El papel de la estructura y entropía configuracional del péptido en la generación de anticuerpos, en la interacción péptido antigénico – anticuerpo y en la actividad biológica del péptido

La actividad biológica de los péptidos depende en gran parte de la estructura que adquieren en solución y de la estabilidad de esta estructura y estas a su vez dependen de la entropía configuracional del péptido. La entropía del péptido depende de la secuencia de aminoácidos. Cambios específicos en la secuencia modifican la entropía configuracional y por consiguiente la estabilidad de las estructuras que el péptido puede adquirir. En este estudio usando péptidos se reporta la identificación de regiones de las proteínas gp85 y gp350 del virus de Epstein-Barr involucradas en la unión e invasión de este virus a linfocitos B humanos y concuerda con los datos de la estructura recientemente reportada. La unión de los péptidos 11382, 11389 y 11416 de gp350 a linfocitos de sangre periférica induce la producción de IL-6. La secuencia de los péptidos 11382, 11389, 11435, 11438 de VEB y la secuencia de los péptidos 18283, 18294 (que pertenecen a las regiones de contacto de este virus a células epiteliales humanos) y 18301 (pertenece a una hélice a que hace la unión pentamero pentamero y es un epitope que induce anticuerpos protectivos) fueron modificadas con el fin de disminuir la entropía configuracional del péptido utilizando como estructura de partida la que el péptido tiene en la proteína nativa en el caso de los péptidos 11382, 11389, 18283, 18294 y 18301 o partiendo de la estructura del péptido como en el caso de los péptidos 11435 y 11438. Las hélices a fueron modificados con la ayuda del software AGADIR, las vueltas reversas y los péptidos lineales fueron modificadas cambiando los aminoácidos que presentan cadenas muy móviles o que generan tensión en la estructura; en el caso de las vueltas reversas se incluyeron Cisteínas con el fin de formar puentes disulfuro que estabilicen la estructura. Estos péptidos fueron sintetizados y luego probados en ensayos biofisicoquímicos. Los péptidos 11435, 11438 y 18301 presentan hélices inestables debido a un cambio positivo de la entropía durante el desenrollamiento. Los péptidos 33208 y 33210 (análogos del 11435); los péptidos 33203, 33205 y 33206 (análogos del 11435) y los péptidos 32588, 32861, 32591, 32592, 32866, 32967, 32968, 32996, 34098, 34100 y 34101 (análogos del 18301) presentaron una hélice a más estable que la del péptido original. La mayoría de estos péptidos análogos son reconocidos por los anticuerpos inducidos por el VEB o por las VLPs; los análogos de los péptidos de VEB inhiben la invasión in Vitro e inducen los efectos biológicos que inducen los péptidos nativos; algunas veces con mayor potencia como en el caso de la inhibición de la maduración de dendríticas por el 33210 y la producción de IL-6 por los péptidos 33220, 33363, 34295, 34297 y 33358. Los péptidos 32991, 33227, 33229, 33230 y 34087 presentaron una reaccionan específicamente con los anticuerpos presentes en mujeres infectadas con VPH La unión de los péptidos originales 11382, 11389, 11435, 18283, 18294 y 18301 a sus anticuerpos es favorecida entalpicamente; por el contrario, el cambio entrópico negativo se opone a la unión. La unión de los péptidos análogos 33210, 33215, 33225 y 33233 a sus anticuerpos es favorecida entropicamente, muy probablemente debido a la disminución de la entropía configuracional del péptido y al aumento de la estabilidad de la estructura. En conclusión disminuyendo la entropía configuracional del péptido se logró incrementar la actividad biológica de los péptidos.Abstract. The peptide’s biological activity mostly depends on its soluble structure and the intrinsic stability of this structure, which in turn depend on the peptide’s configurational entropy. As peptide’s entropy is amino acid sequence- dependent, specific sequence changes modify the peptide’s configurational entropy and in turn the stability of its possible peptide conformations. This study identified EBV gp350 and gp85 regions involved in B-lymphocytes binding and invasion, which agree with recently reported structural data. Binding of peptides 11382, 11389 and 11416 induces IL-6 production of peripheral blood lymphocytes. Sequences for EBV peptides 11382, 11389, 11435, 11438 and peptides 18283, 18294 (belonging to HPV-binding regions to epithelial cells) and peptide 18301 (belonging to an a helix involved in pentamers binding and protective antibodies induction) were modified in order to decrease the peptide’s configurational entropy based on the native protein structure for peptides 11382, 11389, 18283, 18294 and 18301 or the structural analisys for peptide for peptides 11435 and 11438. The α- helical structure was stabilized by using AGADIR; loops and random peptides were stabilized by modifying those amino acids increasing peptide configurational entropy or those inducing structural tensions; Cysteins were added whenever the peptide contained loops for inducing disulfide bridge formation. These analogue peptides were synthesized and both biophysically and chemically assessed. Peptides 11435, 11438 and 18301 displayed an unstable a helix due to a positive entropy variation during unfolding. Peptides 33208 and 33210 (11435 analogues); peptides 33203, 33205 and 33206 (11435 analogues) and peptides 32588, 32861, 32591, 32592, 32866, 32967, 32968, 32996, 34098, 34100 and 34101 (18301 analogue) displayed a more stable a helix than the original peptide. Most peptide analogues were recognized by anti-EBV or anti-VLP antibodies; some inhibited in vitro virus invasion and elicited the same biological response that their native peptides, sometimes in a greater extend as in the inhibition of dendritic cells maturation by peptide 33210 and IL-6 production by peptides 33220, 33363, 34295, 34297 and 33358. Peptides 32991, 33227, 33229, 33230 and 34087 specifically reacted with antibodies from HPV-infected women. The interaction between native peptides 11382, 11389, 11435, 18283, 18294 and 18301 and their respective antibodies was enthalpy driven; whereas a negative entropy change opposed peptide-antibody binding. Binding of analogue peptides 33210, 33215, 33225 and 33233 to their corresponding antibodies was entropy driven, probably due to a decrease in peptide’s configurational entropy and increases structural stability, compared to those from the original peptides. In conclusion, lowering the peptide’s configurational entropy increases the biological activity of these analogue peptides.Doctorad

α-Helix peptides designed from EBV-gH protein display higher antigenicity and induction of monocyte apoptosis than the native peptide

We tested the hypothesis that stabilizing α-helix of Epstein–Barr virus gH-derived peptide 11438 used for binding human cells will increase its biological activity. Non-stable α-helix of peptide 11438 was unfolded in an entropy-driven process, despite the opposing effect of the enthalpy factor. Adding and/or changing amino acids in peptide 11438 allowed the designing of peptides 33207, 33208 and 33210; peptides 33208 and 33210 displayed higher helical content due to a decreased unfolding entropy change as was determined by AGADIR, molecular dynamics and circular dichroism analysis. Peptides 33207, 33208 and 33210 inhibited EBV invasion of peripheral blood mononuclear cells and displayed epitopes more similar to native protein than peptide 11438; these peptides could be useful for detecting antibodies induced by native gH protein since they displayed high reactivity with anti-EBV antibodies. Anti-peptide 33207 antibodies showed higher reactivity with EBV than anti-peptide 11438 antibodies being useful for inducing antibodies against EBV. Anti-peptide 33210 antibodies inhibit EBV invasion of epithelial cells better than anti-peptide 11438 antibodies. Peptide 33210 bound to normal T lymphocytes and Raji cells stronger than peptide 11438 and also induced apoptosis of monocytes and Raji cells but not of normal T cells in a similar way to EBV-gH. Peptide 33210 inhibited the monocytes’ development toward dendritic cells better than EBV and peptide 11438. In conclusion, stabilizing the α-helix in peptides 33208 and 33210 designed from peptide 11438 increased the antigenicity and the ability of the antibodies induced by peptides of inhibiting EBV invasion of host cells

Prevalencia de VPH-ADN y anticuerpos anti-VPH en mujeres de girardot, Colombia

Objective: To assess the frequency of HPV-DNA detection, human papillomavirus (HPV) seropositivity, presence of cervical lesions, and its relationship with certain socio-demographic factors in women from Girardot, Colombia from 2006 to 2007. Methods: Nine hundred fifty-three women attending their regular Pap smear control voluntarily provided cervical cells and blood samples for HPV-DNA analysis and ELISA detection of anti-L1 peptides and virus-like particles (VLPs) antibodies after answering a questionnaire regarding sexual behaviors, number of births, smoking habits, and socio-demographic background. Results: Twenty-six of the 953 women being examined (2.73%) presented cervical cell abnormalities. A frequency of 36.62% (95% CI: 33.52%–39.7%) HPV seropositivity was detected with peptide 18301, 35.36% (95% CI: 32.3%–38.4%) with 18283, and 32.95% (95% CI: 29.9%–36%) with 18294, whereas VLPs detected a 43% seropositivity (95% CI: 39.8%– 46.2%). Antibody frequency found with all peptides was significantly higher in women having cervical abnormalities (atypical squamous cells of undetermined significance and high-grade squamous intraephitelial lesions) compared with those having normal cytologies. Peptide 18283 reported a significantly higher seropositivity (35.71%) in women 44 years old, whereas peptides 18301 and 18294 evidenced a significantly lower seropositivity in those who had never given birth. HR-HPV-DNA was detected in 157 (20.50%) of 766 cervical samples amplifying positively for the -globin housekeeping gene. Conclusion: Peptides 18283, 18294, and 18301 were more specific and more sensitive than VLPs for detecting women with HR-HPV-DNA positive cervical lesions. Therefore, they could be useful in the design of a serological test for detecting HR-HPV-infected women having cervical lesions at a risk of progressing to cervical cancer

CENTRO INTERACTIVO DE COMUNICACIONES EN C.U.

El presente trabajo tiene como uno de sus principales objetivos el encontrar una metodología y aplicarla para el desarrollo del proyecto arquitectónico, deja momentáneamente de lado, los aspectos técnicos que no influyen en lo referente al diseño, aunque sí tienen un grado de participación; misma que no se ve de manera detallada en el presente trabajo de tesis. Metodología que obedece a inquietudes personales, que van desde la experiencia y conocimiento adquiridos en la formación académica, - producto de maestros y asignaturas- que marcaron de forma provocativa mis intenciones hacia el diseño, intenciones que se reflejan en el cómo entender la Arquitectura, sentirla, desarrollarla, estudiarla y en el cómo mantener un interés constante. De igual forma, la metodología nace de la exploración a movimientos arquitectónicos y de la búsqueda en la teoría de algunos arquitectos contemporaneos, sus obras, sus percepción del espacio y sus análisis del diseño contemporaneo. Además de concluir en una propuesta de proyecto arquitectónico, se explican todas las fases y adaptaciones de diseño con un lenguaje gráfico, atendiendo así, una prioridad que debe tener todo arquitecto, se propone un esquema “diferente” de tesis. Uno de los temas que se funde en todo el trabajo es la comunicación desde el punto de vista práctico (o técnico), al mismo tiempo el tema encierra todo el concepto del proyecto que nace como una necesidad que vive actualmente la radio nicolaíta, y que al paso de la investigación y la vivencia se crece hasta aterrizarlo en un conjunto de comunicaciones. Así, nace el nombre del proyecto, el cual acota sus alacances y define desde el momento de nombrarlo: “ centro interactivo de comunicaciones en C.U.

La Construcción de la Contaminación Atmosférica como Problema Público, Santiago de Chile (1961-1978)

La finalidad de esta investigación es analizar los orígenes de la política pública de combate a la contaminación atmosférica en Santiago de Chile y, en particular, el rol que desempeñaron los científicos en este proceso. Para alcanzar este objetivo se examinaron fuentes documentales legislativas, notas del periódico “El Mercurio” y publicaciones científicas entre los años 1961 y 1978, aplicándose un análisis de contenido mixto. Los resultados sugieren que los expertos, haciendo uso de sus redes nacionales e internacionales, fueron capaces de convertir la calidad del aire en un problema de interés nacional que debía resolverse mediante la elaboración de una normativa integral validada por los resultados de la investigación académica y legitimada por una incipiente demanda social en el mismo sentido. Aquello condujo a la conformación de sucesivas comisiones técnico-políticas que asumieron la tarea de comprender el problema de la contaminación atmosférica y proponer medidas para su resolución. A pesar de la promulgación temprana de una legislación específica, la evidencia señala que la complejidad del problema de la contaminación superó la capacidad técnico-política que poseía el Estado para resolver el problema de manera efectiva, el cual se ha extendido hasta el presente

Mechanical Properties of Natural-Fiber-Reinforced Biobased Epoxy Resins Manufactured by Resin Infusion Process

This work deals with the manufacture and mechanical characterization of natural-fiber-reinforced biobased epoxy resins. Biolaminates are attractive to various industries because they are low-density, biodegradable, and lightweight materials. Natural fibers such as Ixtle, Henequen, and Jute were used as reinforcing fabrics for two biobased epoxy resins from Sicomin®. The manufacture of the biolaminates was carried out through the vacuum-assisted resin infusion process. The mechanical characterization revealed the Jute biolaminates present the highest stiffness and strength, whereas the Henequen biolaminates show high strain values. The rigid and semirigid biolaminates obtained in this work could drive new applications targeting industries that require lightweight and low-cost sustainable composites

Increase of a calcium independent transglutaminase activity in the erythrocyte during the infection with Plasmodium falciparum

We have studied the activity of a calcium dependent transglutaminase (EC 2.3.2.13) during the growth of the parasite Plasmodium falciparum inside the infected human erythrocyte. There is only one detectable transglutaminase in the two-cell-system, and its origin is erythrocytic. No activity was detected in preparations of the parasite devoid of erythrocyte cytoplasm. The Michaelis Menten constants (Km) of the enzyme for the substrates N'N'dimethylcaseine and putrescine were undistinguishable whether the cell extracts used in their determination were obtained from normal or from infected red cells. The total activity of transglutaminase in stringently synchronized cultures, measured at 0.5mM Ca2+, decreased with the maturation of the parasite. However, a fraction which became irreversibly activated and independent of calcium concentration was detected. The proportion of this fraction grew with maturation; it represented only 20% of the activity in 20 hr-old-trophozoites while in 48-hr-schizonts it was more than 85% of the total activity. The activation of this fraction of transglutaminase did not depend on an increase in the erythrocyte cytoplasmic calcium, since most of the calcium was shown to be located in the parasite

Increase of a Calcium Independent Transglutaminase Activity in the Erythrocyte during the Infection with Plasmodium falciparum

We have studied the activity of a calcium dependent transglutaminase (EC 2.3.2.13) during the growth of the parasite Plasmodium falciparum inside the infected human erythrocyte. There is only one detectable transglutaminase in the two-cell-system, and its origin is erythrocytic. No activity was detected in preparations of the parasite devoid of erythrocyte cytoplasm. The Michaelis Menten constants (Km) of the enzyme for the substrates N'N'dimethylcaseine and putrescine were undistinguishable whether the cell extracts used in their determination were obtained from normal or from infected red cells. The total activity of transglutaminase in stringently synchronized cultures, measured at 0.5mM Ca2+, decreased with the maturation of the parasite. However, a fraction which became irreversibly activated and independent of calcium concentration was detected. The proportion of this fraction grew with maturation; it represented only 20% of the activity in 20 hr-old-trophozoites while in 48-hr-schizonts it was more than 85% of the total activity. The activation of this fraction of transglutaminase did not depend on an increase in the erythrocyte cytoplasmic calcium, since most of the calcium was shown to be located in the parasite