Métodos alternativos para a detecção de pirogênios em produtos e ambientes sujeitos a Vigilância Sanitária: avanços e perspectivas no Brasil a partir do reconhecimento internacional do Teste de Ativação de Monócitos

Introduction: The detection of pyrogens is essential for the quality control of injectable products. The Rabbit Pyrogen Test remains widely used, despite the existence of alternative methods such as the Monocyte Activation Test (MAT). Objective: To review the use of alternative methods for pyrogen testing, pointing out advances and perspectives from the recognition of MAT by the European pharmacopoeia and its acceptance for regulatory purposes in Brazil. Method: A search was performed on the PubMed and BVS databases, with further classification, categorization by topic and critical analysis of the results. Results: Twenty-four papers were identified, addressing topics such as applications of MAT, its validation and comparisons with in vivo tests. MAT presented better results when compared to other tests, both in the evaluation of biological products and in the detection of non-endotoxin pyrogens. Limitations to diffusion include difficulties in obtaining whole human blood as a source of monocytes, for which several alternatives have been proposed. Conclusions: MAT is a promising method, with application in safety evaluation of new technologies. Its application in Brazil depends on a national implementation policy, which might include greater integration between BraCVAM, Concea and RENAMA in search for its recognition for regulatory purposes.Introdução: A detecção de pirogênios é imprescindível no controle da qualidade de produtos injetáveis. O Teste de Pirogênio em coelhos ainda tem larga aplicação, apesar da existência de métodos alternativos como o Teste de Ativação de Monócitos (MAT). Objetivo: Revisar o uso dos métodos alternativos no teste de pirogênio, apontando avanços e perspectivas a partir do reconhecimento do MAT pela Farmacopeia Europeia e sua aceitação para fins regulatórios no Brasil. Método: Uma busca foi realizada nas bases PubMed e BVS, com posterior classificação, categorização por assuntos e análise crítica dos resultados. Resultados: Foram identificados 24 trabalhos, abordando temas como as aplicações do MAT, sua validação e comparação com testes in vivo. O MAT apresentou melhores resultados quando comparado a outros testes, tanto na avaliação de produtos biológicos como na detecção de pirogênios não-endotoxinas. Limitações para sua difusão incluem a dificuldade de obtenção de sangue total humano como fonte de monócitos, para o qual diversas alternativas têm sido propostas. Conclusões: O MAT se mostra um método promissor, com aplicação na avaliação da segurança de novas tecnologias. Sua aplicação no Brasil depende de uma política nacional de implantação, que inclua maior Integração entre BraCVAM, Concea e RENAMA na busca por seu reconhecimento para fins regulatórios

Métodos alternativos ao uso de animais para a detecção de pirogênio: oportunidades e desafios no controle da qualidade de produtos biológicos.

A necessidade de alternativas ao uso de animais no teste de pirogênio foi guiada pelo principio dos 3R’s, culminando no desenvolvimento e aceitação pela Farmacopeia Europeia do método alternativo in vitro, o Teste de Ativação de Monócitos (Monocyte Activation Test- MAT, 2.6.30/ 2010). O MAT utiliza como matriz, fontes de monócitos humanos (sangue total, PBMC, linhagem), respeitando o conceito dos 3R’s e excluindo riscos inerentes à extrapolação inter-espécies. É um método promissor e eficiente, que detecta um amplo espectro de pirogênios e supri limitações dos testes atuais preconizados pelas farmacopeias, o teste in vitro Teste de Endotoxina Bacteriana e o Teste de Pirogênio em Coelhos. Apesar das vantagens abordadas, alguns obstáculos técnico-científicos e regulatórios devem ser transpostos para a implantação efetiva do MAT na rotina industrial, em especial de produtos biológicos

Aplicabilidade do Teste de Ativação de Monócitos (MAT) no Brasil: importância da sua utilização como teste para detecção de pirogênios no controle da qualidade de produtos injetáveis

Monocyte Activation Test (MAT) is thought to be a good replacement for rabbit pyrogen test (RPT); however, MAT remains controversial. MAT was not adequately evaluated in a sufficient number of products, and there is no sufficient data that support the ability of MAT to detect non-endotoxin pyrogens. Furthermore, MAT was used subject to validation for each specific product. The aim of this study was to identify in main pharmacopoeias, whose monographs require pyrogenicity tests, and propose those products for which only the rabbit pyrogen test is required to be used as a kick-off study for future studies. Products’ monographs in pharmacopeias in the United States, Europe, and Brazil that are recommended for RPT or Bacterial Endotoxins Test (BET) are as follows. RPT: 20 in American, 37 in European, and 28 in Brazilian pharmacopoeias. BET: 619 in American, 157 in European, and 41 in Brazilian pharmacopoeias. Four products require pyrogenicity testing in three pharmacopoeias. Both RPT and BET are recommended by six monographs in Brazilian pharmacopeias and 15 in European pharmacopoeias. In Brazilian pharmacopoeias most are biological. These products should be the first to be tested for their applicability to MAT because they are currently tested mainly by RPT.O MAT (sigla do inglês Monocyte Activation Test) é considerado um potencial substituto do Teste de Pirogênios, entretanto: i. não foi avaliado para um número suficiente de produtos; ii. faltam dados que possam garantir sua capacidade em detectar pirogênios não endotoxinas; e iii. deve ser realizada a validação do método para cada classe de produtos. O objetivo foi identificar as monografias que requerem testes de pirogenicidade e propor os produtos que têm por base somente o teste de pirogênios como um ponto de partida para futuros estudos. As monografias específicas nas Farmacopeias Americana, Europeia e Brasileira que recomendam o Teste de Pirogênios ou Teste de Endotoxina Bacteriana ou LAL (sigla do inglês Limulus Amebocyte Lysate) foram: Teste de Pirogênios: 20 monografias na Americana, 37 na Europeia e 28 na Brasileira. LAL: 619 monografias na Americana, 157 na Europeia e 41 na Brasileira. Somente quatro produtos requerem testes de pirogenicidade nas três farmacopeias analisadas. O Teste de Pirogênios e LAL são recomendados em seis monografias na Brasileira e 15 na Europeia. Na Brasileira, a maior parte dessas monografias é referente a produtos biológicos, sugerindo, assim, que estes devam ser os primeiros a ser testados, uma vez que são ensaiados em animais

Importância da inserção de grupo controle em ensaios utilizando animais de laboratório

Introduction: The use of laboratory animals is essential in areas where they cannot yet  becompletely replaced, such as toxicology. In studies that use, for comparison purposes, only data provided by the clinical analysis laboratories, in an attempt to reduce the number of animals in an experiment, there is the risk of using information that does not correspondto reality. Objective: Discuss the use of control groups in animals’experiments. Method: This article compared the hematological and biochemical values of rats of the Wistar strain, obtained in three breeding facilities in different Brazilian states, with the results of animals from the Institute of Science and Technology in Biomodels of the Oswaldo Cruz Foundation, Rio de Janeiro, aiming at the discussion about decision-making on the inclusion of a control group in acute oral toxicity trials. Results: Few parameters showed no statistical differences, such as red blood cells in females (two references), hemoglobin in females (one reference) and males (one reference), hematocrit in males (two references) and mean corpuscular hemoglobin in females (two references), leukocytes in males (a reference); creatinine and ALT in all females. Conclusions: It is concluded that the use of the control group is necessary, when values analyzed preliminarily differ from those considered as references of the speciesIntrodução: O uso de animais de laboratório é fundamental em áreas em que ainda não podem ser substituídos na totalidade, como a toxicologia. Em estudos que se utilizam, para fins de comparação, apenas dados fornecidos pelos laboratórios de análises clínicas, na tentativa de reduzir o número de animais de um experimento, arrisca-se utilizar informações que não correspondem à realidade. Objetivo: Debater o uso de grupo controle em experimentos com animais. Método: Este artigo comparou valores  hematológicos e bioquímicos de ratos da linhagem Wistar, obtidos em três  biotérios de criação de diferentes estados brasileiros, com os resultados de animais provindos do Instituto de Ciência e Tecnologia em Biomodelos da Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, objetivando a discussão acerca da tomada de decisão sobre a inclusão de grupo controle em ensaios de toxicidade aguda oral. Resultados: Poucos foram os parâmetros que não apresentaram diferenças estatísticas, tais como: hemácia em fêmeas (duas referências), hemoglobina em fêmeas (uma referência) e machos (uma referência), hematócrito nos machos (duas referências) e hemoglobina corpuscular média nas fêmeas (duas referências), leucócitos nos machos (uma referência), creatinina e alanina aminotransferase (ALT) em todas as fêmeas. Conclusões: O uso do grupo controle se faz necessário quando valores analisados preliminarmente apresentam-se discrepantes daqueles tidos como referenciais da espécie

O monitoramento de rastreadores de eventos adversos relacionados aos medicamentos como ferramenta de segurança aos pacientes da unidade de tratamento de queimados do Hospital Regional da Asa Norte, Brasília - Distrito Federal

Monografia (graduação)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ceilândia, Curso de Farmácia, 2015.Objetivo: Identificar a ocorrência de eventos adversos por meio da aplicação de rastreadores em pacientes hospitalizados em uma unidade de tratamento de queimados em um hospital de referência. Materiais e Métodos: Trata-se de um estudo de coorte baseado na análise dos prontuários de pacientes hospitalizados na Unidade de Tratamento de Queimados do Hospital Regional da Asa Norte – Brasília – DF, nos meses de agosto, setembro e outubro de 2015. Os dados coletados foram armazenados em um banco de dados no programa EpiData 3.0 e posteriormente analisados no Statistical Package for Social Science (SPSS) 20.0. Resultados: A amostra foi composta por 32 sujeitos sendo 68,8% homens, a média de idade foi de 32,4 (±18,0) anos. As complicações durante a internação foram frequentes (65,5%) sendo as mais comuns, as infecciosas e as hematológicas. Pelo menos metade dos pacientes necessitou de hemocomponentes (56,3%). Os resultados demonstram que são pacientes polimedicados, as classes de medicamentos mais utilizadas foram os anti-infecciosos de uso sistêmico e os que atuam no sistema nervoso, foi observado o uso elevado de dois medicamentos potencialmente perigosos, o Tramadol e a Enoxaparina. Os rastreadores que mais apareceram foram: antieméticos, anti-histamínicos e redução de hemoglobina/hematócrito, 75% dos pacientes apresentaram rastreadores, porém apenas um paciente apresentou evento adverso relacionado a um rastreador. Conclusão: Observou-se alta incidência de rastreadores, contudo, o próprio problema de saúde e os procedimentos realizados com estes pacientes explicam os rastreadores identificados É necessário um acompanhamento mais longo destes pacientes para confirmar a aplicabilidade dos rastreadores na identificação de eventos adversos relacionados aos medicamentos.Objective: Identify the occurrence of adverse events applying trigger tools in hospitalized patients in the Burn Unit. Materials and Methods: This is a cohort study based on analysis of medical records of patients hospitalized in the Burn Unit of Hospital Regional da Asa Norte - Brasília - DF, in the months of August, September and October 2015. The data collected were stored in a database program EpiData 3.0 software, and then analyzed using the Statistical Package for Social Sciences (SPSS) 20.0. Results: The sample consisted of 32 subjects and 68.8% male, mean age was 32.4 (± 18.0) years. Complications during hospitalization were common (65.5 %) being the most common, infectious and hematological. Half of the patients needed blood products (56.3 %). They’re polymedicated, the most commonly used drug classes were anti -infectious for systemic use and those that act on the nervous system, the high use of two high-alert medications was noted, Tramadol and Enoxaparin. Triggers appeared that most were: antiemetics, antihistamines and reduction of hemoglobin/hematocrit, 75,0% of patients had triggers, but only one patient had adverse event related to a trigger. Conclusion: There was a high incidence of triggers, however, the very health problem and the procedures carried out with these patients explain triggers identified. It is necessary a longer follow-up of these patients to confirm the applicability of trigger tools to identify adverse events related to drugs

Teste de ativação de monócitos para detecção de pirogênios in vitro aplicado à vacina meningocócica C conjugada

Submitted by Repositório Arca ([email protected]) on 2019-07-17T13:21:37Z No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) vitor_fernandes_silva.pdf: 2663073 bytes, checksum: 2dcf626f131bf5efb46afe4328bd2cec (MD5)Approved for entry into archive by Priscila Nascimento ([email protected]) on 2019-07-29T13:38:06Z (GMT) No. of bitstreams: 2 vitor_fernandes_silva.pdf: 2663073 bytes, checksum: 2dcf626f131bf5efb46afe4328bd2cec (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5)Made available in DSpace on 2019-07-29T13:38:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 vitor_fernandes_silva.pdf: 2663073 bytes, checksum: 2dcf626f131bf5efb46afe4328bd2cec (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2017Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.A detecção de pirogênios em produtos parenterais é mandatória pelas agências reguladoras. Atualmente, para avaliar o conteúdo de pirogênios, as principais farmacopeias preconizam o teste de pirogênio em coelhos (RPT), o lisado de amebócito de Limulus (LAL) e o teste de ativação de monócitos (MAT). Este estudo teve como objetivo avaliar a aplicabilidade do MAT ao CQ da vacina Meningocócica C conjugada (MenCC) como alternativa ao uso de coelhos no teste de pirogenia in vivo, ampliar a detecção de potenciais fontes de pirogênios nãoendotoxina (NEPs), realizar análise comparativa entre os diferentes sistemas do MAT, comparando sistemas validados (ICCVAM 2008) com uma proposta original, sangue criopreservado/IL-6 e confrontar os dados dos três ensaios de detecção de pirogênios, RPT, LAL e MAT, aplicados a lotes da MenCC. Os sistemas do MAT combinaram a utilização de matrizes monocíticas (sangue total fresco e criopreservado) e a detecção de citocinas próinflamatórias (IL-6 e IL-1β) como parâmetros de leitura. Lipopolissacarídeo (LPS), ácido lipoteicóico (LTA) e zymozan A (ZA) foram utilizados como padrões moleculares associados à pirogenia de Gram-negativas, Gram-positivas e fungos, respectivamente. Foram avaliados 3 lotes de MenCC produzidos por Bio-Manguinhos. Estes foram incubados em contato com a matriz monocítica em estufa de CO2 a 37° C e após 16 horas foram quantificadas IL-1β e IL-6 pelo ensaio de ELISA (R&D Systems). Em paralelo, os lotes foram analisados frente aos métodos farmacopeicos clássicos de detecção de pirogênios, o LAL e o RPT. A validação produto específica, MenCC frente ao MAT não apresentou interferência, mostrando aplicabilidade do teste ao produto. Todas as diluições da vacina, bem como a presença do adjuvante não interferiram na detecção de IL-6 e IL-1β, induzidos pelo padrão exógeno de LPS. O sistema foi capaz de identificar NEPs (LTA e ZA) na presença de MenCC. Análises estatísticas demonstraram uma boa correlação entre os sistemas de leituras (IL-1β e IL-6) para curvas de LPS em NaCl (r=0,9918 e p=0,0001) e em MenCC (r=0,9702 e p=0,0028). Os ensaios de linhas paralelas das curvas de LPS e LTA em NaCl versus MenCC demonstraram que o pvalor para o não-paralelismo não foi significante para IL-1β e IL-6 (p > 0,05). Os ensaios quantitativos demonstraram que os 3 lotes foram considerados não pirogênicos, reforçando os resultados obtidos pelos métodos clássicos RPT e LAL. O presente estudo demonstrou a aplicabilidade do MAT para a MenCC, observando uma correlação positiva com os ensaios clássicos RPT e LAL, bem como a análise diferencial e quantitativa de NEPs, potenciais alvos de contaminação na indústria. Os resultados abrem uma avenida de oportunidades atendendo o recrutamento internacional de esforços para redução de animais, principalmente para fins industriais, dando início a uma missão preventiva às futuras regulamentações referentes ao uso de animais no Brasil.The detection of pyrogens in parenteral products is mandatory by regulatory agencies. Currently, to evaluate the pyrogen content, the main pharmacopoeias recommend pyrogen test in rabbits (RPT), Limulus amebocyte lysate (LAL) and monocyte activation test (MAT). The objective of this study was to evaluate the applicability of MAT to CQ of Meningococcal C conjugate vaccine (MenCC) as an alternative to the use of rabbits in the in vivo pyrogen test, to increase the detection of potential non-endotoxin pyrogenic sources (NEPs), to perform a comparative analysis between different MAT systems, comparing validated systems (ICCVAM 2008) with an original proposal, cryopreserved blood / IL-6 and confront data from the three pyrogen detection tests, RPT, LAL and MAT, applied to batches of MenCC. The MAT systems combined the use of monocytic matrices (fresh and cryopreserved whole blood) and the detection of proinflammatory cytokines (IL-6 and IL-1β) as reading parameters. Lipopolysaccharide (LPS), lipoteichoic acid (LTA) and zymozan A (ZA) were used as molecular standards associated with Gram-negative, Gram-positive and fungal pyrogens, respectively. Three batches of MenCC produced by Bio-Manguinhos were evaluated. These were incubated in contact with the monocytic matrix at 37 ° C with CO2 and after 16 hours IL1β and IL-6 were quantified by the ELISA assay (R & D Systems). In parallel, the lots were analyzed against the classical pharmacological methods of detection of pyrogens, the LAL and the RPT. The specific product validation, MenCC vs MAT did not present interference, showing applicability of the test to the product. All dilutions of the vaccine, as well as the presence of the adjuvant did not interfere in the detection of IL-6 and IL-1β, induced by the exogenous pattern of LPS. The system was able to identify NEPs (LTA and ZA) in the presence of MenCC. Statistical analyzes showed a good correlation between the reading systems (IL-1β and IL-6) for LPS curves in NaCl (r = 0.9918 and p = 0.0001) and in MenCC (r = 0.9702 and p = 0.0028). The parallel line assays of the LPS and LTA curves in NaCl versus MenCC demonstrated that the p-value for non-parallelism was not significant for IL-1β and IL-6 (p> 0.05). The quantitative tests showed that the 3 lots were considered non-pyrogenic, reinforcing the results obtained by the classical RPT and LAL methods. The present study demonstrated the susceptibility of MenCC to MAT analysis, observing a positive correlation with the classic RPT and LAL assays, as well as the differential and quantitative analysis of NEPs, potential contamination targets in the industry. The results open a range of opportunities, taking into account the international recruitment of efforts to reduce the animal use, mainly for industrial purposes, starting a preventive mission to future regulations regarding the use of animals in Brazil

Estudo da aplicabilidade do teste de ativação de monócitos na detecção de pirogênios na vacina contra febre amarela

Submitted by Repositório Arca ([email protected]) on 2019-05-09T18:44:56Z No. of bitstreams: 1 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5)Approved for entry into archive by Simone Teixeira ([email protected]) on 2020-01-16T20:16:17Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação_Elaine_Navega.pdf: 1727151 bytes, checksum: a6184ea8ba3648cc94e7be178d5f520d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5)Made available in DSpace on 2020-01-16T20:16:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação_Elaine_Navega.pdf: 1727151 bytes, checksum: a6184ea8ba3648cc94e7be178d5f520d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.A necessidade de alternativas ao uso de animais no teste de pirogênio é guiada pelo principio dos 3R’s, culminando na aceitação pela Farmacopeia Europeia (FE) do método alternativo in vitro, o Teste de Ativação de Monócitos (MAT). Respeitando esta premissa, o MAT utiliza como matriz, fontes de monócitos humanos sendo considerado um método promissor e eficiente por excluir riscos inerentes à extrapolação inter-espécies, detectar amplo espectro de pirogênios e suprir limitações dos testes atuais, i.e o Teste de Endotoxina Bacteriana (LAL) e o Teste de Pirogênio em coelhos (RPT). Apesar das vantagens abordadas, alguns obstáculos técnico-científico-regulatórios devem ser transpostos para a implantação efetiva do MAT na rotina industrial, em especial, de produtos biológicos. Neste contexto, o Laboratório de Controle de Qualidade de Bio-Manguinhos (Seção de Controle Biológico) em colaboração com o Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde (INCQS), visando reforçar a melhoria nos ensaios de controle de qualidade e fortalecer cientificamente o uso dos testes alternativos seguindo os pré-requisitos regulamentados pelas farmacopeias, selecionou de seu portifólio como alvo de estudo, a vacina contra a febre amarela (VFA) como primeiro modelo de aplicabilidade do MAT em vacinas virais por: (1) ser o carro-chefe de Bio-Manguinhos, (2) apresentar processo de produção complexo, com fatores críticos de interferência como uso de vírus vivo e resíduos de componentes de processos (ovos embrionados) e (3) possibilitar potencial investigativo de outras fontes pirogênicas não detectadas pelo método descrito na monografia da vacina. Os métodos farmacopeicos descritos para o MAT utilizando IL-1/sangue criopreservado, IL-6/ sangue fresco e a proposta de método para rotina industrial utilizando IL-6/ sangue criopreservado, foram validados conforme requisitos da FE. A verificação produto-específica foi realizada com a VFA/10 doses e fatores interferentes avaliados através da máxima diluição válida. Após determinação da diluição, o método quantitativo foi aplicado aos lotes vacinais, com interpretação entre os sistemas de leitura e matrizes do MAT e LAL. Os dados mostram reprodutibilidade do teste utilizando diferentes doadores e medidores de pirogenicidade (IL-6/IL-1) frente ao estímulo da endotoxina. Após verificação da aplicabilidade do MAT à VFA com diluição 1:10, demonstramos que os sistemas utilizando sangue criopreservado (IL-1β/IL-6) respeitam os limites de recuperação da endotoxina e se mostraram mais adequados do que o sistema IL-6/sangue fresco. Os resultados quantitativos da resposta pirogênica no produto - determinada pelo MAT - correspondem àqueles observados pelo LAL. Os dados demonstram a aplicabilidade do MAT em vacinas, sendo o modelo VFA compatível com a utilização.The need for alternatives to animal use in pyrogen test is guided by the principle of the 3R’s, culminating in the acceptance by the European Pharmacopoeia (EP) of the Monocyte Activation Test (MAT). Respecting this premise, human monocytes sources are used at MAT, which is considered a promising and efficient alternative method. This method is effective for exclude inherent risk of the interspecies extrapolation, detects a broad spectrum of pyrogens and overcomes limitations of current tests, i.e. the Bacterial Endotoxin Test (LAL) and Pyrogen Test conducted in Rabbits (RPT). Despite the advantages mentioned above, some technical-scientific and regulatory obstacles must be overcome for effective implementation of MAT in the industrial routine, especially for biological products. In this context, the Quality Control Laboratory of Bio-Manguinhos (Biological Control Section) in collaboration with the National Institute for Quality Control in Health (INCQS) started this study aimed to improve the quality control process of biologicals and to consolidate the scientific development of alternative methods in this field, following requirements recommended by regulatory agencies. The vaccine against yellow fever (YFV) was selected to evaluate the applicability of MAT. The reasons for this choice includes: (1) YFV is the flagship product of Bio-Manguinhos’s portfolio, (2) YFV’s production is a complex process, with critical factors of interference such as, the use of live virus and the presence of residual process components (embryonated eggs), and (3) this study enables further investigations concerning other pyrogenic sources not detectable by the method described in the YFV’s monograph. The pharmacopeial methods (MAT using IL-1/blood cryopreserved and IL-6/fresh blood) and the proposed method for industrial routine (IL-6/blood cryopreserved) were validated following the EP requirements. The product-specific verification was carried out with the YFV/10 doses and interfering factors was evaluated by the maximum valid dilution. After determining the dilution, the quantitative method was applied to vaccine lots, with interpretation between the reading systems of MAT and LAL. The data have shown the reproducibility test using different donors and pyrogenicity endpoints (IL-6/IL-1) compared to the stimulation of endotoxin. After assessing the applicability of YFV with the MAT 1:10 dilution, we demonstrated that systems using cryopreserved blood (IL-1β/IL-6) respects the limits recovery of endotoxin and were more suitable than the IL-6 system/fresh blood. The quantitative results of the pyrogenic response in the final product - determined by MAT - correspond to those observed by the LAL. The data demonstrate the applicability of MAT for batch release process of viral vaccines and that the YFV model is compatible with the use of this alternative method