量为0.52～1.37 mg/dm3;厦门西港水体活性磷酸盐含量最高,年均含量为0.039～0.061 mg/dm3;而大嶝海域水体无机氮和活性磷酸盐含量最低,年均含量分别为0.06～0.22、0.007～0.016 mg/dm3.调查期间全海域水体无机氮含量呈逐年增加趋势,活性磷酸盐含量在2003～2005年间呈上升趋势,而2005～2008年则有小幅度的下降.厦门海域水体N/P原子比较高,调查期间全海域年均值为27.4～47.5,且呈逐年增加趋势.无机氮含量的明显增加趋势及越来越严重的N/P比失衡,势必对该海域海洋生态系统尤其是浮游植物群落演替产生不良影响.此外,研究还发现厦门海域水体无机氮含量与盐度呈高度负相关(r=-0.96,n=30).这有力地证明了九龙江径流输入是厦门海域无机氮的最主要来源

重组乙肝表面抗原分离纯化及其分子特性研究

作为多聚亚基蛋白，乙肝表面抗原(HBsAg)的纯化工艺均具有活性回收率偏低的缺点，限制了其作为乙肝疫苗推广应用。为提高HBsAg活性回收率，本文对分别由CHO细胞和汉逊酵母细胞表达的HBsAg的分离纯化过程进行了优化，并对其分子特性进行了研究。本文优化了CHO细胞来源rHBsAg(CHO-HBsAg)的纯化工艺；开发了一条简单有效的汉逊酵母细胞来源rHBsAg(Hans-HBsAg)的纯化工艺；此外，为探究HBsAg生物活性与分子结构之间的关系，本文还采用多角度激光-高效分子排阻色谱联用技术对两重组乙肝表面抗原的分子特性进行了探索，如下所述： 1) 优化了CHO-rHBsAg纯化工艺单元操作。通过在疏水层析(HIC)前加入硫酸铵沉淀技术分离、浓缩和澄清细胞培养上清液(可除去75%以上杂蛋白)，同时优化HIC操作条件，使HIC的纯化倍数从原低于40增加到120以上，并使HIC介质的交换容量增加一倍以上，同时延长了HIC介质的使用寿命； 2) 通过在CHO-HBsAg分离纯化单元操作(离子交换层析和凝胶过滤层析)中采用1%纯化伴侣A保护重组HBsAg的结构完整性，使CHO-HBsAg的最终总活性回收率由原来的不到20%增加到40%以上，最终产品纯度达到电泳纯(SDS-PAGE)和色谱纯(HPSEC)，即其纯度在98%以上，达到国家药典标准。 3) 开发了一条针对Hans-rHBsAg的简便、高效的纯化工艺。纯化工艺主要由离子交换层析、疏水层析和凝胶过滤等三步层析集成，最终产品纯度达99%以上，5000人份中试水平(150mg)的Hans-HBsAg的活性回收率大于21%。三步层析工艺易于放大和调控，与传统工艺采用超离心至少需耗时96小时相比，该工艺在中试规模中每批实验仅需35小时即可完成。 4) 新型层析介质的自主开发与应用。为减少多聚亚基蛋白在纯化中因吸附层析介质多位点吸附造成的亚基解离导致的活性损失以及层析介质长期依赖进口等问题，开发了针对CHO-HBsAg和Hans-HBsAg的具有不同配基密度的疏水层析介质(Butyl QZT-3)，经筛选后应用于二者的纯化工艺中，前者可取得相似纯化效果，可用于替代原工艺中的HIC介质，后者可获得95%和10以上的活性回收率和纯化倍数，高于进口介质的不到80%和4的活性回收率和纯化倍数。 5) 为探究rHBsAg分子特性与生物活性之间的关系，联用多角度激光散射技术(MALLS)与高效分子排阻色谱(HPSEC)技术对两重组HBsAg的分子量、分子尺寸以及其分布等分子特性进行了对比，发现CHO-HBsAg具有更高的平均重均分子量和均方根回旋半径分别为4921 KD和22.1 nm(与血源HBsAg分子尺寸相近)，而Hans-HBsAg的平均重均分子量和均方根回旋半径仅为3010 KD和18.1 nm。此外，CHO-rHBsAg 颗粒平均具有155个亚基蛋白，而Hans-rHBsAg颗粒仅平均具有86个。上述数据为揭示不同来源的HBsAg颗粒存在免疫原性、电荷性与疏水性等方面性质差异提供了分子结构方面的证据

疫苗分离纯化研究进展

综述了国内外关于疫苗分离纯化的研究进展 ,系统介绍了目前可用作各类疫苗 (尤其是基因工程疫苗 )分离纯化的方法。沉淀和离心等传统分离技术在各类疫苗的分离纯化中应用广泛 ,层析技术和其它分离技术的结合已成为疫苗分离纯化的主流 ,新型膜技术和亲和层析在基因工程亚单位疫苗分离纯化中的作用引人注目

塔里木河下游地区胡杨蒸腾耗水规律及其对生态输水的响应

本文结合塔里木河下游地区地下水位埋深的变化,运用先进仪器,对不同监测断面的胡杨液流变化特征进行了测定,结果表明:塔里木河下游地区胡杨液流日变化表现出单峰值和双峰值两种形式,且有明显的昼夜节律变化;胡杨液流在树干2个方位上,东南面液流速率高于西北面,且液流速率随木质部深度的增加而减小;具有较大直径的胡杨,其液流速率、耗水量相对较大;空气湿度、太阳辐射和大气温度是影响塔里木河下游地区胡杨蒸腾耗水量变化的主要环境因子;塔里木河下游地区高温干旱的环境特征,以及生态输水提供的较为充分的水分来源,决定了该区胡杨日水耗量较其他地区胡杨大,2005年2次生态输水后,河岸两侧地下水位明显抬升,胡杨液流和水势作为两项生理指标都对地下水位变化灵敏响应

determinationofmodificationdegreeofsuccinylatedgelatinbysizeexclusionchromatographycoupledwithmultianglelaserlightscatting

The clinical effectiveness of succinylated gelatin as a plasma substitute depends on its molar mass and free amino modification degree. In this study, a new method was developed to determine the modification degree of succinylated gelatin. Gelatin and succinylated gelatin were derived with trinitrobenzenesulfonic acid (TNBS). The molar masses of gelatin and succinylated gelatin were determined before and after TNBS-derivation by size exclusion chromatography coupled with multi angle laser light scatting (SEC-MALLS). The modification degree was obtained by determining the free amino groups of gelatins before and after succinylation. Human serum album in was used as a model protein to validate the method. The determined value was consistent with the calculated value. Actual samples were analyzed with the developed method. The result indicates that the mean modification degree of succinylated gelatins is 38%. This research indicates that size exclusion chromatography multi angle laser light scatting coupled with the trinitrobenzenesulfonic acid derivation is a possible method to determine the modification degree of succinylated gelatin

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The clinical effectiveness of succinylated gelatin as a plasma substitute depends on its molar mass and free amino modification degree. In this study, a new method was developed to determine the modification degree of succinylated gelatin. Gelatin and succinylated gelatin were derived with trinitrobenzenesulfonic acid (TNBS). The molar masses of gelatin and succinylated gelatin were determined before and after TNBS-derivation by size exclusion chromatography coupled with multi angle laser light scatting (SEC-MALLS). The modification degree was obtained by determining the free amino groups of gelatins before and after succinylation. Human serum album in was used as a model protein to validate the method. The determined value was consistent with the calculated value. Actual samples were analyzed with the developed method. The result indicates that the mean modification degree of succinylated gelatins is 38%. This research indicates that size exclusion chromatography multi angle laser light scatting coupled with the trinitrobenzenesulfonic acid derivation is a possible method to determine the modification degree of succinylated gelatin

分子排阻色谱-多角度激光散射仪联用在线检测重组乙肝表面抗原(HBsAg)的分子量和颗粒大小

<正> 重组乙肝表面抗原(HBsAg)免疫原性的强弱与其分子量和颗粒大小密切相关。在HBsAg的分离纯化过程中在线检测HBsAg的分子量和颗粒大小对乙肝疫苗生产过程的质量控制具有重要意义

塔里木河下游胡杨树干液流特征研究

以2005年5月至9月胡杨(Populus euphratica)树干液流及相关环境因子的实测数据,对塔里木河下游胡杨树干液流特征及其与环境因子的关系进行了分析。研究表明,胡杨树干液流的日变化表现为昼夜区别明显,7:30左右,液流开始启动,然后迅速上升,在10:30左右达到峰值,并在小幅度波动中维持到下午20:00左右。夜间,胡杨树干液流较弱。对不同月份典型天胡杨树干液流的实验分析表明,胡杨在5月初液流比较弱,5月中下旬液流逐渐增强,6月增强到较高的水平。7—9月胡杨液流都很强劲,其中9月典型天的液流最为强劲,胡杨树干液流季节变化与胡杨物候密切相关。分析胡杨树干液流与环境因子关系结果显示,胡杨树干液流和气象因子的关系密切,Pearson相关分析表明,胡杨液流流量和气象因子的相关性大小依次为光合有效辐射(PAR)>相对湿度(H)>气温(Ta)>风速(S)