Création et caractérisation d'outils génétiques destinés à visualiser les réseaux neuronaux chez la souris

Le fonctionnement du système nerveux central (SNC) des mammifères met en jeu la communication entre les neurones reliés entre eux par des connexions synaptiques et formant des réseaux neuronaux. Afin d étudier la formation, le maintien et le fonctionnement des réseaux neuronaux, nous avons développé et amélioré de nouveaux outils génétiques codant pour deux types de protéines, fluorescentes ou bioluminescentes : La protéine hybride fluorescente GFP-TTC qui conserve les propriétés de transport rétrograde et trans-synaptique de la toxine tétanique tout en étant dépourvue de toxicité. Cette protéine est ainsi un marqueur anatomique des réseaux de neurones actifs connectés entre eux. Différentes constructions moléculaires gfp-ttc contenant une séquence IRES et des sites loxP, ont été fabriquées dans le but de construire des souris rapporteurs universels pouvant exprimer ces constructions de manière ubiquitaire dans tous les neurones du SNC. L idée, à plus long terme, mais qui ne fait pas partie de ce travail, est de croiser ces souris rapporteurs avec des souris exprimant la recombinase Cre dans des sous-populations de neurones très spécifiques afin d étudier les réseaux neuronaux associés à ces populations neuronales. Deux souris transgéniques, chacune contenant une version différente du transgène gfp-ttc, ont été obtenues à l issue de ce travail de thèse. Le premier animal, obtenu par transgenèse classique, ne présentait malheureusement pas une expression ubiquitaire du transgène et ne pourra donc pas être utilisé comme souris rapporteur universel . Néanmoins, le transgène est exprimé dans des régions spécifiques du SNC et notamment dans la rétine au cours de l embryogenèse jusque chez l adulte. Par ailleurs, son expression est sélective des cellules bipolaires et ganglionnaires de la rétine, faisant de la protéine fluorescente GFP-TTC un marqueur fluorescent spécifique de ces types cellulaires. En conséquence, cette lignée de souris pourrait représenter un outil de choix pour suivre anatomiquement le développement, la migration et l architecture des ces neurones rétiniens au cours des stades embryonnaires et adultes. Suite à cet échec, nous avons généré un second animal transgénique par recombinaison homologue au locus HPRT afin d optimiser l expression ubiquitaire du transgène. Cet animal, obtenu très récemment, est en cours de caractérisation et nous espérons vivement qu il exprimera gfp-ttc de manière ubiquitaire. Ce travail de transgenèse a été parallèlement complété par une étude de caractérisation des propriétés moléculaires et cellulaires des facteurs agissant sur l internalisation neuronale de la sonde GFP-TTC à la synapse neuromusculaire. L idée était d identifier la voie de transport intracellulaire utilisée par la protéine GFP-TTC dans le but de pouvoir ensuite améliorer le transport intracellulaire et trans-synaptique de cette sonde. Ainsi, des expériences de coinjection de la protéine GFP-TTC et des neurotrophines BDNF ou NT-4 dans le muscle, nous ont permis de mettre en évidence une augmentation de l endocytose de la protéine GFP-TTC en présence de ces neurotrophines. Ces résultats suggèrent la présence d un mécanisme d internalisation similaire entre ces neurotrophines et la sonde GFP-TTC. La protéine hybride bioluminescente GFP-aequorine (GA) qui est sensible au Ca2+. Sa liaison au Ca2+ entraîne l émission de lumière verte ( max=509nm) et permet de suivre les variations de concentrations calciques associées à l activité cellulaire. Afin d étudier l activité de réseaux neuronaux, provenant des régions profondes du cerveau de la souris adulte, nous avons dû construire de nouvelles sondes bioluminescentes en se basant sur le transfert d énergie chimioluminescente, retrouvé dans GA. Deux nouvelles sondes génétiquement codées ont ainsi été obtenues : Venus-aequorine (VA) et mRFP1-aequorine (RA) dont les signaux luminescents ont été déplacés vers les longueurs d ondes rouges par rapport à GA. Nous avons observé que l intensité bioluminescente de la sonde VA était plus importante que celle de RA. Toutefois, seul le signal émis par RA (dans un rouge plus lointain que le signal émis par VA) et provenant de régions profondes du cerveau de la souris adulte, s est avéré être détectable. Cette amélioration, par déplacement de la bioluminescence vers des longueurs d ondes lointaines, représente une avancée technique dans le développement des nouvelles technologies d imageries du petit animal. Ces deux nouvelles sondes sont en cours d être brevetées par l Institut Pasteur. En conclusion, l ensemble de ce travail de thèse a essentiellement consisté en (1) la création, l amélioration et la caractérisation de nouvelles sondes génétiques (destinées à l analyse de l activité des réseaux neuronaux) et (2) la génération de souris transgéniques exprimant certaines de ces sondes. Le développement de tels outils biotechnologiques se place en amont d études à plus long terme du développement et de l activité des réseaux neuronaux chez l animal vivant.PARIS-BIUSJ-Thèses (751052125) / SudocPARIS-BIUSJ-Physique recherche (751052113) / SudocSudocFranceF

Place de la ciclosporine dans la RCH (étude bibliographique et analyse de 6 cas cliniques : faisabilité dans un Centre Hospitalier Général)

LYON1-BU Santé (693882101) / SudocPARIS-BIUM (751062103) / SudocSudocFranceF

La Maison urbaine d'époque romaine en Gaule narbonnaise et dans les provinces voisines: Actes du colloque d'Avignon (11-13 novembre 1994)

Les Documents d’Archéologie Vauclusienne publient des comptes-rendus de fouilles ou des synthèses sur toutes questions de la recherche archéologique en Vaucluse, de la préhistoire à l’époque contemporaine.Ce numéro spécial, formé de deux volumes, est étroitement lié au colloque consacré à la maison urbaine d’époque romaine qui s'est tenu à Avignon les 11, 12 et 13 novembre 1994. La transcription des actes de ce congrès constitue le premier des deux volumes. On y retrouve le texte des communications présentées lors de ces journées ainsi que celui des débats qu’elles ont suscités. Le deuxième volume, sous la forme d'un atlas, est un prolongement direct du colloque faisant état des derniers acquis en matière de maisons urbaines sur l’ensemble du territoire de la Gaule narbonnaise

La Maison urbaine d'époque romaine en Gaule narbonnaise et dans les provinces voisines: Actes du colloque d'Avignon (11-13 novembre 1994)

Les Documents d’Archéologie Vauclusienne publient des comptes-rendus de fouilles ou des synthèses sur toutes questions de la recherche archéologique en Vaucluse, de la préhistoire à l’époque contemporaine.Ce numéro spécial, formé de deux volumes, est étroitement lié au colloque consacré à la maison urbaine d’époque romaine qui s'est tenu à Avignon les 11, 12 et 13 novembre 1994. La transcription des actes de ce congrès constitue le premier des deux volumes. On y retrouve le texte des communications présentées lors de ces journées ainsi que celui des débats qu’elles ont suscités. Le deuxième volume, sous la forme d'un atlas, est un prolongement direct du colloque faisant état des derniers acquis en matière de maisons urbaines sur l’ensemble du territoire de la Gaule narbonnaise

La Maison urbaine d'époque romaine en Gaule narbonnaise et dans les provinces voisines: Actes du colloque d'Avignon (11-13 novembre 1994)

Les Documents d’Archéologie Vauclusienne publient des comptes-rendus de fouilles ou des synthèses sur toutes questions de la recherche archéologique en Vaucluse, de la préhistoire à l’époque contemporaine.Ce numéro spécial, formé de deux volumes, est étroitement lié au colloque consacré à la maison urbaine d’époque romaine qui s'est tenu à Avignon les 11, 12 et 13 novembre 1994. La transcription des actes de ce congrès constitue le premier des deux volumes. On y retrouve le texte des communications présentées lors de ces journées ainsi que celui des débats qu’elles ont suscités. Le deuxième volume, sous la forme d'un atlas, est un prolongement direct du colloque faisant état des derniers acquis en matière de maisons urbaines sur l’ensemble du territoire de la Gaule narbonnaise

Agglomérations, vici et castra du Nord de la Gaule entre Antiquité tardive et début du haut Moyen Âge

Ce dossier consacré aux agglomérations secondaires du Nord de la Gaule à la fin de l’Antiquité fait écho au colloque de Bliesbruck-Reinheim, publié il y a tout juste vingt ans et qui avait alors marqué un renouveau de l’archéologie des réseaux urbains des Gaules et des Germanies. Cependant, ses résultats, centrés sur la période du Haut-Empire, avaient laissé dans l’ombre les siècles couvrant la fin de l’Antiquité et le début du Moyen Âge pour lesquels la matière restait, à l’époque, bien trop limitée. Depuis cette date, la multiplication des données livrées par l’archéologie préventive et programmée ainsi que par plusieurs programmes de recherche régionaux, engagés conjointement dans l’ouest, le centre et l’est de la France, a permis de renouveler la documentation qui concerne cette question. Par ailleurs, des travaux récents ont révélé de nouveaux pôles de peuplement, en particulier des sites de hauteur, parfois associés à d’anciennes agglomérations d’origine antique. Les contributions réunies dans cet ouvrage, précédées d’une introduction générale, croisent cinq synthèses régionales et onze études monographiques, qui montrent la transformation profonde de l’aspect, des fonctions et des réseaux des agglomérations qui existaient à la fin du Haut-Empire. Si certaines disparaissent, nombre d’entre elles perdurent après la fin de l’Antiquité et la trame des agglomérations, telle qu’elle peut être perçue au vie siècle, est à la fois constituée de sites fondés à l’époque romaine, voire dès La Tène finale, et d’occupations nouvellement créées à la charnière de l’Antiquité tardive et du haut Moyen Âge