Avaliação do potencial embriogênico de doze cultivares de soja (Glycine max (L.) Merril) em dois laboratórios

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Residual C-peptide in patients with Type 1 diabetes and multiethnic backgrounds

OBJECTIVE: To evaluate serum C-peptide in 88 patients from a multiethnic population with Type-1 diabetes and variable disease durations. METHOD: Eighty-eight patients with a mean disease duration of 8.1 +7.6 years were included and underwent C-peptide measurement before and after glucagon stimulation. Chi-squared and Mann Whitney U-tests were used to compare the variables between groups (all two-tailed, a = 0.05). Spearmans correlation coefficient was used to test the association between the continuous variables. Logistic regression was used for the multivariate analysis. Twenty-eight (31.8%) individuals had significantly detectable C-peptide levels after stimuli, particularly those with a shorter disease duration (

Seleção de genótipos brasileiros de soja com alto potencial para embriogênese somática e regeneração de plantas

The aim of this work was to identify Brazilian soybean (Glycine max) genotypes with potential to respond to in vitro culture stimuli for primary somatic embryo induction, secondary embryo proliferation and plant regeneration. Differences among eight tested cultivars were observed at each stage. Two cultivars, IAS-5 and BRSMG 68 Vencedora, were selected for the evaluation of the capacity for embryo differentiation and plant regeneration. These cultivars had high embryo induction frequencies, repetitive embryogenic proliferation, and low precocious embryo germination in the initial experiment. The effect of abscisic acid (ABA) and charcoal addition on plant regeneration was investigated. The addition of ABA to proliferation medium and of ABA and activated charcoal to maturation medium increased embryo differentiation rates, which resulted in a higher number of regenerated plants. The BRSMG 68 Vencedora cultivar was found to have a high potential for embryo induction, embryo proliferation and plant regeneration. The potential of this cultivar for somatic embryogenesis was similar to that observed for cultivar IAS-5, which is currently used for soybean transformation in Brazil. BRSMG 68 Vencedora may be a good alternative genotype for soybean genetic engineering via somatic embryogenesis protocols.O objetivo deste trabalho foi identificar cultivares brasileiras de soja (Glycine max) com capacidade de resposta aos estímulos da cultura in vitro para a indução de embriões somáticos primários, proliferação de embriões secundários e regeneração de plantas. Foram observadas diferenças para cada estádio entre as oito cultivares testadas. Foram selecionadas duas cultivares, 'IAS-5' e BRSMG 68 Vencedora, para avaliação do potencial dos embriões quanto à diferenciação e conversão em plantas. Essas cultivares tiveram altas taxas de indução, proliferação embriogênica repetitiva e baixa germinação precoce dos embriões, no experimento inicial. Foi investigado o efeito da adição de ácido abscísico (ABA) e carvão sobre a regeneração. Os resultados mostraram que a adição de ABA ao meio de proliferação e de ABA e carvão ativado ao meio de maturação aumentaram as taxas de diferenciação dos embriões, o que resultou em maior número de plantas regeneradas. A cultivar BRSMG 68 Vencedora foi identificada como genótipo com alto potencial para indução e proliferação de embriões, bem como para regeneração de plantas. O potencial dessa cultivar quanto à embriogênese somática foi similar ao observado para a cultivar IAS-5, atualmente utilizada para transformação de soja no Brasil. A BRSMG 68 Vencedora pode ser um genótipo alternativo para a engenharia genética de soja via protocolos de embriogênese somática

Anotação da família WRKY de soja [Glycine max (L.) Merril] e caracterização funcional de genes envolvidos na resposta a Phakopsora pachyrhizi, agente causador da ferrugem asiática

Fatores de transcrição WRKY de soja têm sido identificados e relacionados em resposta a estresses bióticos e abióticos. No entanto, em estudos anteriores, a família WRKY estava subestimada. Recentemente, o envolvimento dos genes WRKY em resposta a Phakopsora pachyrhizi, o agente causador de uma importante doença da soja, a Ferrugem Asiática, foi sugerido a partir de análise de dados de expressão gênica global. No presente estudo, a anotação completa da família WRKY de soja e a análise funcional de genes envolvidos na resposta à infecção por P. pachyrhizi foram realizada. A partir de buscas em bancos de dados do genoma da soja, genes WRKY foram anotados e aqueles envolvidos na resposta a P. pachyrhizi foram identificados usando quatro experimentos de expressão gênica global: superSAGE, RNA-Seq de lesões microdissecadas e dois microarranjos. O padrão de expressão gênica foi confirmado por RT-qPCR para oito genes. Embriões somáticos de soja foram transformados, visando a superexpressão ou silenciamento gênico, e plantas transgênicas foram desafiadas com P. pachyrhizi. Cento e setenta e oito genes WRKY foram anotados e 74 identificados como diferencialmente expressos durante a infecção pelo fungo. Em resposta a P. pachyrhizi, oito genes apresentaram expressão mais inicial e⁄ou mais forte no genótipo resistente quando comparado com o suscetível. Todos os oito genes analisados mostraram o pico de expressão nas primeiras 24 horas após a inoculação. Comparando a mineração de dados em resposta à infecção por P. pachyrhizi com o resultado do cladograma, um padrão de expressão similar pode ser observado em genes relacionados. Plantas superexpressando Glyma15g00570 não foram recuperadas. Provavelmente a expressão constitutiva deste gene afeta a regeneração das plantas. A participação de quatro genes homólogos em resposta ao patógeno foi demonstrada usando a técnica de RNAi. Quando infectada por P. pachyrhizi, folhas da linhagem silenciada mostraram maior número de lesões do que plantas não-transformadas. Em conclusão, neste trabalho a família WRKY de soja completa foi anotada e a participação de alguns membros em resposta a P. pachyrhizi foi demonstrada.Soybean WRKY transcription factors have been identified and related with the response to biotic and abiotic stresses. However the soybean WRKY family was underrepresented in previous studies. Recently, the involvement of WRKY genes in response to Phakopsora pachyrhizi, the causal agent of an important soybean disease - Asian Soybean Rust (ASR)- has been suggested by the analyses of global geneexpression data. In the present study a genome-wide annotation of soybean WRKY family and the functional analyzes of genes involved in response to P. pachyrhizi were performed. Following a search in the soybean genomic databases, WRKY-encoding genes were annotated and those involved in response to P. pachyrhizi were identified using global gene-expression experiments: superSAGE, RNA-Seq of microdissected lesions and two microarrays. Gene expression pattern was validated by RT-qPCR. Soybean somatic embryos were transformed aiming WRKY overexpression or silencing, and transgenic plants were challenged with P. pachyrhizi. One hundred-seventy-eight WRKY genes were annotated and 74 identified as differentially expressed during fungus infection. In response to P. pachyrhizi, eight genes were expressed earlier and⁄or stronger in a resistant genotype when compared to a susceptible one. All the eight analyzed genes showed the expression peak at the first 24 hours after inoculation. By comparing data mining in response to P. pachyrhizi infection with the clustering result, similar expression pattern could be observed in closely related genes. Plants overexpressing Glyma15g00570 were not recovered. Probably the constitutive overexpression of the gene may affect the regeneration of plants. The participation of four homologous genes in response to pathogen was demonstrated using RNAi approach. When infected by P. pachyrhizi, leaves of silenced transgenic line showed higher number of lesions than wild-type plants. In conclusion, the complete soybean WRKY family was annotated and the participation of some members in response to P. pachyrhizi was demonstrated

Anotação da família WRKY de soja [Glycine max (L.) Merril] e caracterização funcional de genes envolvidos na resposta a Phakopsora pachyrhizi, agente causador da ferrugem asiática

Fatores de transcrição WRKY de soja têm sido identificados e relacionados em resposta a estresses bióticos e abióticos. No entanto, em estudos anteriores, a família WRKY estava subestimada. Recentemente, o envolvimento dos genes WRKY em resposta a Phakopsora pachyrhizi, o agente causador de uma importante doença da soja, a Ferrugem Asiática, foi sugerido a partir de análise de dados de expressão gênica global. No presente estudo, a anotação completa da família WRKY de soja e a análise funcional de genes envolvidos na resposta à infecção por P. pachyrhizi foram realizada. A partir de buscas em bancos de dados do genoma da soja, genes WRKY foram anotados e aqueles envolvidos na resposta a P. pachyrhizi foram identificados usando quatro experimentos de expressão gênica global: superSAGE, RNA-Seq de lesões microdissecadas e dois microarranjos. O padrão de expressão gênica foi confirmado por RT-qPCR para oito genes. Embriões somáticos de soja foram transformados, visando a superexpressão ou silenciamento gênico, e plantas transgênicas foram desafiadas com P. pachyrhizi. Cento e setenta e oito genes WRKY foram anotados e 74 identificados como diferencialmente expressos durante a infecção pelo fungo. Em resposta a P. pachyrhizi, oito genes apresentaram expressão mais inicial e⁄ou mais forte no genótipo resistente quando comparado com o suscetível. Todos os oito genes analisados mostraram o pico de expressão nas primeiras 24 horas após a inoculação. Comparando a mineração de dados em resposta à infecção por P. pachyrhizi com o resultado do cladograma, um padrão de expressão similar pode ser observado em genes relacionados. Plantas superexpressando Glyma15g00570 não foram recuperadas. Provavelmente a expressão constitutiva deste gene afeta a regeneração das plantas. A participação de quatro genes homólogos em resposta ao patógeno foi demonstrada usando a técnica de RNAi. Quando infectada por P. pachyrhizi, folhas da linhagem silenciada mostraram maior número de lesões do que plantas não-transformadas. Em conclusão, neste trabalho a família WRKY de soja completa foi anotada e a participação de alguns membros em resposta a P. pachyrhizi foi demonstrada.Soybean WRKY transcription factors have been identified and related with the response to biotic and abiotic stresses. However the soybean WRKY family was underrepresented in previous studies. Recently, the involvement of WRKY genes in response to Phakopsora pachyrhizi, the causal agent of an important soybean disease - Asian Soybean Rust (ASR)- has been suggested by the analyses of global geneexpression data. In the present study a genome-wide annotation of soybean WRKY family and the functional analyzes of genes involved in response to P. pachyrhizi were performed. Following a search in the soybean genomic databases, WRKY-encoding genes were annotated and those involved in response to P. pachyrhizi were identified using global gene-expression experiments: superSAGE, RNA-Seq of microdissected lesions and two microarrays. Gene expression pattern was validated by RT-qPCR. Soybean somatic embryos were transformed aiming WRKY overexpression or silencing, and transgenic plants were challenged with P. pachyrhizi. One hundred-seventy-eight WRKY genes were annotated and 74 identified as differentially expressed during fungus infection. In response to P. pachyrhizi, eight genes were expressed earlier and⁄or stronger in a resistant genotype when compared to a susceptible one. All the eight analyzed genes showed the expression peak at the first 24 hours after inoculation. By comparing data mining in response to P. pachyrhizi infection with the clustering result, similar expression pattern could be observed in closely related genes. Plants overexpressing Glyma15g00570 were not recovered. Probably the constitutive overexpression of the gene may affect the regeneration of plants. The participation of four homologous genes in response to pathogen was demonstrated using RNAi approach. When infected by P. pachyrhizi, leaves of silenced transgenic line showed higher number of lesions than wild-type plants. In conclusion, the complete soybean WRKY family was annotated and the participation of some members in response to P. pachyrhizi was demonstrated