Az emberi multidrog rezisztencia fehérjék működése és fiziológiás szerepe = Molecular mechanism and physiological function of the human multidrug resistance proteins

A pályázat keretében az emberi multidrog rezisztens fehérjék (MRP) működési mechanizmusát és fiziológiás szerepét vizsgáltuk. Korábbi adataink szerint az MRP fehérjékben az N aktív centrum nagyobb affinitással köti az ATP-t, a C aktív centrum pedig az ATP hidrolízisében aktívabb. Kísérleteinkben a két aktív centrum funkcionális különbségének szerkezeti alapjait vizsgáltuk. Az MRP fehérjék ABC doménjainak szekvenciáját összehasonlítva két olyan régiót találtunk, amelyekben a két ABC domén konzerváltan eltér egymástól. Olyan MRP1 mutánsokat készítettünk, amelyekben ezen regiókban lévő eltérő aminosavakat az egyik ABC doménban kicseréltük a másik ABC domén megfelelő aminosavaival. A mutánsokat expressziós rendszerben magas szinten expresszáltuk, majd megvizsgáltuk a mutációk hatását a transzport aktivitásra. Adataink szerint a C-ABC domén Walker A régióját és az N-ABC domén signature régióját érintő aminosav csere külön-külön parciálisan, míg együttesen drasztikusan csökkenti a fehérje aktivitását. Az N-ABC Walker A régióját érintő csere nem befolyásolja, míg a C-ABC signature régiójában végzett csere eliminálja a fehérje aktivitását, ami azonban az N-ABC Walker A-t érintő mutáció egyidejű bevitelére helyreáll. Eredményeink alapján feltételezzük, hogy az N-ABC Walker A es a C-ABC signature régiójának monitorozott, - a C-ABC Walker A es N-ABC signature megfelelő aminosav párjától eltérő - aminosavpárja hozzájárul, hogy az N aktív centrum gyengébb hidrolitikus tulajdonságú. | A pályázat keretében az emberi multidrog rezisztens fehérjék (MRP) működési mechanizmusát és fiziológiás szerepét vizsgáltuk. Korábbi adataink szerint az MRP fehérjékben az N aktív centrum nagyobb affinitással köti az ATP-t, a C aktív centrum pedig az ATP hidrolízisében aktívabb. Kísérleteinkben a két aktív centrum funkcionális különbségének szerkezeti alapjait vizsgáltuk. Az MRP fehérjék ABC doménjainak szekvenciáját összehasonlítva két olyan régiót találtunk, amelyekben a két ABC domén konzerváltan eltér egymástól. Olyan MRP1 mutánsokat készítettünk, amelyekben ezen regiókban lévő eltérő aminosavakat az egyik ABC doménban kicseréltük a másik ABC domén megfelelő aminosavaival. A mutánsokat expressziós rendszerben magas szinten expresszáltuk, majd megvizsgáltuk a mutációk hatását a transzport aktivitásra. Adataink szerint a C-ABC domén Walker A régióját és az N-ABC domén signature régióját érintő aminosav csere külön-külön parciálisan, míg együttesen drasztikusan csökkenti a fehérje aktivitását. Az N-ABC Walker A régióját érintő csere nem befolyásolja, míg a C-ABC signature régiójában végzett csere eliminálja a fehérje aktivitását, ami azonban az N-ABC Walker A-t érintő mutáció egyidejű bevitelére helyreáll. Eredményeink alapján feltételezzük, hogy az N-ABC Walker A es a C-ABC signature régiójának monitorozott, - a C-ABC Walker A es N-ABC signature megfelelő aminosav párjától eltérő - aminosavpárja hozzájárul, hogy az N aktív centrum gyengébb hidrolitikus tulajdonságú

Az ABCG2 multidrog transzporter fehérje szerkezetének és működésének vizsgálata = Structure and function of the multidrug transporter ABCG2

Az ABCG2 multidrog transzporternek fontos szerepe van mind a daganatok kemoterápia-rezisztenciájában, mind a fiziológiás xenobiotikum transzportban. A projektben előállítottuk az ABCG2 fehérje különböző mutáns és polimorf változatait, elvégeztük ezek részletes funkcionális vizsgálatát. Egy sejtfelszínen reagáló, konformáció-érzékeny anti-ABCG2 monoklonális antitest alkalmazásával felderítettük a transzporter funkcionális állapotait, kémiai módosítások és mutációk segítségével elvégeztük az epitópok jellemzését és molekuláris szintű modellezését. Részletesen elemeztük az ABCG2 transzporter és a membrán lipidek kölcsönhatásait, megállapítottuk a membrán koleszterin jelentős szabályozó szerepét. Az ABCG2 transzporter és célzott hatású rákellenes vegyületek kölcsönhatásainak vizsgálata során klinikailag is alkalmazott gyógyszerekre vonatkozóan kaptunk új információkat. Új módszereket fejlesztettünk ki az ABCG2 szabályozásának, lokalizációjának és funkciójának vizsgálatára, elemeztük a transzporter expresszióját humán embrionális őssejtekben. Több, magas impakt faktorú nemzetközi folyóiratban közöltünk a témáról review cikkeket. | The human ABCG2 multidrug transporter plays a key role in the chemotherapy resistance of malignant tumors, as well as in the physiological elimination of xenobiotics. In this project we have prepared and expressed various mutant and polymorphic variants of the transporter, performed their detailed functional characterization. By using a cell-surface reacting, conformation-sensitive monoclonal antibody against ABCG2, we mapped the functional states of the transporter. In these experiments we applied specific chemical modifications and generated site-directed mutations to characterize the extracellular loop epitope region of ABCG2 and constructed a molecular model for this part of the transporter. We have investigated the modulation of ABCG2 by membrane lipids and found a major role for cholesterol in regulating the transport activity of this protein. By examining a number of new targeted anticancer agents we found that ABCG2 interacts with several of these compounds and may be involved in the resistance against clinically applied molecules. We have developed new methods for studying the regulation, localization and function of the ABCG2 protein, examined the expression profile of this transporter in human embryonic stem cells. During this project we have published several review articles in high-impact international journals

Effects of 1-year anti-TNF-α therapies on bone mineral density and bone biomarkers in rheumatoid arthritis and ankylosing spondylitis

L

Evaluation of the returns and costs between 2009 and 2011 on a Hungarian large scale beef cattle farm with special regards to the animal health costs

Manapság a húsmarhatartás a reneszánszát éli: az elmúlt pár évben az exportlehetőségek miatt igen jó volt a húsmarhák piaci értéke, magasak a támogatások és ez egy viszonylag könnyen beindítható, kevés kezdőtőkét igénylő állattenyésztési ágazat. Ennek ellenére az ágazat bevételeinek és költségeinek megoszlásáról viszonylag keveset tudunk, és ezt megelőzően nem készült felmérés a húsmarhatelepek állat-egészségügyi költségeiről. Dolgozatomban egy Somogy megyei nagylétszámú húsmarha telep bevételeinek és költségeinek 2009 és 2011 közötti alakulását vizsgáltam meg, különös tekintettel a felhasznált gyógyszerekre. Munkám során áttekintettem a hústermelés jövedelmezőségét meghatározó legfontosabb tényezőket: a hozamokat, bevételeket és költségeket, és összefoglaltam a húsmarhatartás során igényelhető támogatási formákat

Nucleotides and transported substrates modulate different steps of the ATPase catalytic cycle of MRP1 multidrug transporter.

The human ABC (ATP-binding cassette) transporter MRP1 (human multidrug-resistance-associated protein 1; ABCC1) is involved in the cellular extrusion of conjugated metabolites and causes multidrug resistance in tumour cells. The transport of substrate molecules by ABC proteins is energized by ATP hydrolysis, performed by two co-operating ABC units. Orthovanadate (Vi), a non-covalent inhibitor of the ABC ATPases, was found to catalyse a photo-oxidative cleavage of various ATP-binding proteins. In the present study, we have identified three Vi-cleavage sites within MRP1, and found that the cleavage reactions were variably modulated by the presence of nucleotides and by transported substrates. We concluded that Vi cleavage of MRP1 at Site I detects conformational changes due to the binding of MgATP. In contrast, Site II could be identified as part of the substrate-modulated catalytic cycle, probably containing an MRP1.MgADP.Vi transition-state-like complex. Cleavage at Site III was modulated by both the binding and hydrolysis of MgATP, in a biphasic pattern, which was also affected by the presence of transported substrates. We detected two different allosteric effects and found that they control two consecutive steps of the MRP1 ATPase catalytic cycle. Nucleotide binding to the low-affinity site accelerated the formation of the pre-hydrolytic intermediate in the other catalytic centre. Interaction of the transporter with its transported substrates stimulated a later reaction of the hydrolytic cycle, the formation of the post-hydrolytic intermediate, which could be detected in both catalytic sites by the experimental strategy used

TNF-gátló terápia hatása a csonthomeostasisra rheumatoid arthritisben és spondylitis ankylopoeticában

L