Propiedades de la membrana y viabilidad celular: Importancia de la fluidez

Numerosos estudios sugieren que las vías de señalización y por ende la funcionalidad celular dependen de la organización de dominios en la membrana, que a su vez está determinada por la composición lipídica de la misma. El colesterol (Col) interviene en la regulación de la fluidez al particionar de manera selectiva en dominios específicos de la membrana, y se ha demostrado que su homeostasis es crucial para la viabilidad celular. Además, se sabe que el exceso de Col puede resultar citotóxico. Este lípido no puede ser degradado o utilizado como combustible, por lo que su exceso debe ser removido por aceptores o almacenado en compartimientos intracelulares. Las lipoproteínas de alta densidad (HDL) y en particular su apolipoproteína mayoritaria, la apoA-I, cumplen un rol fundamental en el transporte reverso del Col, que consiste en transportar el excedente desde los tejidos periféricos hacia el hígado para su eliminación en forma de sales biliares, o para ser redirigido desde los hepatocitos hacia los tejidos esteroidogénicos

Especies intermedias en la agregación de la apoliproteína A-I: probable rol en la amiloidosis

Las amiloidosis son patologías crónicas, en las que proteínas mal plegadas inducen citotoxicidad de distinta severidad y en distintos órganos. Si bien gran cantidad de bibliografía sugiere que agregados fibrilares maduros serían la especie con mayor patogenicidad, estudios más recientes indican que oligómeros o protofibras podrían jugar un rol fundamental en la cascada de eventos involucrados en la amiloidosis. La amiloidosis inducida por mutantes naturales de la apolipoproteína A-I humana (apoA-I) se presenta con diversas manifestaciones clínicas dependiendo de la variante proteica que se encuentra involucrada. En estudios previos determinamos que distintas variantes de esta proteína poseen aumentada tendencia a agregarse, y que parámetros pro-inflamatorios del micro ambiente favorecen un procesamiento patogénico. En este trabajo extendemos nuestros estudios, y nos planteamos resolver la hipótesis de que distintas especies de agregación intermedia participan en procesos citotóxicos mediados por variantes de apoA-I.Facultad de Ciencias Médica

Data regarding the sensibility to proteolysis of a natural apolipoprotein A-I mutant

The article shows dataset of the proteolysis of a natural variant of apolipoprotein A-I (apoA-I) with a substitution of a leucine by and arginine in position 60 (L60R), in comparison with the protein with the native sequence (Wt). This information demonstrates the potential of in vitro partial proteolysis experiments as it may be applicable to different approaches in the biophysical field. We have analyzed by different electrophoresis techniques apoA-I variants, quantified the degree of proteolysis after staining and compared the proteolysis efficiency with the computed cleavage patterns. The data shown here clearly strengthen the usefulness of this approach to test protein flexibility, as it may be attained with enzymes which are not expected to modify in vivo this protein but have a well-known digestion pattern. In addition it is appropriate for evaluating protein catabolism, as it is exemplified here by the evidence with metalloproteinase 12 (MMP-12), which is a physiological protease that may elicit the pro-inflammatory processing of this variant within the lesions. We support the work “Structural analysis of a natural apolipoprotein A-I variant (L60R) associated with amyloidosis” (Gaddi, et al., 2020), gaining insights on protein folding from a characterization by proteolysis analysis [1].Fil: Gaddi, Gisela Marina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata "Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner". Universidad Nacional de la Plata. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata "Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner"; ArgentinaFil: Gisonno, Romina Antonela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata "Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner". Universidad Nacional de la Plata. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata "Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner"; ArgentinaFil: Rosu, Silvana Antonia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata "Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner". Universidad Nacional de la Plata. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata "Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner"; ArgentinaFil: Cortez, María Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata "Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner". Universidad Nacional de la Plata. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata "Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner"; ArgentinaFil: Finarelli, Gabriela Sandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata "Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner". Universidad Nacional de la Plata. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata "Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner"; ArgentinaFil: Ramella, Nahuel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata "Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner". Universidad Nacional de la Plata. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata "Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner"; ArgentinaFil: Tricerri, Maria Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata "Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner". Universidad Nacional de la Plata. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata "Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner"; Argentin

Especies intermedias en la agregación de la apoliproteína A-I: probable rol en la amiloidosis

Las amiloidosis son patologías crónicas, en las que proteínas mal plegadas inducen citotoxicidad de distinta severidad y en distintos órganos. Si bien gran cantidad de bibliografía sugiere que agregados fibrilares maduros serían la especie con mayor patogenicidad, estudios más recientes indican que oligómeros o protofibras podrían jugar un rol fundamental en la cascada de eventos involucrados en la amiloidosis. La amiloidosis inducida por mutantes naturales de la apolipoproteína A-I humana (apoA-I) se presenta con diversas manifestaciones clínicas dependiendo de la variante proteica que se encuentra involucrada. En estudios previos determinamos que distintas variantes de esta proteína poseen aumentada tendencia a agregarse, y que parámetros pro-inflamatorios del micro ambiente favorecen un procesamiento patogénico. En este trabajo extendemos nuestros estudios, y nos planteamos resolver la hipótesis de que distintas especies de agregación intermedia participan en procesos citotóxicos mediados por variantes de apoA-I.Facultad de Ciencias Médica

Especies intermedias en la agregación de la apoliproteína A-I: probable rol en la amiloidosis

Las amiloidosis son patologías crónicas, en las que proteínas mal plegadas inducen citotoxicidad de distinta severidad y en distintos órganos. Si bien gran cantidad de bibliografía sugiere que agregados fibrilares maduros serían la especie con mayor patogenicidad, estudios más recientes indican que oligómeros o protofibras podrían jugar un rol fundamental en la cascada de eventos involucrados en la amiloidosis. La amiloidosis inducida por mutantes naturales de la apolipoproteína A-I humana (apoA-I) se presenta con diversas manifestaciones clínicas dependiendo de la variante proteica que se encuentra involucrada. En estudios previos determinamos que distintas variantes de esta proteína poseen aumentada tendencia a agregarse, y que parámetros pro-inflamatorios del micro ambiente favorecen un procesamiento patogénico. En este trabajo extendemos nuestros estudios, y nos planteamos resolver la hipótesis de que distintas especies de agregación intermedia participan en procesos citotóxicos mediados por variantes de apoA-I.Facultad de Ciencias Médica

Role of plasma membrane lipid composition on cellular homeostasis: learning from cell line models expressing fatty acid desaturases

Experimental evidence has suggested that plasma membrane (PM)-associated signaling and hence cell metabolism and viability depend on lipid composition and organization. The aim of the present work is to develop a cell model to study the endogenous polyunsaturated fatty acids (PUFAs) effect on PM properties and analyze its influence on cholesterol (Chol) homeostasis. We have previously shown that by using a cell line over-expressing stearoyl-CoA-desaturase, membrane composition and organization coordinate cellular pathways involved in Chol efflux and cell viability by different mechanisms. Now, we expanded our studies to a cell model over-expressing both Δ5 and Δ6 desaturases, which resulted in a permanently higher PUFA content in PM. Furthermore, this cell line showed increased PM fluidity, Chol storage, and mitochondrial activity. In addition, human apolipoprotein A-I-mediated Chol removal was less efficient in these cells than in the corresponding control. Taken together, our results suggested that the cell functionality is preserved by regulating PM organization and Chol exportation and homeostasis.Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La PlataFacultad de Ciencias Médica

Mutaciones en el extremo n-terminal de la apolipoproteína A-I y su efecto en la tendencia amiloidogénica

Amiloidosis es un grupo heterogéneo de enfermedades causadas por el plegamiento anómalo de diversas proteínas que trae en consecuencia un entorno pro inflamatorio con un descenso de pH local. Existen numerosas variantes naturales de Apolipoproteina A-I (Wt) causantes de la enfermedad como las mutaciones Leu60Arg (L60R) y Trp50Arg (W50R) que inducen depósitos proteicos renales. Estudios previos con otras variantes Iowa (Gly26Arg)1, Lys 107-01 y Arg173Pro2 sugieren que la inestabilidad estructural y la tendencia a la agregación podrían ser causantes de esta patología. En el presente trabajo se estudió comparativamente la estabilidad, tendencia a la agregación y susceptibilidad a la proteólisis de Wt, L60R y W50R.Facultad de Ciencias Médica

Propiedades de la membrana y viabilidad celular: importancia de la fluidez

Numerosos estudios sugieren que las vías de señalización y por ende la funcionalidad celular dependen de la organización de dominios en la membrana, que a su vez está determinada por la composición lipídica de la misma. El colesterol (Col) interviene en la regulación de la fluidez al particionar de manera selectiva en dominios específicos de la membrana, y se ha demostrado que su homeostasis es crucial para la viabilidad celular. Además, se sabe que el exceso de Col puede resultar citotóxico. Este lípido no puede ser degradado o utilizado como combustible, por lo que su exceso debe ser removido por aceptores o almacenado en compartimientos intracelulares. Las lipoproteínas de alta densidad (HDL) y en particular su apolipoproteína mayoritaria, la apoA-I, cumplen un rol fundamental en el transporte reverso del Col, que consiste en transportar el excedente desde los tejidos periféricos hacia el hígado para su eliminación en forma de sales biliares, o para ser redirigido desde los hepatocitos hacia los tejidos esteroidogénicos.Universidad Nacional de La Plat

Role of plasma membrane lipid composition on cellular homeostasis: learning from cell line models expressing fatty acid desaturases

Experimental evidence has suggested that plasma membrane (PM)-associated signaling and hence cell metabolism and viability depend on lipid composition and organization. The aim of the present work is to develop a cell model to study the endogenous polyunsaturated fatty acids (PUFAs) effect on PM properties and analyze its influence on cholesterol (Chol) homeostasis. We have previously shown that by using a cell line over-expressing stearoyl-CoA-desaturase, membrane composition and organization coordinate cellular pathways involved in Chol efflux and cell viability by different mechanisms. Now, we expanded our studies to a cell model over-expressing both Δ5 and Δ6 desaturases, which resulted in a permanently higher PUFA content in PM. Furthermore, this cell line showed increased PM fluidity, Chol storage, and mitochondrial activity. In addition, human apolipoprotein A-I-mediated Chol removal was less efficient in these cells than in the corresponding control. Taken together, our results suggested that the cell functionality is preserved by regulating PM organization and Chol exportation and homeostasis.Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La PlataFacultad de Ciencias Médica

Mecanismos moleculares que determinan el rol pro amiloidogénico de la apolipoproteína A-I

Las amiloidosis son patologías crónicas, en las que proteínas mal plegadas inducen citotoxicidad de distinta severidad y en distintos órganos. La amiloidosis inducida por mutantes naturales de la apolipoproteína A-I humana (apoA-I) se presenta con diversas manifestaciones clínicas dependiendo de la variante proteica que se encuentra involucrada1. En estudios previos determinamos que la conformación proteica puede sufrir alteraciones estructurales inducidas por parámetros pro-inflamatorios del micro ambiente que favorecen un procesamiento patogénico.Facultad de Ciencias Médica