UTILIZAÇÃO DA VITAMINA C PARA DESVIO DA PROPORÇÃO DO SEXO EM CADELAS IDENTIFICADAS EM ESTRO PELA COLPOCITOLOGIA

Several studies have been developed trying to clarify the determination of sex and the factors responsible for the deviation of the sex proportion. This study aimed to administer vitamin C in an attempt to promote the deviation of the sex proportion of female dogs detected in estrus by colpocytology. Forty animals, aged between two and seven years, from two kennels in the city of Salvador-BA and metropolitan region were used. The bitches were followed every two weeks using colpocytology to identify the estrus phase. After detecting the onset of proestrus (vaginal bleeding), follow-up was carried out on alternate days in order to assess the best day for covering the animal. The animals were mated for a period of 8 days. The total 40mg/kg of vitamin C was administered orally twice a day. Treatment started 24 hours before mating, ending after the last day of copulation, that is, after 8 days. There was the birth of 58% of females, however this deviation was not statistically significant. We concluded that however further studies should be carried out to try to determine what factors are responsible for the male:female birth rate in dogs.Vários estudos têm sido desenvolvidos tentando esclarecer a determinação do sexo e os fatores responsáveis pelo desvio da proporção do sexo. O presente trabalho teve como objetivo administrar a vitamina C na tentativa de promover o desvio da proporção do sexo de cadelas detectadas em estro pela colpocitologia para o sexo feminino. Utilizaram-se 40 animais, com idade variando de dois a sete anos, provenientes de dois canis do município de Salvador- BA e região metropolitana. As cadelas foram acompanhadas quinzenalmente utilizando-se da colpocitologia para identificação da fase de estro. Após a detecção do início do proestro (sangramento vaginal), foi realizado o acompanhamento em dias alternados com o objetivo de avaliar o melhor dia para a cobertura do animal. Os animais foram acasalados durante um período 5 dias. Administrou-se 40mg/kg de vitamina C, por via oral, duas vezes ao dia, de forma suplementar. O tratamento iniciou-se 24 horas antes da cobertura, finalizando 24h após o último dia de cópula, ou seja, após os 8 dias. Houve o nascimento de 58% de fêmeas, entretanto esse desvio não foi estatisticamente significativo. Concluiu-se que mais estudos devem ser realizados para tentar determinar quais fatores são responsáveis pela taxa de natalidade macho: fêmea em cães

Effect of epidermal growth factor (EGF) on in vitro maturation of canine oocyte

This work aimed to evaluate the influence of EGF on canine oocyte in vitro maturation (IVM). We carried out the transport of the ovaries in sodium chloride 0.9% solution, which were cut into phosphate-buffered saline (PBS) and the cumulus oocyte complexes (COCs) selected in tissue culture medium (TCM), supplemented with 199 HEPES. A total of 405 grade 1 oocytes were collected from bitches in anestrus and diestrus. Oocytes from the two phases of estrous cycle were subjected to two treatments: medium with addition of 10 ηg/mL epidermal growth factor (EGF) (T) and medium without supplementation (C). After 72 h of maturation, COCs were denuded, fixed and stained with Hoechst 33342 to assess nuclear maturation. The oocytes obtained from the ovaries of the diestrus phase of the T group demonstrated higher percentage (18.8%) of oocytes at metaphase II stage (M-II) than C group (1.3%) (p < 0.01). The oocytes from anestrus phase demonstrated difference (p < 0.05) between the groups, observing smaller proportion (4.1%) of oocytes at the stage of germinal vesicle (GV) in group T compared to group C (16.1%). Comparing the different reproductive status in media supplemented with EGF difference (p < 0.05) was observed only in oocytes diestrus phase relative to the stage of M-II. Thus, supplementation on maturation medium at a concentration of 10 ηg/mL of EGF in this study had positive influence only on IVM of canine oocytes obtained from diestrus phase, increasing the levels of M-II in this species.Este trabalho teve o objetivo de avaliar a influência do EGF na maturação in vitro (MIV) de cadelas. Realizou-se o transporte dos ovários em solução de cloreto de sódio 0,9%, que foram seccionados em solução salina fosfato tamponado (PBS) e os complexos cumulus oócito (COCs) selecionados em meio de cultura de tecidos (TCM) 199 suplementado com HEPES. Foram coletados 405 oócitos grau 1 de cadelas em anestro e diestro. Os oócitos provenientes das duas fases do ciclo estral foram submetidos a dois tratamentos: meio com adição de 10 ηg/mL do fator de crescimento epidermal (EGF) (T) e meio sem suplementação (C). Depois de 72 horas de maturação, os COCs foram desnudados, fixados e corados com HOESCHT 33342 para avaliação da maturação nuclear. Os oócitos obtidos dos ovários da fase de diestro do grupo T demonstraram maior porcentagem (18,8%) de oócitos no estágio de metáfase II (M-II), em relação ao grupo C (1,3%) (p < 0,01). Nos oócitos obtidos da fase de anestro houve diferença (p < 0,05) entre os grupos, observando-se menor parcela (4,1%) de oócitos no estágio de vesícula germinativa (VG) no grupo T, quando comparado ao grupo C (16,1%). Comparando-se as diferentes fases reprodutivas, em meios suplementados com EGF, foi observada diferença (p < 0,05) apenas nos oócitos obtidos da fase de diestro em relação ao estágio de M-II. Dessa maneira, a suplementação no meio de maturação na concentração de 10 ηg/mL, neste estudo, exerceu influência positiva apenas na MIV de oócitos caninos oriundos da fase de diestro, incrementando os índices de M-II nessa espécie

INFLUÊNCIA DA IDADE SOBRE A QUALIDADE DE OÓCITOS IMATUROS CANINOS

Among some factors that influence the quality of canine oocytes, age is well studied. Knowing that the morphological assessment of oocytes is a useful tool for this analysis, the use of new techniques such as the brilliant cresyl blue staining (BCB) increases this assessment. The objective of this work was to analyze the quantity and the oocyte quality of bitches in different age groups through the conventional morphological evaluation, in addition to the bright cresyl blue dye. For this purpose, 2.302 oocytes from 33 bitches were divided into four age groups from 1 to 3 years old; 4-6, 7-10 and over 10 years old and their oocytes were classified as G1, G2 and G3, as well as stained (BCB (+)) and non-stained (BCB (-)). The values ​​were compared using the Kruskal test -Wallis and Dunn post-test, by which it was possible to obtain higher amounts of G1 and BCB (+) oocytes in the range of 1 to 3 years, indicating that this range oocytes have a greater chance of success in fertilization processes and in vitro production, for example.Dentre alguns fatores que influenciam na qualidade dos ovócitos caninos, a idade é bem estudada. Sabendo que a avaliação morfológica dos ovócitos é uma ferramenta útil para esta análise, a utilização de novas técnicas como a coloração com azul de cresil brilhante (BCB) incrementa esta avaliação. O objetivo deste trabalho foi analisar a quantidade e a qualidade oocitária de cadelas em diferentes faixas etárias através da avaliação morfológica convencional, além do corante azul de cresil brilhante. Para tanto, 2.302 ovócitos de 33 cadelas foram divididos em quatro faixas etárias de 1 a 3 anos; 4-6, 7-10 e maiores de 10 anos e seus ovócitos foram classificados em G1, G2 e G3, corados (BCB (+)) e não corados (BCB (-)). Os valores foram comparados por meio do teste de Kruskal -Wallis e pós-teste de Dunn, pelo qual foi possível obter maiores quantidades de oócitos G1 e BCB (+) na faixa de 1 a 3 anos, indicando que nesta faixa os oócitos possuem maior chance de sucesso em processos de fertilização e produção in vitro, por exemplo

AVALIAÇÃO DOS EFEITOS DA PIOMETRA NA VIABILIDADE DE OÓCITOS CANINOS IMATUROS PELA UTILIZAÇÃO DO AZUL CRESIL BRILHANTE

The bitch is an experimental model of wild and even endangered canids. Therefore, the study of the factors that influence your fertility benefits scientific advances in both segments. Knowing that pyometra is one of the common uterine pathologies in bitches, this work aimed to evaluate the effects of pyometra on the morphology and competence of canine oocytes through the use of Azul CresilBrilhante (ACB). For this purpose, 1197 canine oocytes that were divided into 2 groups classified as control (healthy) and treatment (pyometra). They were morphologically classified into grade 1 (G1), grade 2 (G2) and grade 3 (G3) and according to the ACB stain as ACB (+) and ACB (–) (not stained). Bitches in the healthy group had higher amounts of total oocytes (795) and better quality (495 oocytes G1) and competence (45 ± 9.8 ACB (+)). The use of ACB was useful to distinguish the competence of the studied oocytes and can be an auxiliary tool for choosing the best oocytes.The bitch is an experimental model of wild and even endangered canids. Therefore, the study of the factors that influence your fertility benefits scientific advances in both segments. Knowing that pyometra is one of the common uterine pathologies in bitches, this work aimed to evaluate the effects of pyometra on the morphology and competence of canine oocytes through the use of Azul CresilBrilhante (ACB). For this purpose, 1197 canine oocytes that were divided into 2 groups classified as control (healthy) and treatment (pyometra). They were morphologically classified into grade 1 (G1), grade 2 (G2) and grade 3 (G3) and according to the ACB stain as ACB (+) and ACB (–) (not stained). Bitches in the healthy group had higher amounts of total oocytes (795) and better quality (495 oocytes G1) and competence (45 ± 9.8 ACB (+)). The use of ACB was useful to distinguish the competence of the studied oocytes and can be an auxiliary tool for choosing the best oocytes

Influência das fases de anestro e diestro na competência meiótica oocitária de cadelas

A cadela apresenta particularidades reprodutivas que a diferencia de outras espécies. Diversos experimentos têm sido realizados visando estabelecer protocolos eficientes para a maturação, entretanto os resultados mostram-se insatisfatórios. Nesse aspecto, a fase reprodutiva da fêmea doadora deve ser considerada, já que pode ser um fator de variabilidade dos achados ate então presenciados nessa espécie. O objetivo deste estudo foi avaliar a influencia das fases do ciclo estral (anestro e diestro) na maturação in vitro (MIV) de cadelas. Os ovários foram transportados em solução de cloreto de sódio 0,9% e seccionados em solução salina fosfato tamponado (PBS) e os complexos cumulus-oócito (COCs) selecionados em meio de cultura de tecidos (TCM) 199 suplementado com HEPES. Foram obtidos 469 oócitos grau 1 de cadelas em anestro e diestro. Esses oócitos selecionados foram transferidos para o meio de maturação por um período de 72 horas, sendo posteriormente submetidos a solução de hialuronidase e corados com HOESCHT 33342 para avaliação da configuração nuclear. A comparação das fases de anestro e diestro não revelou diferença (p > 0,05) entre os estágios de maturação nuclear. Dessa maneira, a fase do ciclo estral não influenciou na maturação in vitro de oócitos caninos, incrementando os índices de M-II nesta espécie.The bitch has reproductive peculiarities that differentiate it from other species. Several experiments have been conducted to establish efficient protocols for maturation; however, the results appear to be unsatisfactory. In this respect, the reproductive female donor should be considered, since it can be a factor of variability of findings in this species. The objective of this study was to evaluate the relationship between the estrous cycle phases – phase diestrus and anestrus on canine oocyte in vitro maturation (IVM). The ovaries were transported in sodium chloride 0.9% solution, and were cut into phosphate-buffered saline (PBS) and the cumulus-oocyte complexes (COCs) selected in tissue culture medium (TCM), supplemented with 199 HEPES. A total of 469 grade 1 oocytes were collected from bitches in anestrus and diestrus. These selected oocytes were transferred to the maturation medium for a period of 72 hours, then subjected to hyaluronidase solution and stained with Hoechst 33342 to assess nuclear configuration. The comparison of anestrus and diestrus phase showed no differences (p > 0.05) between the nuclear maturation stages. Thus, the phase of the estrous cycle did not influence the in vitro maturation of canine oocytes, increasing the rates of M-II in this species

PRIMEIRA AVALIAÇÃO DA OBTENÇÃO E QUALIDADE DE OÓCITOS POST MORTEM DE LHAMAS PELO AZUL CRESIL BRILHANTE

This study aimed to demonstrate the applicability of the ovarian slicing technique in the recovery of post mortem oocytes in a llama (lama glama) victim of acute bronchopneumonia and the effectiveness of the brilliant cresyl blue (ACB) technique to select quality oocytes for a subsequent in vitro culture. The ovary-salpinge-hysterectomy (OSH) was performed 12 hours after the animal's death. The ovaries were transported refrigerated immediately to the laboratory in Leibovitz medium (L-15). The oocytes were identified, quantified under a stereomicroscopic and classified according to two methods: conventional morphological classification and ACB assay. 26 oocytes classified by conventional morphology were obtained: 10 oocytes grade 1, 12 oocytes grade 2 and 4 oocytes grade 3. The use of the ACB dye demonstrated that 88% of the evaluated oocytes maintained their quality and were competent for the conservation of genetic or future material application in reproductive biotechnologies in this species. Further studies are suggested aiming to use selected oocytes with ACB to enhance the success of in vitro culture in this species.Este estudo teve como objetivo demonstrar a aplicabilidade da técnica de fatiamento ovariano na recuperação de oócitos post mortem em uma lhama (lama glama) vítima de broncopneumonia aguda e a eficácia da técnica de azul de cresil brilhante (ACB) para selecionar oócitos de qualidade para posterior incubação cultura in vitro. A ovário-salpinge-histerectomia (OSH) foi realizada 12 horas após a morte do animal. Os ovários foram transportados refrigerados imediatamente ao laboratório em meio Leibovitz (L-15). Os oócitos foram identificados, quantificados em estereomicroscópio e classificados de acordo com dois métodos: classificação morfológica convencional e ensaio ACB. Obtiveram-se 26 oócitos classificados pela morfologia convencional: 10 oócitos grau 1, 12 oócitos grau 2 e 4 oócitos grau 3. A utilização do corante ACB demonstrou que 88% dos oócitos avaliados mantiveram sua qualidade e foram competentes para a conservação do patrimônio genético ou futura aplicação de material em biotecnologias reprodutivas nesta espécie. Novos estudos são sugeridos com o objetivo de utilizar oócitos selecionados com ACB para aumentar o sucesso do cultivo in vitro nesta espécie

ACHADOS HEMATOLÓGICOS, BIOQUÍMICOS, CITOLÓGICOS E NECROSCÓPICOS EM GATOS DOMÉSTICOS COM LEISHMANIOSE

Visceral leishmaniasis is a zoonosis caused by the protozoan genus Leishmania spp. It is commonly reported in dogs. However, currently, the number of infected cats has grown currently, being important to study how this disease behaves in these hosts. Clinical evaluation and laboratory tests are essential for the definitive diagnosis of leishmaniasis in felines. Therefore, the present study aimed to evaluate the hematological and cytological alterations in domestic cats with Leishmaniasis. in Two cats from the city of Fortaleza/CE were evaluated with hematological, biochemical, cytological, and necroscopic exams. The main hemogram findings were normochromic nomocytic anemia, erythrocyte rouleaux, platelet aggregates, and, in one of the cases, visualization of the amastigote form. In the biochemical analysis, hypoalbunemia was observed in one case and, in the other case, an increase in serum levels of urea and creatinine was noticed. Hyperproteinemia was observed in both cases. Cytology was used ante-mortem for the diagnosis of one of the cases and post-mortem for both cases to identify amastigote forms in the liver and other lymphoid organs such as lymph nodes, spleen, and bone marrow. Therefore, for cats with nonspecific signs, it is necessary to carry out complementary tests such as blood count, serum biochemistry, cytology of the lesions, and necroscopic examination to obtain a definitive diagnosis.A Leishmaniose Visceral é uma zoonose causada pelo protozoário do gênero Leishmania spp. É mais comumente relatada em cães; mas, atualmente, o número de gatos infectados tem crescido, sendo importante o estudo de casos de como essa doença se comporta nesses hospedeiros. A avaliação clínica e os exames laboratoriais são imprescindíveis para o diagnóstico definitivo de Leishmaniose em felinos. Diante disso, o presente estudo teve como objetivo avaliar as alterações hematológicas e citológicas em gatos domésticos com Leishmaniose em dois gatos, provenientes do município de Fortaleza/CE. Foram avaliados os exames hematológicos, bioquímicos, citológicos e necroscópicos desses pacientes. Os principais achados de hemograma foram anemia normocítica normocrômica, rouleaux eritrocitário, agregados plaquetários e, em um dos casos, a visualização da forma amastigota. Na análise bioquímica, observou-se hipoalbunemia em um caso e, no outro, aumento dos níveis séricos de uréia e creatinina. Em ambos os casos, se observou hiperproteinemia. A citologia foi utilizada ante-mortem, para diagnóstico de um dos casos e post-mortem nos dois casos, a fim de se detectar formas amastigotas no fígado e outros órgãos linfoides, como linfonodos, baço e medula óssea. Portanto, para gatos com sinais inespecíficos, faz-se necessária a realização de exames complementares, como hemograma, bioquímica sérica, citologia das lesões e exame necroscópico, a fim de diagnóstico definitivo