Determinação do tamanho e da virulência de variantes estáveis (Many Polyhedra) do vírus Anticarsia gemmatalis MNPV.

Entre as limitações relacionadas à produção de baculovírus em cultivos celulares, a mais considerável é a perda de virulência devido a mutações ocasionadas pela passagem serial do vírus. Uma estratégia para a otimização da produção in vitro é a seleção de variantes geneticamente mais estáveis denominados Many Polyhedra (MP). Neste trabalho foi feita a determinação do tamanho dos poliedros e da virulência de seis variantes MP selecionados a partir da passagem do vírus Anticarsia gemmatalis MNPV (AgMNPV) em células BTI-Tn5-B1-4. O cálculo do comprimento dos poliedros foi feito em microscópio eletrônico de varredura DSM 962, Zeiss. O tamanho médio dos clones MPs variou de 1,72??m (MP1) a 2,18 ?m (MP5). O inoculo original AgMNPV-2D, utilizado com referência, apresentou valor de 2,09?m. O tratamento estatístico dos dados, pela Análise de Variância (ANOVA) e teste de Tukey-Kramer, revelou que não existe diferença significante entre os variantes MP2, MP3, MP5, MP6 e AgMNPV-2D. Os variantes MP4 e MP1 foram distintos dos outros clones em relação ao tamanho, o que foi confirmado pelo método de Dunnett’s. Foi feita a avaliação da virulência, por Análise de Regressão Probit, após incorporação do vírus em dieta artificial oferecida a larvas de 3º instar de Anticarsia gemmatalis. Os parâmetros de Concentrações Letais CL50 e CL99 e de Tempo Médio de Mortalidade (TM) das amostras foram determinados. Entre os dados obtidos foi observado que os clones MP4 e MP3 apresentam uma alta virulência, com CL50 de 173 e 504 OBs/ml de dieta e com TM de 7,02 e 7,78 dias, respectivamente. Por outro lado, o clone MP5, com a média maior de tamanho, apresenta uma virulência mais baixa, com CL50 de 1787 OBs/ml de dieta e com TM de 9,34 dias. Não foi possível estabelecer uma correlação entre o tamanho dos poliedros (variação no número de virions) e sua virulência. Os resultados indicam que a virulência está relacionada às características intrínsecas dos genótipos virais que compõem o corpo de oclusão

In vitro infectivity of Spodoptera frugiperda multiple nucleopolyhedrovirus to different insect cell lines.

<div><p>Abstract: The objective of this work was to evaluate the response of an in vitro host range to Spodoptera frugiperda multiple nucleopolyhedrovirus (SfMNPV), a pathogenic virus to the fall armyworm (Spodoptera frugiperda, Lepidoptera: Noctuidae), for the further development of a biopesticide based on cell culture systems. The cell lines from Bombyx mori (BM-5), Lymantria dispar (IPLB-LD-625Y), Trichoplusia ni (BTI-Tn-5B1-4), Anticarsia gemmatalis (UFL-AG-286), and S. frugiperda (IPLB-SF-21AE and Sf9) were tested for their susceptibility to a highly-virulent Brazilian isolate of SfMNPV. The cytopathic effects induced by the virus, the production of viral particles, and the synthesis of viral polypeptides were examined and compared. Both S. frugiperda cell lines showed hypertrophy of cell nuclei and production of many polyhedra. The SDS-Page of radiolabed proteins showed that the cell protein synthesis was shutoff, while an intense band of about 30 kDa, recognized as polyhedrin, was synthesized. The other cell lines did not show polyhedra production, although some of them underwent morphological changes and protein synthesis shutdown in response to virus infection. The SF-21 and Sf9 cell lines are recommended for further in vitro production of SfMNPV.</p></div

Biological activity of poriferans extracts from the Colombian Caribbean on Meloidogyne incognita and Spodoptera frugiperda IPLB-SF-21 cell line.

Sinconbiol

Caracterização de Erinnyis ello Granulovirus isolado de populações de mandarová da mandioca em Cruzeiro do Sul, Acre.

Baculovirus são vírus em forma de bastão, envelopados, com DNA dupla fita circular, sendo que a maioria das espécies infecta insetos da ordem Lepidóptera. Devido a seu potencial como agentes de controle de pragas na agricultura e florestas, eles tem sido empregados com sucesso como bioinseticidas. O mandarová da mandioca (Erinnyis ello) é uma importante praga da mandioca e da seringueira com alta capacidade de migração. Neste trabalho é apresentada a caracterização de um baculovírus com ocorrência em populações de Erinnyis ello em área privada (agricultura familiar) no município de Cruzeiro do Sul, Acre (Latitude -7,55086; Longitude -72,72570). Inicialmente partículas virais foram purificadas de larvas com sintomas de infecção através de ultracentrifugação em gradiente de sacarose. Após tratamento para microscopia eletrônica seguido de contraste com acetato de uranila 2%, as partículas foram fotografadas utilizando-se microscópio eletrônico JEOL 1011. O vírus de forma ovalada, apresentando apenas um vírion por envelope e com menos de 0,5 uM, foi identificado como sendo do gênero Betabaculovirus (extinto gênero Granulovirus) da família Baculoviridae. Em seguida o DNA viral foi extraído através de ciclos de fenol e clorofórmio, digerido com diferentes enzimas de restrição e submetido a eletroforese em gel de agarose. A analise dos perfis de restrição obtidos com as enzimas Bam HI e com Hind III revelou um total de sete e de três fragmentos, respectivamente. Na clivagem com Pst I, foram identificados oito fragmentos molares e três submolares. Na digestão com Eco RI foi observado um número superior a vinte fragmentos incluindo várias bandas submolares. Embora tenha apresentado algumas diferenças, o perfil de restrição do DNA do isolado EeGV coletado no Acre foi similar ao descrito para o isolado EeGV proveniente de Itajai, SC, cujo genoma completo possui 102,759 bp. A determinação da sequência genômica do isolado do Acre encontra-se em andamento

Bioreactor production process of Spodoptera frugiperda multiple nucleopolyhedrovirus biopesticide.

ABSTRACT - Spodoptera frugiperda (fall armyworm) is one of the most important maize pests in the world and the baculovirus Spodoptera frugiperda multiple nucleopolyhedrovirus (SfMNPV), a natural pathogen of this pest, has been used as a biopesticide for its control. At present, in vivo strategies at the commercial scale are employed by multiplying the virus in the host insect in biofactory facilities; however, in vitro large-scale production is an interesting alternative to overcome the limitations of baculoviruses massal production. This study aimed to develop the process of the SfMNPV in vitro production by evaluating the effects of different multiplicities of infection (MOI) and nutritional supplements, morphological and molecular analysis of the infection on the growth of Sf9 cells and virus production. The Bioreactor Stirred Tank Reactor (STR) approach with glutamine-supplemented Sf-900 III serum free culture medium, combined with the MOI of 1.0, showed the best viral production performance, with a specific productivity above 300 occlusion bodies (OBs)/cell and volumetric productivity of 9.0 x 10¹¹ OBs/L

Identificacao e caracterizacao de isolados de baculovirus com potencial para controle biologico de Spodoptera frugiperda.

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Manual de orientações básicas para estagiários do Núcleo Temático de Controle Biológico.

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