Platelet factor 4 (PF4/CXCL4) retards formation of the initial complex between plasminogen activator inhibitor 1 (PAI-1) and its target of tissue origin (t-PA)

Le facteur 4 plaquettaire (PF4/CXCL4) est un tétramère constitué de quatre sous-unités identiques de 7,8 kDa qui est libéré en grande quantité par les plaquettes lors de l’hémostase primaire (ensemble des phénomènes permettant un colmatage initial d’une lésion vasculaire). L’étude de la formation d’un caillot de fibrine en présence de PF4 montre une augmentation de la turbidité finale du caillot : le PF4 modifie le réseau formé. Etant donné que la plupart des acteurs de la fibrinolyse se lie au caillot de fibrine et que le PF4 modifie sa structure, nous avons pensé qu’il serait intéressant de rechercher si le PF4 influençait aussi la fibrinolyse. La lyse d'un caillot est effectuée par la plasmine issue de l'activation du plasminogène par son activateur d’origine tissulaire (t-PA) en présence d’un cofacteur qui n'est autre que la fibrine. Nous avons étudié la lyse de caillots de plasma, obtenus par activation de la cascade de la coagulation, en condition statique et à l'aide d'un modèle de thrombose artérielle (système Chandler loop). Dans les deux cas, une diminution du temps de demi-lyse a été observée en présence de PF4. Cependant, la lyse de caillots préparés par simple ajout de thrombine sur du fibrinogène ne permet pas de retrouver cet effet du PF4. Ceci suggère que l’influence du PF4 sur la structure du caillot n’est pas à l’origine de l’effet sur sa lyse et que le PF4 n’influence pas (ou très peu) l'activation du plasminogène, ainsi que l'activité de la plasmine résultante. Cette hypothèse a été confirmée par l’étude de l’activité amydolytique du t-PA et de la plasmine (quelle soit ajoutée ou générée). En système purifié, les inhibiteurs plasmatiques de la fibrinolyse sont absents. Les deux principaux sont l'inhibiteur de l'activateur du plasminogène de type 1 (PAI-1) et l’α2-antiplasmine (α2-AP). La lyse de caillots préparés à partir de plasma déficient en α2-AP montre une diminution du temps de demi-lyse en présence de PF4 (comme pour le plasma normal), alors qu’avec le plasma dépourvu de PAI-1 le temps de demi-lyse n'est plus influencé. De plus, l’ajout de PAI-1 dans le système purifié entraine une diminution du temps de demi-lyse en présence de PF4. Ceci suggère que le PF4 prévient directement ou indirectement l'inhibition du t-PA par PAI-1. L’étude de la cinétique d'inhibition de l’activité amidolytique du t-PA par le PAI-1, la détermination de la stœchiométrie de cette inhibition, et l’analyse de ces cinétiques par immuno-empreinte montrent que le PF4 est un modulateur de la fibrinolyse qui agit en retardant la formation d'un complexe initial entre le t-PA et le PAI-1. Cette nouvelle fonction du PF4 est cohérente, et vient en complément de celle décrite récemment d’inhibiteur de l'activation du TAFI.Platelet factor 4 (PF4/CXCL4) is a tetramer constituted of four identical 7,8 kDa subunits released in large quantities by platelets during primary heamostasis (allowing initial clogging of a vascular injury). Study of fibrin clot formation in the presence of PF4 shows an increase of the final clot turbidity: PF4 modifies the formed network. Given that most fibrinolysis actors are bound to the fibrin clot and that PF4 modifies its structure we thought it would be interesting to investigate if PF4 also influences fibrinolysis. Clot lysis is performed by plasmin originating from activation of its precursor by tissue plasminogen activator (t-PA) with fibrin itself as cofactor of the reaction. We have studied lysis of plasma clots formed by activation of the coagulation cascade in static condition and in a Chandler loop model mimicking arterial thrombosis. Half-times of lysis decreased in the presence of PF4 in both systems. However, PF4 had no longer detectable influence on the half-time of lysis with clots formed by direct addition of thrombin on purified fibrinogen. Observation suggested that the observed decrease of the half-time of lysis induced by PF4 did not originate from its influence on fibrin clot formation and that PF4 had little effect if any on plasminogen activation or plasmin activity. We confirmed this hypothesis by comparing amydolytic activities of t-PA and plasmin (added or generated through plasminogen activation). In purified system, fibrinolysis inhibitors are absent. The two main inhibitors are plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) and α2-antiplasmin (α2-AP). Lysis of clots obtained from α2-AP deficient plasma showed a decrease of the half-time of lysis in the presence of PF4 (as in normal plasma), whereas in PAI-1 deficient plasma half-time of lysis was unchanged. Moreover if PAI-1 was added to the purified system, half-time of lysis decreased in the presence of PF4. Observations therefore suggested that PF4 prevented directly or indirectly t-PA inhibition by PAI-1. Kinetics of the amidolytic activity of t-PA inhibition by PAI-1 in the presence or not of PF4, determination of its stoichiometry and Western blot analysis of these inhibition kinetics revealed that PF4 is a fibrinolysis modulator which delays formation of the initial (Michaelis) complex between t-PA and PAI-1. This new feature of PF4 is consistent and complementary with its recently described role as a modulator of TAFI activation

Evaluation of the capability and reproducibility of RECIST 1.1. measurements by technologists in breast cancer follow-up: a pilot study

Abstract The evaluation of tumor follow-up according to RECIST 1.1 has become essential in clinical practice given its role in therapeutic decision making. At the same time, radiologists are facing an increase in activity while facing a shortage. Radiographic technologists could contribute to the follow-up of these measures, but no studies have evaluated their ability to perform them. Ninety breast cancer patients were performed three CT follow-ups between September 2017 and August 2021. 270 follow-up treatment CT scans were analyzed including 445 target lesions. The rate of agreement of classifications RECIST 1.1 between five technologists and radiologists yielded moderate (k value between 0.47 and 0.52) and substantial (k value = 0.62 and k = 0.67) agreement values. 112 CT were classified as progressive disease (PD) by the radiologists, and 414 new lesions were identified. The analysis showed a percentage of strict agreement of progressive disease classification between reader-technologists and radiologists ranging from substantial to almost perfect agreement (range 73–97%). Analysis of intra-observer agreement was strong at almost perfect (k > 0.78) for 3 technologists. These results are encouraging regarding the ability of selected technologists to perform measurements according to RECIST 1.1 criteria by CT scan with good identification of disease progression

High prevalence of pre-existing sarcopenia in critically ill patients with hematologic malignancies admitted to the intensive care unit for sepsis or septic shock

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Combined Genotype Analysis of Tumor and Cell-Free DNA By Ultra-Deep Targeted Sequencing: Correlation with PET-Scan Imaging in a Prospective Cohort of Diffuse Large B-Cell Lymphoma Patients.

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Non-invasive monitoring of diffuse large B-cell lymphoma by cell-free DNA high-throughput targeted sequencing: analysis of a prospective cohort

International audienceFrom a liquid biopsy, cell-free DNA (cfDNA) can provide information regarding basal tumoral genetic patterns and changes upon treatment. In a prospective cohort of 30 diffuse large B-cell lymphomas (DLBCL), we determined the clinical relevance of cfDNA using targeted next-generation sequencing and its correlation with PET scan imaging at the time of diagnosis and during treatment. Using a dedicated DLBCL panel, mutations were identified at baseline for 19 cfDNAs and profiles were consistent with expected DLBCL patterns. Tumor burden-related clinical and PET scan features (LDH, IPI, and metabolic tumor volume) were significantly correlated with the quantity of tumoral cfDNA. Among the four patients presenting additional mutations in their cfDNAs, three had high metabolic tumor volumes, suggesting that cfDNA more accurately reflects tumor heterogeneity than tissues biopsy itself. Mid-treatment, four patients still had basal mutations in their cfDNAs, including three in partial response according to their Deauville scores. Our study highlights the major interests in liquid biopsy, in particular in the context of bulky tumors where cfDNA allows capturing the entire tumoral mutation profile. Therefore, cfDNA analysis in DLBCL represents a complementary approach to PET scan imaging

Surveillance non invasive par séquençage nouvelle génération de l’ADN circulant et corrélation avec l’imagerie TEP scan dans une cohorte prospective de lymphome B diffus à grandes cellules.

International audienceIntroductionDans le concept de biopsie liquide, l’ADN circulant (cell-free DNA, cfDNA), libéré dans le sang par les cellules tumorales, peut être utilisé pour l’identification de mutations, leur évolution clonale et les mécanismes génétiques de résistance. Afin de déterminer la pertinence clinique de l’analyse du cfDNA, nous avons évalué, dans une cohorte prospective de 30 lymphomes B diffus à grandes cellules (LBDGC), le profil génétique au diagnostic et sa modification après traitement par séquençage nouvelle génération (NGS) et corrélé ces données à celles de l’imagerie TEP scan (Lymphoseq, clinical.gov number : NCT02339805). Patients et méthodes Le statut mutationnel de 34 gènes (Lymphopanel) a été déterminé à la fois pour le cfDNA et l’ADN de la tumeur (gDNA) au moment du diagnostic, et pour le cfDNA au cours du traitement et en cas de rechute/progression (technologies AmpliSeq®/PGM®). Les données de TEP scan ont été collectées au diagnostic (Volume Métabolique tumoral, VMT et Glycolyse Lésionnelle Totale, GLT), à mi-traitement et à la fin du traitement (Delta SUV et score de Deauville). L’analyse des variants a été réalisée à l’aide d’un pipeline bio-informatique maison.Résultats Au diagnostic, le séquençage du cfDNA a permis l’identification de mutations dans 19/30 cas (63%) et les profils mutationnels étaient en accord avec les profils habituellement observés dans les LBDGC. Pour l’ADN tumoral, des mutations ont été identifiées dans 24 des 25 échantillons disponibles, le dernier étant en échec. Pour celui-ci, l’analyse du cfDNA était informative. Au final, seulement 2 patients ne présentaient pas de mutation (cfDNA ou gDNA) conduisant à une informativité de 93% tous échantillons confondus. L’analyse des variations du nombre de copies (CNV) a montré une très bonne concordance entre les résultats obtenus dans le cfDNA et le gDNA pour des fréquences alléliques de mutations dans le cfDNA > 14%. En ce qui concerne les données cliniques et de TEP scan au diagnostic, la quantité de cfDNA tumoral ([cfDNA] x fréquence allélique) était significativement corrélée à la fois aux LDH, IPI, VMT et GLT. Parmi les 4 patients présentant plus de mutations dans le cfDNA par rapport à la tumeur, 3 avaient un volume tumoral > 2000cm3 dont 2 avec des masses tumorales très disséminées (vues 3D des images de TEP scan), suggérant que les mutations du cfDNA sont le reflet de l’hétérogénéité tumorale. Au cours du traitement, nous avons observé une diminution rapide de la quantité de cfDNA tumoral dans 13/17 cas. A mi-traitement, parmi les 4 patients présentant toujours des mutations dans le cfDNA, 3 étaient en réponse partielle (score de Deauville et delta SUV max). Un de ces patients était en progression 6 mois après la fin du traitement et présentait toujours de l’ADN circulant tumoral. ConclusionCette étude montre que le séquençage du cfDNA dans les LBDGC est un outil de génotypage précis et représente un procédé non invasif en temps réel pour la recherche de clones résistants au traitement. Elle souligne l’intérêt majeur de la biopsie liquide dans le cadre des masses tumorales volumineuses, le cfDNA permettant l’analyse du profil mutationnel complet de la tumeur. Ainsi, la biopsie liquide représente une approche complémentaire au TEP scan à la fois au diagnostic et durant le suivi pour la prise en charge des LBDGC

Combined Genotype Analysis of Tumor and Cell-Free DNA By Ultra-Deep Targeted Sequencing: Correlation with PET-Scan Imaging in a Prospective Cohort of Diffuse Large B-Cell Lymphoma Patients.

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