Seleção de primares para análise molecular em genótipos de dendezeiro.

PIBIC 2010

Seleção de primers ISSR para análises genéticas em Tucumã-do-Pará (Astrocaryum vulgare Mart.).

Dentre as espécies oleaginosas existentes na Amazônia o tucumã (Astrocaryum vulgare Mart.) se destaca com grande potencialidade nas indústrias alimentícia, medicinal e como matéria prima ao mercado de biodiesel. Marcadores ISSR são utilizados em estudos de diversidade e variabilidade genética por não necessitarem de informação prévia da seqüência de DNA. Este trabalho teve como objetivo selecionar primers ISSR para análises genéticas em tucumã-do-pará. Foram aplicados 100 primers ISSR do Set 9 da UBC em cinco amostras de DNA de tucumã representantes de genótipos conservados no BAG da Embrapa Amazônia Oriental em Belém-PA. As PCR?s foram feitas em temperatura de anelamento padrão (Ta=47ºC). A análise foi feita visualmente considerando a amplificação ou não amplificação de produtos. Dos 100 primers 54 não amplificaram bandas. Dos 46 que revelaram produtos, 17 produziram bandas claras e inespecíficas, enquanto 29 primers revelaram bandas específicas. Com o presente estudo foi possível selecionar preliminarmente 26 primers capazes de amplificar regiões de A. vulgare, e sugere-se inicialmente, os primers ISSR UBC 890 e UBC 891 que melhor amplificaram, para estudos de divergência genética do tucumã-do-pará

Transferibilidade de locos SSR de Astrocaryum aculeatum Mart. para Astrocaryum vulgare Mart.

Este trabalho foi realizado com o objetivo de testar a transferibilidade de locos SSR de Astrocaryum aculeatum para a espécie Astrocaryum vulgare. Para isso, foram aplicados doze locos desenvolvidos para A. aculeatum em seis amostras de DNA obtidas de matrizes de A. vulgare de diferentes procedências. As reações de amplificação foram conduzidas de acordo com o protocolo desenvolvido por Ramos (2012), com pequenas adaptações. Os produtos amplificados foram aplicados em gel de agarose ultra pura a 1,5%, corado com brometo de etídio e submetido à eletroforese horizontal por 1:30 horas. Os perfis dos géis foram fotodocumentados e as imagens armazenadas digitalmente. A transferibilidade dos locos foi avaliada com base na amplificação de produtos e na sua nitidez. Dos doze locos testados, seis apresentaram amplificação satisfatória (visualização do produto), perfazendo uma taxa de transferibilidade de 50%, sugerindo que as espécies possuam alto grau de parentesco. Em todos os locos amplificados não foi detectada a presença de produtos secundários, sendo, portanto, úteis para acessar o genoma de A. vulgare

Estimativa da variabilidade genética do dendezeiro (Elaeis guineensis Jacq.) por marcadores RAPD em área de ocorrência da doença amarelecimento fatal.

O dendezeiro (Elaeis guineensis Jacq.) é uma espécie vegetal de extrema importância econômica no Estado do Pará, sendo indispensáveis estudos que viabilizem a sua caracterização genética, a fim de direcionar programas de melhoramento nesta espécie e o monitoramento da sua variabilidade. Desta forma, o objetivo deste trabalho consistiu em realizar a caracterização genética de plantas de um plantio comercial de mais de 26 anos, localizado no município de Moju, estado do Pará. Foram coletadas e extraídas amostras de cinquenta e uma plantas, sendo 24 afetadas pelo Amarelecimento Fatal (AF) e 27 possivelmente resistentes, já que não apresentavam nenhum sintoma da doença. Para a caracterização genética foram utilizados marcadores moleculares RAPD (Polimorfismos de DNA Amplificados ao Acaso). A seleção dos iniciadores foi realizada a partir de um screening de seis kits (kit OPA, OPU, OPN, OPO, OPB e OPF) dos quais foram selecionados os quatorze mais polimórficos que geraram bandas no intervalo de três a oito, viáveis para utilização nesse estudo. A análise de similaridade genética foi realizada com 50 marcadores RAPD, no programa NTSYS-pc 2.0 utilizando o coeficiente de Jaccard. A partir dos dados gerados pela UPGMA, pôde-se dimensionar a variabilidade existente entre os mesmos. Foram obtidos intervalos de similaridade genética variando de 0,23 a 0,86, sendo que os indivíduos mais divergentes foram o R08 com o R24 (0,23) e os mais similares os genótipos R04 e o D07 (0,86). Os resultados indicaram a existência de variabilidade genética a ser explorada na espécie em estudo e que a ?resistência? a doença apresentada por algumas plantas não é concretizada como sendo de origem genética

Variabilidade genética em muçuã utilizando marcadores moleculares RAPD.

O muçuã (Kinosternon scorpioides) é uma espécie de extrema importância econômica no Estado do Pará, sendo indispensáveis estudos que viabilizem sua conservação e sua caracterização genética, a fim de direcionar programas de melhoramento nessa espécie e o monitoramento da sua variabilidade. O objetivo foi avaliar a variabilidade genética existente em populações de Kinosternon scorpioides do Banco de Germoplasma Animal da Amazônia Oriental (BAGAM), localizado em Salvaterra, na ilha de Marajó, no Estado do Pará, a fim de realizar uma caracterização molecular inicial da espécie. Foram utilizados marcadores moleculares RAPD (Polimorfismos de DNA Amplificados ao Acaso). Para tanto, foram obtidas amostras de DNA a partir de sangue total de 39 indivíduos de diferentes populações. A seleção de primers foi realizada a partir de um screening de quatro kits (kit OPA, OPU, OPJ, OPM), dos quais foram selecionados os doze mais polimórficos, que geraram bandas no intervalo de três a oito, viáveis para utilização. A análise de similaridade genética foi realizada com 53 marcadores RAPD, no programa NTSYS-pc, 2.0 utilizando o coeficiente de Jaccard. A partir dos dados gerados pela UPGMA (Unweighted Pair Group Method with Arithmetic Mean), pôde-se dimensionar a variabilidade existente entre os mesmos. Foram obtidos intervalos de similaridade genética variando de 3-98%, sendo que os indivíduos mais divergentes foram o M8 e o M14 com o M33 (0,03) e os mais similares, os genótipos M3 e o M4 (0,98). Os resultados indicaram a existência de variabilidade genética a ser explorada na espécie, tanto para programas de melhoramento genético como para a conservação da mesm

Respiration, Oxidative Phosphorylation, And Uncoupling Protein In Candida Albicans.

The respiration, membrane potential (Deltapsi), and oxidative phosphorylation of mitochondria in situ were determined in spheroplasts obtained from Candida albicans control strain ATCC 90028 by lyticase treatment. Mitochondria in situ were able to phosphorylate externally added ADP (200 microM) in the presence of 0.05% BSA. Mitochondria in situ generated and sustained stable mitochondrial Deltapsi respiring on 5 mM NAD-linked substrates, 5 mM succinate, or 100 microM N,N,N',N'-tetramethyl-p-phenylenediamine dihydrochloride plus 1 mM ascorbate. Rotenone (4 microM) inhibited respiration by 30% and 2 micro M antimycin A or myxothiazole and 1 mM cyanide inhibited it by 85%. Cyanide-insensitive respiration was partially blocked by 2 mM benzohydroxamic acid, suggesting the presence of an alternative oxidase. Candida albicans mitochondria in situ presented a carboxyatractyloside-insensitive increase of Deltapsi induced by 5 mM ATP and 0.5% BSA, and Deltapsi decrease induced by 10 microM linoleic acid, both suggesting the existence of an uncoupling protein. The presence of this protein was subsequently confirmed by immunodetection and respiration experiments with isolated mitochondria. In conclusion, Candida albicans ATCC 90028 possesses an alternative electron transfer chain and alternative oxidase, both absent in animal cells. These pathways can be exceptional targets for the design of new chemotherapeutic agents. Blockage of these respiratory pathways together with inhibition of the uncoupling protein (another potential target for drug design) could lead to increased production of reactive oxygen species, dysfunction of Candida mitochondria, and possibly to oxidative cell death.371455-6

Enraizamento in vitro de mogno (Swietenia macrophylla King).

O presente trabalho teve como objetivo comparar diferentes concentrações de AIB e ANA para indução do enraizamento de ápices e brotações de mogno (Swietenia macrophylla King) in vitro. Os explantes utilizados foram obtidos de experimentos de multiplicação in vitro com, no mínimo, 2cm de comprimento, com suas bases cortadas de forma transversal. O meio utilizado foi o MS (Murashige & Skoog, 1962), porém adicionado de vitamina do WPM (Mccown & Lloyd, 1981), suplementado com 3% de sacarose, ágar 0,7% e PVP (Polivinilpirrolidona) 0,1%. Foram testados AIB a (0,1; 1,0; 3,0 e 5,0 mgL-1) e ANA a (0,1; 2,0 e 5,0 mgL-1). Os explantes permaneceram por cinco dias nos meios de cultura, em contato com estas auxinas. Após, foram transferidos para meios novos sem os reguladores de crescimento e com os sais do meio MS reduzidos à metade. A auxina ANA na concentração de 2,0 e 5,0 mgL-1foi mais eficiente para indução do enraizamento, com percentual acima de 70%, tanto em ápice quanto em brotações

Transferibilidade de locos SSR de Astrocaryum aculeatum Mart. para Astrocaryum murumuru Mart.

Este trabalho foi realizado com o objetivo de testar a transferibilidade de locos SSR de Astrocaryum aculeatum para a espécie Astrocaryum murumuru. Para isso, foram aplicados dez locos desenvolvidos para A. aculeatum em cinco amostras de DNA obtidas de matrizes de A. murumuru de diferentes procedências. As reações de amplificação foram conduzidas de acordo com o protocolo desenvolvido por Ramos et al. (2012), com pequenas adaptações para testar diferentes temperaturas de anelamento, com a finalidade de determinar a temperatura ótima de amplificação em A. murumuru. Os produtos amplificados foram aplicados em gel de agarose a 1,5%, corado com brometo de etídio e submetidos à eletroforese horizontal por 1h 30 min. Os perfis dos géis foram fotodocumentados e as imagens armazenadas digitalmente. A transferibilidade dos locos foi avaliada com base na amplificação de produtos e na sua nitidez. Todos os locos testados apresentaram amplificação satisfatória (visualização do produto), perfazendo uma taxa de transferibilidade de 100%, sugerindo que as espécies possuam alto grau de parentesco e sendo, portanto, úteis para acessar o genoma de A. murumuru