Hsp12 influencia a fagocitose e resposta ao estresse em Cryptococcus gattii

Cryptococcus gattii é uma das espécies causadoras da criptococose, a qual pode acometer tanto indivíduos imunocomprometidos quanto imunocompetentes. Devido a relevância clínica dessa doença, estudos para compreensão dos mecanismos de virulência deste patógeno são importantes. Sabe-se que proteínas de choque térmico (Hsp) são fundamentais para homeostase e influenciam fatores de virulência importantes durante a infecção. Contudo, ainda há uma falta de conhecimento quanto a pequenas Hsps (sHsp) em células fúngicas e seu papel durante infecção. Considerando o exposto, esse trabalho propõe-se a caracterizar uma Hsp12 de C. gattii através da construção de uma linhagem mutante nula (Δhsp12). Os níveis de expressão relativa do gene HSP12 apresentaram um aumento significativo durante condição de choque térmico, enquanto a exposição a concentração subinibitória de fluconazol levou a sua redução. A linhagem Δhsp12 também apresentou maior sensibilidade ao estresse oxidativo e de membrana, quando comparado com a linhagem selvagem. Além disso, durante ensaio de interação com macrófagos a linhagem Δhsp12 apresentou uma maior taxa de fagocitose quando comparada com a linhagem selvagem. Dessa forma, Hsp12 possui importante papel durante o estresse oxidativo e de membrana, além de influenciar a taxa de fagocitose de C. gattii

Validation of a Multiplex Tandem Mass Spectrometry Method for the Detection of Selected Lysosomal Storage Diseases in Dried Blood Spots

Background: Interest in screening methods for lysosomal storage diseases (LSDs) has increased in recent years, since early diagnosis and treatment are essential to prevent or attenuate the onset of symptoms and the complications of these diseases. In the current work, we evaluated the performance of tandem mass spectrometry (MS/MS) for the detection of some LSDs, aiming the future use of this methodology for the screening of these disorders. Methods: Standard curves and quality control dried blood spots were assayed to evaluate the precision, linearity, and accuracy. A total of 150 controls were grouped according to age and subjected to measurement of lysosomal enzymes deficient in Niemann-Pick A/B, Krabbe, Gaucher, Fabry, Pompe, and Mucopolysaccharidosis type I diseases. Samples from 59 affected patients with a diagnosis of LSDs previously confirmed by fluorimetric methods were analyzed. Results: Data from standard calibration demonstrated good linearity and accuracy and the intra- and interassay precisions varied from 1.17% to 11.60% and 5.39% to 31.24%, respectively. Except for galactocerebrosidase and α- l -iduronidase, enzyme activities were significantly higher in newborns compared to children and adult controls. Affected patients presented enzymatic activities significantly lower compared to all control participants. Conclusion: Our results show that MS/MS is a promising methodology, suitable for the screening of LSDs, but accurate diagnoses will depend on its correlation with other biochemical and/or molecular analyses