Organisation, expression et polymorphismes des gènes ACVR2B et FST, intervenant dans la voie de signalisation de la myostatine (GDF-8)

La croissance du muscle squelettique est un processus complexe, impliquant de nombreux facteurs moléculaires. La myostatine (GDF-8) est un puissant régulateur négatif du développement musculaire, et l absence d une protéine fonctionnelle provoque une incroyable augmentation de la masse musculaire, chez la souris et le bovin. Des mutations dans le gène codant la myostatine ont été associées à l extrême musculature observée chez le bovin. Cependant, des individus présentant différents degrés d hypertrophie musculaire ont également été observés, sans qu aucune mutation identifiée dans le gène codant la myostatine ne soit responsable. Ces observations phénotypiques suggèrent l implication d autres mutations, qui pourraient modifier la fonctionnalité des partenaires de la voie de signalisation de la myostatine, et/ou l implication d un mécanisme de régulation quantitative, qui résulterait d une modification de l affinité de la myostatine avec ses partenaires. Dans ce travail, nous avons étudié les gènes codant le récepteur de la myostatine, ActRIIB, et une protéine inhibitrice, la follistatine. Nous avons déterminé la structure bovine de ces deux gènes, et recherché d éventuels polymorphismes chez des individus avec des degrés différents de développement musculaire. Aucun polymorphisme modifiant les séquences protéiques de ces deux gènes n a été détecté. Une insertion/délétion de 6 pb et un SNP, détectés dans la région promotrice du gène ACVR2B, qui code pour le récepteur ActRIIB, semblent influencer l activité transcriptionnelle de ce gène, in vitro. Un microsatellite polymorphe est présent dans la région promotrice du gène FST chez le bovin, la souris, l homme et le rat, et pourrait modifier son expression. Ces résultats préliminaires, ouvrent de nouvelles perspectives d étude sur l influence possible de ces polymorphismes sur l expression des gènes ACVR2B et FST, et par conséquent, sur la régulation de la voie de signalisation de la myostatineLIMOGES-BU Sciences (870852109) / SudocSudocFranceF

Semaphorin SEMA3F and VEGF Have Opposing Effects on Cell Attachment and Spreading

SEMA3F, isolated from a 3p21.3 deletion, has antitumor activity in transfected cells, and protein expression correlates with tumor stage and histology. In primary tumors, SEMA3F and VEGF surface staining is inversely correlated. Coupled with SEMA3F at the leading edge of motile cells, we previously suggested that both proteins competitively regulate cell motility and adhesion. We have investigated this using the breast cancer cell line, MCF7. SEMA3F inhibited cell attachment and spreading as evidenced by loss of lamellipodia extensions, membrane ruffling, and cell-cell contacts, with cells eventually rounding-up and detaching. In contrast, VEGF had opposite effects. Although SEMA3F binds NRP2 with 10-fold greater affinity than NRP1, the effects in MCF7 were mediated by NRP1. This was determined by receptor expression and blocking of anti-NRP1 antibodies. Similar effects, but through NRP2, were observed in the C100 breast cancer cell line. Although we were unable to demonstrate changes in total GTP-bound Rac1 or RhoA, we did observe changes in the localization of Rac1-GFP using time lapse microscopy. Following SEMA3F, Rac1 moved to the base of lamellipodia and — with their collapse — to the membrane. These results support the concept that SEMA3F and VEGF have antagonistic actions affecting motility in primary tumor cell