CALIDAD BACTERIOLOGICA DE ENSALADAS DE ZANAHORIA RALLADA Y EFICACIA DE TRATAMIENTOS PREVIOS A SU CONSUMO

Introducción: La venta de ensaladas listas para consumir creció en los últimos años. Desde 2012, el Código Alimentario Argentino (CAA), Art. 925 quater, regula la aptitud de las mismas. Objetivo: Evaluar la calidad bacteriológica de ensaladas de zanahoria rallada y estudiar la reducción bacteriana frente al lavado con agua potable y la desinfección con hipoclorito de sodio y con una solución de vinagre. Métodos: Se analizaron 30 muestras de ensalada de zanahoria rallada y se les aplicaron los tratamientos mencionados, para evaluar las diferencias se realizó una prueba no paramétrica de Friedman. Resultados: El 50% de las muestras no cumplió con el CAA para Escherichia coli. El porcentaje disminuyó al 45 con un lavado previo o tratamiento con vinagre. Entre estos tratamientos no hubo diferencias. La desinfección con hipoclorito aumentó la aptitud un 15% y presentó diferencias altamente significativas con el resto (p < 0.01). Salmonella se encontró en el 7% de las muestras y se eliminó con hipoclorito. E.coli O157 no se detectó. El 100% de las muestras presentaron recuentos de Staphylococcus aureus menores a 2500 UFC.g-1, lo cual no constituiría un riesgo potencial. Discusión: Se destaca la importancia de la calidad microbiológica de la materia prima, dado que el 35% de las muestras no logró la aptitud aun aplicando el tratamiento con hipoclorito. Se plantea la necesidad del rotulado apropiado para evitar dejar librado al criterio del consumidor el manejo del alimento. La implementación de Buenas Prácticas Agrícolas y de Manufactura contribuiría a obtener alimentos inocuos, de mejor calidad microbiológica.ABSTRACTIntroduction: The sale of ready-to-eat salads increased in recent years. Since 2012, the Código Alimentario Argentino (CAA), Art. 925 quater, regulates its microbiological quality. Objective: To evaluate the bacteriological quality of grated carrot and to study the reduction of bacterial counts applying washing with tap water, disinfection with sodium hypochlorite and with a vinegar solution. Methods: Thirty grated carrot samples were analyzed and the above-mentioned treatments were applied. A nonparametric Friedman test was performed to evaluate the differences. Results: 50% of the samples expended did not achieve the requirements of the CAA for Escherichia coli. The percentage dropped to 45 with a previous-wash or treatment with vinegar. No differences were found between these treatments. When disinfection with hypochlorite was done 15% more reached the requirements and this treatment showed highly significant differences with the rest (p < 0,01) .Salmonella was found in 7 % of the samples and were eliminated with hypochlorite. E.coli O157 was not detected. 100% of the samples showed Staphylococcus aureus counts less than 2500 UFC.g-1, which do not constitute a potential risk. Discussion: It should be pointed out the importance of the microbiological quality of raw material, since the 35% of the samples do not reach the requirements even applying the treatment with hypochlorite. Appropriate labeling is necessary to avoid leaving up to consumers criteria the food handling. The implementation of Good Agricultural Practices and Manufacturing would contribute to safe food, and of better microbiological quality.Palabras Clave: vegetales mínimamente procesados; calidad bacteriológica; seguridad alimentaria, : minimally processed vegetables; bacteriological quality; food Safet

Evaluación de la capacidad de formar biofilm de micobacterias ambientales aisladas de agua de natatorios públicos y de agua de lluvia de la ciudad de General Pico

La persistencia de micobacterias ambientales (MA) en los hábitats modificados por el hombre, entre los cuales se encuentran los natatorios de uso recreacional y/o terapeúticos se debe a su oligotrofia, diversidad nutricional, resistencia a los desinfectantes y fundamentalmente a la formación de biofilm. Estos factores actuarían como agentes selectivos, favoreciendo la proliferación y dominio final de las MA en estos hábitats respecto a otros microorganismos presentes en el agua. Este incremento de micobacterias constituye una potencial fuente de infección principalmente para los individuos inmunocomprometidos. Es sabido que las bacterias se hallan en la naturaleza en dos formas o estados: creciendo en biofilms (99%) y en forma planctónica o de libre flotación (1%). Es clara la ventaja que significa para las micobacterias, ya sean patógenas o ambientales, la capacidad para colonizar superficies (animadas o inanimadas) mediante la formación de biofilm, debido a que éste les brinda mayor disponibilidad de nutrientes y protección contra factores ambientales naturales y artificiales. Teniendo en cuenta este concepto se formuló la 2º hipótesis del proyecto que tiene como objetivo: Evaluar la capacidad de formar biofilm in vitro de las cepas de MA aisladas de distintas fuentes de agua. Para valorar la capacidad de formar biofilm se sembraron inóculos estandarizados de las MA en policubetas estériles de PVC de 96 pocillos (BectonDickinson). Se incubaron a temperatura ambiente durante 30 minutos. Luego se adicionó el medio de cultivo Middlebrook 7H9 (MB) con glicerol. Las policubetas se taparon y se incubaron a 30 °C por 20 días. Para medir la formación del biofilm, los pocillos se lavaron con agua estéril, se tiñeron con cristal violeta al 1% y se incubaron 30 minutos a temperatura ambiente. Posteriormente se lavaron con agua y se secaron sobre papel secante. El colorante incorporado al biofilm se resuspendió en etanol:acetona (70:30). La cuantificación se realizó midiendo densidad óptica en un lector de microplacas (Kayto RT-2100C) a 630 nm. Se destinaron pocillos con el medio de cultivo MB con glicerol sin suspensión bacteriana como control negativo. Se utilizó a Mycobacterium smegmatis (cepa patrón) como control positivo. Los resultados mostraron que tanto los aislamientos de MA en agua de natatorios (9 cepas ensayadas de 16 aislamientos totales) como los correspondientes al agua de lluvia (4 cepas ensayadas de 7 aislamientos) mostraron capacidad para desarrollar biofilm in vitro. Las MA de agua de natatorio: Mycobacterium gordonae, Mycobacterium houstonense, Mycobacterium fortuitum y Mycobacterium mucogenicum (pertenecientes a los clados M. gordonae, M. fortuitum y M. mucogenicum, respectivamente) formaron biofilm mostrando consistencia débil a moderada (rango de absorbancias: 0,035 - 0,556). El biofilm formado por las MA ensayadas del agua de lluvia: Mycobacterium frederikbergense y Mycobacterium holsaticum (pertenecientes a los clados M. neoaurum y M. komossense) y dos cepas no tipificadas, varió desde consistencia débil a moderada-fuerte (rango de absorbancias: 0,160 - 0,738). Los resultados obtenidos hasta la fecha guían a concluir que la persistencia de las MA en los natatorios desinfectados con altas concentraciones de cloro podría asociarse a la capacidad de las mismas para formar biofil

Esporulación en micobacterias: ¿nuevo paradigma o fraude científico?/Sporulation in mycobacteria: New paradigm or scientific fraud?

This article shows the need to maintainrigueur in applying the scientific methodthrough the analysis of two publications onthe topic of mycobacterium sporulation. It alsoshows the importance of the evaluators andeditors of scientific magazines real work toavoid the fraud and confusion in establishinga new paradigm.Este artículo intenta evidenciar mediante el análisis de dos publicaciones referidas a la esporulación en micobacterias, la necesidad de mantener la rigurosidad en la aplicación del método científico y la importancia del trabajo real de los evaluadores y editores de las revistas científicas para evitar el fraude a tal punto que llegue a confundirse con el establecimiento de un nuevo paradigma DOI:http://dx.doi.org/10.19137/cienvet2014162

Prevalence and species diversity of nontuberculous mycobacteria in drinking water supply system of Bahía Blanca City, Argentina

Background: There is evidence that tap water is the vehicle through which nontuberculous mycobacteria (NTM) infect or colonize the human body. The objective of this study was to determine the presence and diversity of NTM in the water distribution system of Bahía Blanca city, Argentina (sites S2/S3) and in the dike that supplies water to it (S1). Methods: Culture-dependent method, biochemical tests, and molecular method (16S rRNA sequencing gene) were combined to detect and identify NTM. Results: NTM were isolated in 51.6% (64/124) of all the samples analyzed. Mycobacterium gordonae was the most frequently isolated organism (15/64) in all samples analyzed, followed by Mycobacterium peregrinum and Mycobacterium frederiksbergense. Significant differences were found in the residual chlorine values between sampling S2 and S3. In both sites, maximum counts were recorded but they did not correlate with low chlorine values. A concentration higher than 500 colony-forming unit/L of NTM was never found, which can be attributed to the negative effect caused by decontamination methods being a point to consider for the recovery of NTM. In 46.9% (30/64) of samples, both methods coincided in the identification, and the obtained sequences presented ≥99% identity. Identification at the species level was achieved in 50% (32/64) of the isolates. Nearly 17.2% (11/64) of the isolates showed a similarity <99%. Conclusions: It should be taken into account that sequencing of the 16S rRNA gene and biochemical tests are useful for the identification of several species, but it is necessary to incorporate other genes (hsp 65 and rpo B) to obtain accurate identification.Fil: Oriani, Alejandra Soledad. Universidad Nacional del Sur; ArgentinaFil: Marfil, Maria Jimena. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Zumárraga, Martín José. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Baldini, Monica Diana. Universidad Nacional del Sur; Argentin

Valoración de cuatro métodos de descontaminación para la recuperación de Micobacterias ambientales de diferentes nichos ecológicos /Analysis of four methods of decontamination to recover environmental mycobacterium in different ecological niches

When attempting to recover myco­bacterium through lab or environmental sam­ples it´s necessary to apply a decontamination method that reduces the accompanying micro­biota. It is possible to apply drastic decontami­nation methods due to the fact that mycobacte­rium presents a complex wall structure. There are several proposed methods, considering that the ideal method is the one that reduces accompanying microbiota without affecting the number of existing mycobacterium. The ob­jective of this study was to determine decimal reduction of a mycobacterium strain suspen­sion applying the decontamination methods proposed for soil samples, recreational water, tap water and fecal material. A mixed inoculum of mesophilic bacterium was determined (B M) commonly isolated from the environment and another one with a Mycobacterium porcinum strain recovered from tap water. Both inoculums were diluted until a suspension equivalent to a 1 tube of the Mc Farland scale was reached. The real number of bacterium was quantified using the dilution method with base 10. At the same time, three experiments were made to demonstrate decimal reduction when apply­ing different decontaminations methods when trying to recover mycobacterium from soil (Ii­vanainen, 1995); wetlands (Leite et al., 1989); tap water (Engel et al., 1980); and fecal material (Stabel et al., 1997). Results obtained in this study demonstrated that the Leite et al. (1989) and the Stabel et al. (1997) methods reduced the total number of contaminating bacterium while the number of Mycobacterium porcinum were reduced by 3 and 4 log. Independently ap­plying the methods of Iivanainen (1995) y Engel et al. (1980) reductions of 4 log were obtained in BM contaminants while in the Mycobacterium porcinum strain the reduction varied between 2,5 log and 1 log respectively. It is important to consider the mycobacterium reduction by each different method to correct mycobacterium count numbers in the environmental samples and also so that certain environments are not included as possible habitats of mycobacterium when they are not recovered by conventional methods due to the fact that they may be under the determined reduction valueCuando se intenta recuperar micobacterias a partir de muestras clínicas o del medio ambiente es necesario emplear métodos de descontaminación que disminuyan la microbiota acompañante. Es posible aplicar métodos drásticos de descontaminación debido a que las micobacterias presentan una compleja estructura de pared. Existen varios métodos propuestos, considerando como método ideal aquel que reduzca al máximo la microbiota acompañante sin disminuir o afectar el número de micobacterias presentes. El objetivo de este trabajo fue determinar la reducción decimal de una suspensión de una cepa de micobacterias ambientales aplicando los métodos de descontaminación propuestos para muestras de suelo, aguas recreacionales, agua de red, y materia fecal. Se determinó un inóculo mixto de bacterias mesófilas (BM) aisladas comúnmente del medio ambiente y otro con una cepa de Mycobacterium porcinumrecuperada de agua de red. Ambos inóculos se diluyeron hasta alcanzar una suspensión equivalente al tubo 1 de la escala de Mc Farland. Se cuantificó el número real de bacterias siguiendo el método de diluciónen base 10. Paralelamente se efectuaron tres experiencias para demostrar la reducción decimal al aplicar los distintos métodos de descontaminación cuando se intenta recuperar micobacterias desde suelo (Iivanainen, 1995), humedales (Leite et al., 1989); agua de red (Engel et al., 1980); y materia fecal (Stabel et al., 1997). Los resultados obtenidos en este trabajo demostraron que los métodos de Leite et al. (1989)y de Stabel et al. (1997) redujeron totalmente el número de bacterias contaminantes mientras que en M. porcinum se redujo el número en 3 y 4 log. Aplicando independientemente los métodos deIivanainen (1995) y Engel et al. (1980) se obtuvieron reducciones de 4 log en las BM contaminantes, mientras que para la cepa de M. porcinum la reducción osciló en 2,5 log y 1 log respectivamente. Es importante considerar la reducción del número de micobacterias que ocasionan los diferentes métodos para corregir los valores de los recuentos micobacterianos en las muestras ambientales y también para no excluir ciertos ambientes como posibles hábitas de micobacterias cuando éstas no se recuperan por los métodos convencionales ya que pueden estar debajo del valor de reducción determinado DOI:http://dx.doi.org/10.19137/cienvet2014162

Effect of chlorine on Mycobacterium gordonae and Mycobacterium chubuense in planktonic and Biofilm State

Background: There is evidence that drinking water could be a source of infections with pathogenic nontuberculous mycobacteria (NTM) potentially risky to human health. The aim was to investigate the resistance of two NTM isolated from drinking water, Mycobacterium gordonae and Mycobacterium chubuense, at different concentrations of chlorine (as sodium hypochlorite), used in drinking water sanitation. Methods: The NTM were grown in suspension and in biofilms and were challenged with biocide for 10 and 60 min. Results: To obtain 7-log reduction from the initial population of M. chubuense, in the planktonic state, there were necessary 20 ppm of chorine and 60 min of exposure. The same effect was achieved in M. gordonae with 10 ppm for the same period. The maximum reduction of both NTM in biofilm was 3-log reduction and was achieved using 30 ppm for 60 min. The chlorine susceptibility of cells in biofilms was significantly lower than that of planktonic cells. The results highlight the resistance of both NTM to the concentrations used in routine water sanitation (0.2 ppm according to Argentine Food Code). Differences in chlorine resistance found between the two NTM in planktonic growth decrease when they are grown in biofilm. Conclusion: This suggests that current water disinfection procedures do not always achieve effective control of NTM in the public supply system, with the consequent health risk to susceptible population, and the need to take into account biofilms, because of their deep consequences in the way to analyze the survival of prokaryotic cells in different environments

Composición lipídica de la pared celular de tres especies de micobacterias ambientales y su posible correlación con la formación de biofilms y movilidad por sliding / Lipid composition of cell wall of three species of environmental mycobacteria and its po

 The wall structures of Mycobacteria are usually associated with the abil­ity to form biofilm and motility by sliding. This study was performed with three strain of Environmental Mycobacteria (MA): Mycobacterium smegmatis, Mycobacterium gordonae and Mycobacterium porcinum. The goals of this paper were: a) to estab­lish by MALDI-TOF mass spectrometry (MS) whether there are differences in the lipid carbon chain composition in the cell wall when they are in plank­tonic growth or forming biofilm; b) to evaluate the relation between lipid carbon chain composition and their sliding and biofilm formation abil­ity. M. porcinum and M. smegmatis formed biofilms of different sizes and presented motility. M. gordonae devel­oped poor biofilm and did not move. MALDI-TOF spectra obtained from EM in a planktonic state differ from EM biofilm–grown ones in their cell–wall lipidic carbon chain composition. EM biofilm–grown spectra show a greater diversity. All biofilm–grown EM spec­tra present short chain mycolic acids. These results suggest the importance of these mycolic acids in the forma­tion of biofilm, especially in its matu­ration. M. gordonae presented also a higher proportion of long-chain fatty acid, compared to M. smegmatis and M. porcinum. The presence of long hy­drophobic chains could possibly gen­erate a greater friction, thus reducing its motility.La estructura de la pared de las micobacterias se asocia generalmente a la capacidad para formar biofilms y la movilidad por sliding o deslizamiento. Este estudio fue realizado con tres especies de micobacterias ambientales (MA): Mycobacterium smegmatis, Mycobacterium gordonae y Mycobacterium porcinum. Los objetivos fueron: a) establecer por espectrometría de masa (EM) MALDI-TOF si existían diferencias en la composición de las cadenas carbonadas lipídicas de la pared celular cuando las bacterias estaban en crecimiento planctónico o formando biofilms; b) evaluar la relación entre la composición de las cadenas lípidicas y la capacidad para deslizarse y de formar biofilms. M. porcinum y M. smegmatis formaron biofilms de diferentes magnitudes y presentaron movilidad. M. gordonae desarrolló pobre biofilm y no mostró movilidad. Los espectros MALDI-TOF mostraron diferente composición de las cadenas lipídicas entre las MA en estado planctónico y formando biofilms. Los espectros de MA formando biofilms mostraron mayor diversidad presentando ácidos micólicos de cadena corta. Estos resultados sugieren la importancia de estos ácidos micólicos en la formación de biofilms, especialmente en su maduración. M. gordonae presentó una mayor proporción de ácidos grasos de cadena larga, en comparación con M. smegmatis y M. porcinum. La presencia de cadenas largas hidrofóbicas podría generar mayor fricción, reduciendo su movilidad 

Microbiological quality and determination of pesticide residues in the lettuce produced in Bahía Blanca's horticultural belt, Argentina

The aims of this research were 1) to find out the possible microbiological contamination and residues of pesticides (chlorpyrifos and cypermethrin) in lettuce grown in Bahía Blanca’s horticultural belt, and bacteriological quality of waters used for irrigation and post-harvest washing, 2) to investigate and compare the internalization capacity of a strain of Escherichia coli isolated from irrigation water with another hospital uropathogenic strain. Some strains of bacteria can internalize into the plant tissue. This capability presents food safety threats as they cannot be removed with standard sanitation practices. To determine bacteriological quality of lettuce, E. coli, Salmonella spp and E. coli O157: H7/NM (n = 10) were investigated. Bacteriological quality of water was determined by quantification of fecal coliforms/100 mL (n = 20). Pesticides were determined by using an improved and validated QuEChERS method combined with GC-MSD. Irrigation water in 19/20 samples did not present health risk. Bacteriological quality of lettuce met demands in 9/10 samples. Pesticides were detected in half of the samples, values exceeding the FAO recommendations. An effort is strongly recommended to implement both, best phytosanitary practices and monitoring programmes. Uropathogenic strain was able to internalize into plant tissue, while the nonpathogenic one was not.Fil: Marzocca, Maria Alejandra. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia; ArgentinaFil: Costantino, Andrea Rosana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Química del Sur. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Química. Instituto de Química del Sur; ArgentinaFil: Gentili, Alejandro Raúl. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Química; ArgentinaFil: Oriani, Alejandra Soledad. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia; ArgentinaFil: Pereyra, Marcelo Tomas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Química del Sur. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Química. Instituto de Química del Sur; ArgentinaFil: Lusto, Jorge. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Agronomía; ArgentinaFil: Baldini, Monica Diana. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia; Argentin

Diversidad de especies de micobacterias no tuberculosas aisladas en ambientes acuáticos de la ciudad de General Pico, La Pampa, Argentina = Species diversity of non-tuberculous mycobacteria isolated from aquatic environments of General Pico city, Province of La Pampa (Argentina)

Las micobacterias no tuberculosas (MNT) no solo se estudian por su importancia como patógenos oportunistas, sino también por sus aplicaciones en biotecnología y biorremediación. Nuestro objetivo fue determinar la presencia de micobacterias en los distintos hábitats acuáticos de la ciudad de General Pico (provincia de La Pampa), así como su diversidad. Los porcentajes de muestras positivas a micobacterias fueron los siguientes: 37,5% en el sistema de distribución de agua de red, 32,6% en el acuífero que abastece dicho sistema, 36,8% en el agua proveniente de las precipitaciones, 53,1% en los humedales del área de influencia, 80% en los natatorios cubiertos y 33,3% en las fuentes decorativas ubicadas en plazas públicas. De los 90 aislamientos de MNT obtenidos el 8,9% no logró ser identificado a nivel de especie con los métodos utilizados, que incluyeron pruebas fenotípicas y métodos moleculares. Las especies más frecuentemente aisladas fueron Mycobacterium fortuitum y Mycobacterium gordonae. Algunas especies identificadas han sido reportadas en casos de micobacteriosis en nuestro país, entre ellas M. fortuitum, M. gordonae, M. intracellulare, M. vaccae, M. lentiflavum y M. nonchromogenicum. No se aislaron MNT en muestras de agua de red con concentraciones de cloro activo residual mayores de 0,8 mg/l, mientras que en los natatorios la presencia de hasta 1,5 mg/l de cloro activo residual no fue una limitante para la proliferación de estos microorganismos. Se puede considerar que la incidencia de micobacterias en los ambientes acuáticos de General Pico es cercana al 35%, y que la presencia de estos microorganismos y su diversidad se ve afectada por el contacto con el hombre y sus actividades, como así también por la existencia de vida animal.Non-tuberculous mycobacteria (NTM) are studied not only for their importance as emerging opportunistic pathogens but also for their applications in biotechnology and bioremediation. Our aim was to determine the occurrence and diversity of mycobacteria in different aquatic habitats of General Pico city, Province of La Pampa. The percentage of samples with positive cultures for mycobacteria were the following: 37.5% recovered from the water supply distribution system; 32.6% from the aquifer that supplies water to the distribution system; 36.8% from rain water; 53.1% from the two wetlands in the area of influence; 80% from indoor swimming pools; and 33.3% from water fountains in downtown public squares. Of the 90 NTM isolates, 8.9% could not be identified at the species level with any of the used methods, phenotypic tests and molecular methods. Mycobacterium fortuitum and Mycobacterium gordonae were the most frequently isolated species. Some of the identified species such as, M. fortuitum, M. gordonae, M. intracellulare, M. vaccae, M. lentiflavum and M. nonchromogenicum, have been reported in cases of mycobacteriosis in Argentina. Mycobacteria with values higher than 0.8 mg/ml of residual active chlorine were not recovered from the drinking water supply network, whereas in the swimming pools the presence of up to 1.5 mg/l was not a constraint. Based on our results, the presence of mycobacteria in aquatic environments is close to 35% and their occurrence and diversity is affected both by contact with man and his activities as well as by the existence of animal life.Instituto de BiotecnologíaFil: Tortone, Claudia Andrea. Universidad Nacional de La Pampa. Facultad de Ciencias Veterinarias. Cátedra de Bacteriología y Micología; ArgentinaFil: Oriani, Delia Susana. Universidad Nacional de La Pampa. Facultad de Ciencias Veterinarias. Cátedra de Bacteriología y Micología; ArgentinaFil: Staskevich, Ana Sandra. Universidad Nacional de La Pampa. Facultad de Ciencias Veterinarias. Cátedra de Bacteriología y Micología; ArgentinaGil: Gino, Lilia Mabel. Universidad Nacional de La Pampa,. Facultad de Ciencias Veterinarias. Cátedra de Parasitología y Enfermedades Parasitarias; ArgentinaFil: Marfil, Maria Jimena. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Nava Vargas, Alejandro. Universidad Autónoma de Querétaro; MéxicoFil: Zumarraga, Martin Jose. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Biotecnología; Argentin