Determinazione della carica di CMV in campioni di sangue essiccato su carta da filtro (DBS)

Introduzione. Un\u2019elevata carica virale in urine o sangue di neonati con infezione congenita da Cytomegalovirus (CMV) potrebbe rappresentare un marcatore di prognosi sfavorevole. Diversi studi hanno evidenziato i numerosi vantaggi legati all\u2019impiego del sangue essiccato su Guthrie card (DBS). Pertanto sarebbe molto utile determinare la carica di CMV-DNA in questo tipo di campione, raccolto routinariamente alla nascita. L\u2019obiettivo di questo lavoro preliminare \ue8 stato verificare la correlazione tra le cariche rilevate nel sangue fresco (SF) e nei corrispondenti DBS. Metodi. Sono stati esaminati 69 campioni di SF e DBS, appartenenti a soggetti con infezione da CMV, risultati positivi per CMV-DNA in nested-PCR. Il DNA virale \ue8 stato estratto con colonne di affinit\ue0 (QIAGEN) e quantificato mediante Real-time PCR commerciale (Nanogen). Risultati. La PCR quantitativa ha dato esito positivo in 64 campioni di SF ed in soli 25 DBS. La carica nei DBS (mediana: 1,09x103 copie/ml) \ue8 risultata significativamente inferiore (p<0,05) a quella del SF corrispondente (1,67x104 copie/ml). Anche le mediane delle cariche virali del SF dal quale sono stati ottenuti i 39 DBS negativi ed i 25 positivi (1,10x103 vs 1,67x104 copie/ml) sono risultate significativamente diverse. Conclusioni. I risultati ottenuti non solo hanno evidenziato una riduzione della quantit\ue0 di CMV-DNA tra SF e corrispondente DBS pari a circa 1 log, presumibilmente dovuta alla minore quantit\ue0 di sangue esaminato, ma anche una minore sensibilit\ue0 del sistema. Essendo l\u2019alta carica virale indice di insorgenza di sequele nei neonati congenitamente infetti, riteniamo che il metodo proposto consenta comunque di individuare i soggetti da monitorare in quanto maggiormente a rischio di complicanze tardive. Il nostro gruppo sta gi\ue0 applicando tale metodica a DBS di neonati con infezione congenita dei quali \ue8 possibile reperire le informazioni relative alla sintomatologia alla nascita ed al follow-up

Has VZV epidemiology changed in Italy? Results of a seroprevalence study

The aim of the study was to evaluate if and how varicella prevalence has changed in Italy. In particular a seroprevalence study was performed, comparing it to similar surveys conducted in pre-immunization era. During 2013–2014, sera obtained from blood samples taken for diagnostic purposes or routine investigations were collected in collaboration with at least one laboratory/center for each region, following the approval of the Ethics Committee. Data were stratified by sex and age. All samples were processed in a national reference laboratory by an immunoassay with high sensitivity and specificity. Statutory notifications, national hospital discharge database and mortality data related to VZV infection were analyzed as well. A total of 3707 sera were collected and tested. In the studied period both incidence and hospitalization rates decreased and about 5 deaths per year have been registered. The seroprevalence decreased in the first year of life in subjects passively protected by their mother, followed by an increase in the following age classes. The overall antibody prevalence was 84%. The comparison with surveys conducted with the same methodology in 1996–1997 and 2003–2004 showed significant differences in age groups 1–19&nbsp;y. The study confirms that in Italy VZV infection typically occurs in children. The impact of varicella on Italian population is changing. The comparison between studies performed in different periods shows a significant increase of seropositivity in age class 1–4&nbsp;years, expression of vaccine interventions already adopted in some regions

Prevalence, Outcome, and Prevention of Congenital Cytomegalovirus Infection in Neonates Born to Women with Preconception Immunity (CHILd Study)

Background: Human cytomegalovirus (HCMV) is the leading infectious cause of congenital disabilities. We designed a prospective study to investigate the rate, outcome, and risk factors of congenital CMV (cCMV) infection in neonates born to immune women, and the potential need and effectiveness of hygiene recommendations in this population. Methods: The study was composed of 2 sequential parts: an epidemiology (part 1) and a prevention (part 2) study. Performance of part 2 depended upon a cCMV rate &gt;0.4%. Women enrolled in part 1 did not receive hygiene recommendations. Newborns were screened by HCMV DNA testing in saliva and cCMV was confirmed by urine testing. Results: Saliva swabs were positive for HCMV DNA in 45/9661 newborns and cCMV was confirmed in 18 cases. The rate of cCMV was. 19% (95% confidence interval [CI]:. 11-.29%), and 3 out of 18 infants with cCMV had symptoms of CMV at birth. Age, nationality, occupation, and contact with children were similar between mothers of infected and noninfected newborns. Twin pregnancy (odds ratio [OR]: 7.2; 95% CI: 1.7-32.2; P =. 037) and maternal medical conditions (OR: 3.9; 95% CI: 1.5-10.1; P =. 003) appeared associated with cCMV. Given the rate of cCMV was lower than expected, the prevention part of the study was cancelled. Conclusions: Newborns from women with preconception immunity have a low rate of cCMV, which appears to be mostly due to reactivation of the latent virus. Therefore, serological screening in childbearing age would be pivotal to identify HCMV-seropositive women, whose newborns have a low risk of cCMV. Clinical trials registration: www.clinicaltrials.gov (NCT03973359)

The rapid spread of SARS-COV-2 Omicron variant in Italy reflected early through wastewater surveillance

The SARS-CoV-2 Omicron variant emerged in South Africa in November 2021, and has later been identified worldwide, raising serious concerns. A real-time RT-PCR assay was designed for the rapid screening of the Omicron variant, targeting characteristic mutations of the spike gene. The assay was used to test 737 sewage samples collected throughout Italy (19/21 Regions) between 11 November and 25 December 2021, with the aim of assessing the spread of the Omicron variant in the country. Positive samples were also tested with a real-time RT-PCR developed by the European Commission, Joint Research Centre (JRC), and through nested RT-PCR followed by Sanger sequencing. Overall, 115 samples tested positive for Omicron SARS-CoV-2 variant. The first occurrence was detected on 7 December, in Veneto, North Italy. Later on, the variant spread extremely fast in three weeks, with prevalence of positive wastewater samples rising from 1.0% (1/104 samples) in the week 5–11 December, to 17.5% (25/143 samples) in the week 12–18, to 65.9% (89/135 samples) in the week 19–25, in line with the increase in cases of infection with the Omicron variant observed during December in Italy. Similarly, the number of Regions/Autonomous Provinces in which the variant was detected increased from one in the first week, to 11 in the second, and to 17 in the last one. The presence of the Omicron variant was confirmed by the JRC real-time RT-PCR in 79.1% (91/115) of the positive samples, and by Sanger sequencing in 66% (64/97) of PCR amplicons. In conclusion, we designed an RT-qPCR assay capable to detect the Omicron variant, which can be successfully used for the purpose of wastewater-based epidemiology. We also described the history of the introduction and diffusion of the Omicron variant in the Italian population and territory, confirming the effectiveness of sewage monitoring as a powerful surveillance tool

IMPIEGO DELLE GUTHRIE CARD PER LA DIAGNOSI DI INFEZIONE CONGENITA DA CMV

La diagnosi di infezione da cytomegalovirus in neonati di et\ue0 di 14 settimane con sintomatologia attribuibile ad infezione da CMV non consente di definire se l'infezione accertata sia stata acquisita in utero o in epoca peri/postnatale. Il nostro gruppo di studio ha recentemente messo a punto una tecnica che permette di diagnosticare le infezioni congenite da CMV rilevando la presenza del DNA virale nel sangue neonatale che viene routinariamente raccolto nei primi 7 giorni di vita ed essiccato (DBS) su cartoncino (Guthrie card) per la diagnosi precoce delle malattie genetiche e metaboliche. (Barbi et al., l996)\u2022 Allo scopo di valutare l'applicazione del test su cartoncino alla definizione della natura di infezioni citomegaliche accertate in neonati sintomatici di et\ue0 >1 mese, sono stati saggiati i DBS di 26 neonati nell'ambito dell'attivit\ue0 diagnostica nel periodo Gennaio 1994- Febbraio 1996. Il DNA estratto a caldo dai DBS \ue8 stato sottoposto a PCR per l'amplificazione di 2 regioni del genoma di CMV (geni 1E1 e gp58),I prodotti della PCR sono stati evidenziati mediante elettroforesi in gel di agarosio contenente bromuro di etidio. La dimostrazione della natura congenita dell'infezione citomegalica \ue8 stata ottenuta in 5 neonati (et\ue0 26gg-238gg), 4 sintomatici e I asintomatico; due dei neonati erano stati trasfusi nei primi giorni di vita. La possibilit\ue0 di accertare la natura dell'infezione, tramite la tecnica indicata, pu\uf2 consentire di: a) instaurare un programma di monitoraggio clinico per la rilevazione precoce delle sequele nei casi di infezione congenita; b) definire il molo dell'esposizione a procedura a rischio (es. trasfusioni) nei casi di infezione post-natale; c) migliorare la conoscenza della storia naturale dell'infezione da CMV

ACQUISIZIONE DELL&apos;INFEZIONE DA CYTOMEGALOVIRUS IN NEONATI TRASFUSI NELLE PRIME SETTIMANE DI VITA

La trasfusione di sangue nel neonato, in particolare in quello pretermine e di basso peso (sga), costituisce una procedura a rischio per la trasmissione dell'infezione da CMV. A tale infezione \ue8 legata una considerevole morbosit\ue0, soprattutto in nati da madre CMV-sieronegativa trasfusi con sangue da donatore positivo Le misure di controllo proposte (deplezione dei globuli bianchi, selezione di donatori sieron\ue9gativi, impiego M un solo donatore per bambino) non sono applicate, per motivi diversi, in tutte le situazioni in cui \ue8 richiesta la somministrazione di sangue o di frazioni ematiche a neonati critici. Nel corso degli anni 1994, 1995 e dei primi due mesi del 1996 sono stati esaminati per l'accertamento di laboratorio di infezione da CMV 27 bambini (et\ue0 media 4 mesi; range 25 giorni- 8 mesi) trasfusi nelle prime settimane di vita Ventitre di essi sono risultati affetti da infezione citomegalica, in 14 casi accompagnata da sintomi prevalentemente a carico del fegato (epatomegalia, ittero). In 2 casi su 12 si \ue8 potuto escludere, analizzando le Guthrie card raccolte alla nascita, che l'infezione evidenziata fosse da ascrivere alla trasfusione, in quanto questi bambini risultavano congenitamente infetti. Nonostante i dati presentati appaiano frammentari e relativi ad una piccola casistica essi indicano che la possibilit\ue0 di acquisire in epoca neonatale un'infezione da CMV con le trasfusioni \ue8 ancora lungi dall'essere totalmente prevenuta

EARLY DIAGNOSIS OF NEONATAL HERPES SIMPLEX VIRUS INFECTION BY GUTHRIE CARDS EXAMINATION

Neonatal herpes simplex virus (HSV) infection acquired at deliver), is characterised by high morbidity and mortality. Prompt therapy with acyclovir improves the prognosis in terms of both mortality and psychomotor development. Based on our experience acquired in the use of Guthrie cards to diagnose congenital cytomegalovirus infection (Barbi et al. 1996) and on the observation that HSV spread occurs by the haematic route in neonates we thought it interesting to test retrospectively the Guthrie cards of three babies in which a disseminated HSV infection in the first two weeks oflife had been suspected. Two of the babies were dead before a vira) diagnosis was available, the third had started the acyclovir treatment 14 days alter the onset of the disease. HSV-1 and HSV-2 DNA were sought in the blood eluted from the cards by nested PCR. HSV-2 but not HSV- I DNA was amplified from the cards which had been collected from two babies before the e day of life and in her 1621 day, at the beginning of the disease, from the third. Although these results concem only three cases and need confirmation from our ongoing study, they could be important. Testing Guthrie cards for HSV DNA represents a non invasive, rapid and widely available method that could be centralised in specialised structures. Its application would allow the prompt institution of antiviral treatment in neonates with suspected HSV infection thus contributing to the success of the treatment

DIAGNOSI DELLE INFEZIONI CONGENITE DA CYTOMEGALOVIRUS: DETERMINAZIONE DI ANTIGENEMIA E VIREMIA

La presenza di virus infettivo (viremia) e della proteina virale pp65 (antigenemia) nei leucociti di sanguc periferico (PBL) costituisce, nel campo della diagnosi delle infezioni da Cytomegalovirus (CMV) nei pa\uaczienti immunodepressi, un indicatore della diffusions sistemica del virus e della gravity dell'infezione. Allo scopo di valutare it significato della determinazione quantitativa di vi\uacremia e antigenemia nella diagnosi c nel monitoraggio delle infezioni con\uacgenite da CMV vengono riportati i risultati degli accertamenti diagnostici eseguiti in 12 neonati con infezione congenita e in 8 con infezione perina\uactale. L'antigenemia e risultata positiva nel 100% dei casi di infezione congenita sintomatica, nel 40% di quelle asintomatiche e nel 71 % di quelle perinatali. Frequenze inferiori (57%, 0 e 57% rispettivamente) sono state evidenziate per la viremia. I titoli sono risultati generalmente bassi (mediana < =17/ 200.000 PBL) e si sono azzerati entro i sei mesi di vita. Sequele a carico dell'udito sono state rilevate solo nei bambini positivi per i parametri consi\uacderati e sintomatici alla nascita. In sei neonati trattati con ganciclovir e/o gammaglobuline specifiche la de\uacterminazione di antigenemia e viremia ha consentito di monitorare l'effica\uaccia virologica del trattamento

Neonatal screening for congenital cytomegalovirus infection and hearing loss

Background: Congenital cytomegalovirus infection causes 20-30% of congenital sensorineural hearing loss (SNHL) cases. Early identification of CMV attributable cases and their successful treatment are often hampered by the late appearance of the damage in a high proportion of children both symptomatic and asymptomatic at birth. Objective: To discuss the feasibility of a screening program aimed at finding congenitally infected babies followed by their audiological monitoring. Study design: Opinion - review article. Results and conclusions: Frequency and severity of hearing loss due to congenital CMV suggest it maybe worthwhile setting up neonatal screening campaigns. Structures where SNHL can be diagnosed and treated exist already in many countries as part of universal neonatal audiological screening schemes. A test based on viral DNA extraction from neonatal dried blood spots on Guthrie cards and its amplification by means of a nested PCR (DBS test) seems to offer the best characteristics for use in screening. Clearly it will be necessary to calculate whether the costs of screening, diagnosis and follow-up, and the financial and emotional burden on the families of infected children, are up to the potential gain. (copyright) 2005 Elsevier B.V. All rights reserved