Cicatrización de heridas: angiogénesis, linfangiogénesis y fibronectina.

Los diferentes componentes de la matriz extracelular (MEC) han sido estudiados durante mucho tiempo, pero no ha sido hasta las últimas décadas cuando se han empezado a elucidar sus diferentes implicaciones en el microambiente tisular para el correcto funcionamiento de los órganos. Una de estas funciones tiene relación con la organización del sistema circulatorio (tanto vascular como linfático). En la siguiente revisión, presentamos el papel decisivo que un componente de la MEC, la fibronectina, tiene en el desarrollo y función de la angiogénesis y linfangiogénesis. Ambos son procesos clave en la curación de heridas, y la fibronectina una de las glicoproteínas de la MEC fundamental para que se realicen correctamente. Mediante la revisión de los estudios realizados sobre la ausencia de esta glicoproteína o sus ligandos, las integrinas, destacamos su estrecha relación. Palabras Clave: Cicatrización - Angiogénesis - Linfangiogénesis - Fibronectina - Integrina - Matriz Extracelula

Digital morphometric analysis of skin elements.

Objetivo: Proponer el uso de la infraestructura digital morfométrica para la cuantificación microscópica objetiva de elementos celulares y de la matriz extracelular en heridas y cicatrizaciones de la piel. Descripción de posibles usos, ventajas e inconvenientes. Presentación de una propuesta en diversos cortes histológicos del sistema tegumentario. Material y métodos: En el ejemplo empleado se utilizaron cortes de piel fina sana teñidos con técnicas histoquímicas e inmunohistoquímicas. Las muestras se digitalizaron con el escáner Panoramic MIDI (3D Histech Ltd.) y las imágenes obtenidas se analizaron con el software Panoramic Viewer v.1.15 (3D Histech Ltd) para cuantificar elementos celulares y con el software Image Pro-plus v.6.0 (Media Cybernetics) para cuantificar y caracterizar elementos fibrosos de la matriz extracelular. Resultados: Por un lado cuantificamos las células CD1a+ de la epidermis y la dermis detectando 164 elementos positivos por mm2 y 2.039 elementos negativos por mm2 ; representando el 7,46% de las células cutáneas y, por tanto, las células de Langerhans epidérmicas y macrófagos dérmicos. También valoramos fibras de la matriz extracelular en las capas papilar y reticular de la dermis. En relación con las fibras elásticas, se cuantificó un número mayor por unidad de área con mayor porcentaje de área teñida en la dermis profunda o capa reticular. Mientras que, para las fibras de colágeno, se detectó mayor cantidad por unidad de área con menor porcentaje de área teñida en la dermis superficial o capa papilar. Con respecto a las características de las fibras elásticas en las dos capas, distinguimos que formaban redes más ovoides, estaban dispuestas de forma más oblicua a la epidermis y eran más cortas, estrechas y rectilíneas en la dermis papilar. Para las fibras de colágeno detectamos que formaban haces más redondeados, estaban dispuestos de forma más perpendicular a la epidermis y eran más cortos, estrechos y ondulados en la dermis papilar. Conclusiones: La cuantificación objetiva de células y fibras de la matriz extracelular en imágenes microscópicas digitalizadas proporciona una herramienta rápida, fiable y discriminativa que puede ser útil para numerosos estudios cutáneos. Palabras Clave: Herida - Cicatrización - Estudio Histológico - Piel

Expresión inmunohistoquímica de la proteína mycN y el estado del gen MYCN en tumores neuroblásticos

Antecedentes: Los tumores neuroblásticos son de los tumores pediátricos más frecuentes. A pesar de su gran variedad genética, clínica e histopatológica, la amplificación del gen MYCN es siempre un indicador de mal pronóstico. Este oncogen codifica una proteína nuclear que se une al ADN y activa la transcripción de sus genes diana. Un aumento en el número de copias del gen no se corresponde siempre con sobreexpresión de su proteína. El valor pronóstico de la detección de la proteína es controvertido. Métodos: Se han analizado 220 muestras de NB. Mediante la técnica de FISH se ha establecido el estado del gen, mientras que la inmunohistoquímica ha permitido el estudio de la expresión de la proteína en secciones de parafina. Resultados: Los 15 casos con ganancia y 140 de los 141 casos sin amplificación del gen MYCN no expresan la proteína. En el grupo de los 55 casos amplificados, el 76,4% han sido positivos y 23,6% negativos. Conclusiones: Los niveles de expresión génica no siempre corresponden con el número de copias del gen, ya que intervienen muchos mecanismos moleculares. La mayoría de los casos positivos para este anticuerpo presentan amplificación, así que el estudio inmunohistoquímico de su expresión podría utilizarse para aproximar el estado del gen MYCN en aquellos laboratorios de diagnóstico donde las técnicas moleculares no estén disponibles.Introduction: Neuroblastic tumors are one of the most frequent pediatric tumor. Despite their genetic, clinic and histopathologic variety, MYCN gene amplification is always considered as an adverse prognosis factor. MYCN gene encodes a nuclear protein which binds DNA and activates target genes transcription. An increase of gene copies number not always involves a protein overexpression. The prognostic value of the determination of mycN protein is controversial. Materials and methods: 220 NB samples were analyzed. We established the gene status by FISH and we studied the protein expression in paraffin sections by immunohistochemistry. Results: 15 gain samples and 140 from 141 non-amplified samples don’t express MYCN protein. From 55 amplified cases, 76.4% were positive and 23.6% were negative. Conclusions: Gene expression levels do not always match with gene copies number due to different molecular mechanisms. Most of positive cases to mycN protein are amplified samples. This antibody could be used to approach gene status in those laboratories without available molecular techniques.Piqueras Franco, Marta, [email protected] ; Noguera Salva, Rosa, [email protected] ; Cruz Mojarrieta, Julia, [email protected] ; Subramaniam, Manish Mani, [email protected] ; Llombart Bosch, Antonio, [email protected]; Navarro Fos, Samuel, [email protected]

Patología de los tumores neuroblásticos: evaluación pronóstica. Experiencia del centro español de referencia de la SEOP para estudios biopatológicos del neuroblastoma (1992-2005)

Antecedentes: Los tumores neuroblásticos son los tumores sólidos extracraneales más frecuentes en la infancia y se caracterizan por una evolución clínica heterogénea que va desde una progresión rápida a una regresión tumoral espontánea. Existen factores pronósticos conocidos que determinan dicha evolución como son la edad, estadiaje, histopatología, estatus de MYCN, ploidía y diversas ganancias y pérdidas cromosómicas. El objetivo del trabajo es describir nuestra experiencia como laboratorio de referencia español para la determinación de estos parámetros pronósticos. Métodos: Material tumoral de pacientes con neuroblastoma, remitido a nuestro laboratorio desde 1992 hasta 2005, ha sido sometido a estudio histopatológico, molecular para determinar la amplificación de MYCN, histoquímico y morfométrico para estudiar la ploidía y se ha introducido la técnica de CGH para el análisis de ganancias y perdidas cromosómicas. Resultados: El seguimiento clínico durante estos años, ha demostrado la importancia pronóstica de la clasificación histológica Internacional Neuroblastoma Pathology Classification (INPC), la relación de un contenido diploide-tetraploide de ADN con el histopronóstico desfavorable, la proporción del 20% de casos con amplificación de MYCN y su carácter pronostico desfavorable, así como la presencia de ganancias y pérdidas cromosómicas como 11q- que confieren mal pronóstico. Conclusiones: Se confirma la necesidad de determinar parámetros morfológicos y genéticos de valor pronóstico con el fin de estratificar la terapéutica apropiada de elección en los pacientes con neuroblastoma.Background: Neuroblastic tumors are the most frequent extracranial solid tumors in childhood, and are characterized by a heterogeneous clinic behavior, ranging from a rapid progression of disease to a spontaneous regression. Prognostic indicators that condition such behavior, such as age, staging, histopathology, MYCN oncogene status, ploidy, and diverse chromosomal losses and gains, have been demonstrated. The aim of present work is to describe our experience as reference laboratory for the determination of these prognostic factors in neuroblastic tumors. Methods: Tumor material from patients with neuroblastoma, submitted to our laboratory from 1992 to 2005 has been analyzed. Histopathology following Internacional Neuroblastoma Pathology Classification (INPC) classification, PCR and FISH for MYCN status, static cytometry for ploidy and CGH for chromosomal gains and losses, were performed. Results: The clinical follow-up has demonstrated the prognostic value of INPC, the relationship between diploid-tetraploid DNA content and unfavorable histology, the existence of 20% MYCN amplified cases showing an unfavorable prognosis as well as the presence of chromosomal gains and losses especially 11q-, that confer unfavorable prognosis. Conclusions: We confirm the importance of determining morphological and genetic prognostic parameters in neuroblastic tumors in order to stratify the patients to receive the correct therapy accordingly.Navarro Fos, Samuel, [email protected] ; Llombart Bosch, Antonio, [email protected] ; Pellin Perez, Antonio, [email protected] ; Burgues Gasion, Octavio, [email protected]; Ruiz Sauri, Amparo, [email protected]; Piqueras Franco, Marta, [email protected] ; Noguera Salva, Rosa, [email protected]

Integrated CGH/WES Analyses Advance Understanding of Aggressive Neuroblastoma Evolution: A Case Study

Neuroblastoma (NB) is the most common extra-cranial malignancy in preschool children. To portray the genetic landscape of an overly aggressive NB leading to a rapid clinical progression of the disease, tumor DNA collected pre- and post-treatment has been analyzed. Array comparative genomic hybridization (aCGH), whole-exome sequencing (WES), and pharmacogenetics approaches, respectively, have identified relevant copy number alterations (CNAs), single nucleotide variants (SNVs), and polymorphisms (SNPs) that were then combined into an integrated analysis. Spontaneously formed 3D tumoroids obtained from the recurrent mass have also been characterized. The results prove the power of combining CNAs, SNVs, and SNPs analyses to assess clonal evolution during the disease progression by evidencing multiple clones at disease onset and dynamic genomic alterations during therapy administration. The proposed molecular and cytogenetic integrated analysis empowers the disease follow-up and the prediction of tumor recurrence

NeuPAT: an intranet database supporting translational research in neuroblastic tumors will be published in Computers in Biology and Medicine

Translational research in oncology is directed mainly towards establishing a better risk stratification and searching for appropriate therapeutic targets. This research generates a tremendous amount of complex clinical and biological data needing speedy and effective management. The authors describe the design, implementation and early experiences of a computer-aided system for the integration and management of data for neuroblastoma patients. NeuPAT facilitates clinical and translational research, minimizes the workload in consolidating the information, reduces errors and increases correlation of data through extensive coding. This design can also be applied to other tumor types.This work was supported by RD06/0020/0102 and PI10/0015 (ISCIII & ERDF); 396/2009 (FAECC).We are grateful to Mr.D. Harrison for assistance with English language editing.Villamon Ribate, E.; Piqueras, M.; Meseguer Anastasio, JE.; Blanquer Espert, I.; Berbegall Beltrán, AP.; Tadeo Cervera, I.; Hernández García, V.... (2013). NeuPAT: an intranet database supporting translational research in neuroblastic tumors will be published in Computers in Biology and Medicine. Computers in Biology and Medicine. 43(3):219-228. doi:10.1016/j.compbiomed.2012.11.011S21922843