Therapeutic co-targeting of WEE1 and ATM downregulates PD-L1 expression in pancreatic cancer

학위논문(박사)--서울대학교 대학원 :의과대학 의학과,2019. 8. 방영주.Background: Pancreatic cancer (PC) is one of the most lethal cancers worldwide, but there are currently no effective targeted treatments. The DNA damage response (DDR) is under investigation for the development of novel anti-cancer drugs. Since DNA repair pathway alterations have been found frequently in PC, the purpose of this study was to test the DDR-targeting strategy in PC using WEE1 and ATM inhibitors. Materials and Methods: We performed in vitro experiments using a total of ten human PC cell lines to evaluate anti-tumor effect of AZD1775 (WEE1 inhibitor) alone or combination with AZD0156 (ATM inhibitor). We established Capan-1-mouse model for in vivo experiments to confirm our findings. Results: In our research, we found that WEE1 inhibitor (AZD1775) as single agent showed anti-tumor effects in PC cells, however, targeting WEE1 upregulated p-ATM level. Here, we observed that co-targeting of WEE1 and ATM acted synergistically to reduce cell proliferation and migration, and to induce DNA damage in vitro. Notably, inhibition of WEE1 or WEE1/ATM downregulated PD-L1 expression by blocking GSK-3β serine 9 phosphorylation and decrease of CMTM6 expression. In Capan-1 mouse xenograft model, AZD1775 plus AZD0156 (ATM inhibitor) treatment reduced tumor growth and downregulated tumor expression of PD-L1, CMTM6, and CXCR2, all of which contribute to tumor immune evasion. Conclusion: Dual blockade of WEE1 and ATM might be a potential therapeutic strategy for PC. Taken together, our results support further clinical development of DDR-targeting strategies for PC.췌장암은 전 세계적으로 가장 치명적인 암중의 하나이지만 현재 효과적인 표적치료제가 없다. 최근 DNA 손상 반응을 이용한 새로운 항암제 개발 연구가 큰 각광을 받고 있다. 췌장암에서 DNA 복구 경로의 변이가 많이 보고되어 있다. 이에 본 연구는 WEE1과 ATM 억제제를 이용하여 췌장암 세포주에서 DNA 손상 반응을 이용한 새로운 치료 전략을 연구하고자 진행되었다. 10개의 췌장암 세포주를 이용한 in vitro 실험을 통하여 AZD1775 (WEE1 억제제)의 단독 또는 AZD0156 (ATM 억제제)와의 병합 요법을 테스트 하였다. 이 결과를 바탕으로 Capan-1 마우스 모델에서 이 두가지 항암제의 항종양효과를 관찰하였다. 실험 결과 AZD1775는 단독 치료는 모든 췌장암 세포주들에서 효과적으로 세포 증식을 억제하고 s-phase의 증가와 세포사멸을 유도하는 등 뛰어난 항암효과를 보였고 반면에 p-ATM의 발현을 증가시켰다. AZD1775와 AZD0156의 병합 요법은 세포 증식과 전이를 억제하고 DNA 손상을 유도하는 방면에서 시너지 효과를 나타냈다. 또한 이런 병합 요법은 p-GSK 3β와 CMTM6의 발현을 감소시킴으로써 PD-L1의 발현을 현저히 감소시키는 것을 확인 하였다. In vivo 모델에서도 병합 요법은 종양의 성장을 억제할 뿐만 아니라 면역 반응에서 중요한 역할을 하는 PD-L1, CMTM6, CXCR2의 발현도 감소시킴을 확인 하였다. 이 연구의 결과는 WEE1와 ATM의 병용 요법의 항종양효과는 췌장암에서의 잠재적인 표적치료제가 될 수 있는 근거를 제시하고 더 나아가 임상에서 DNA 손상 반응을 표적으로 하는 치료제 개발전략에 대한 근거를 제공한다.ABSTRACT -------------------------------------------------i CONTENTS -------------------------------------------------iii LIST OF TABLES------------------------------------------vi LIST OF FIGURES----------------------------------------vii INTRODUCTION-----------------------------------------------1 MATERIALS AND METHODS------------------------------4 1. Human cell lines and reagents ------------------------------------4 2. Cell viability assay ------------------------------------------4 3. Colony formation assay -------------------------------------5 4. Western blot analysis ----------------------------------------5 5. Immunoprecipitation ----------------------------------------6 6. Cell cycle analysis-------------------------------------------6 7. Annexin V/PI apoptosis assay -------------------------------7 8. Comet assay -------------------------------------------------------------7 9. Transwell migration assay---------------------------------------8 10. PD-L1 expression analysis by flow cytometry--------------8 11. Human cytokine array------------------------------------------9 12. Human phospho-kinase array----------------------------------9 13. Tumor xenograft experiments---------------------------------9 14. Mouse cytokine array-------------------------------------------10 15. Statistical analysis-----------------------------------------------10 RESULTS----------------------------------------------------------12 1. WEE1 inhibition inhibits the proliferation of PC cells ----------12 2. WEE1 inhibition induces S-phase arrest and apoptosis in PC cells-------------------13 3. Co-inhibition of WEE1 and ATM profoundly impairs activation of the HR pathway of DNA repair.-------17 4. Co-inhibition of WEE1 and ATM synergistically induces DNA damage.--------------------------------------19 5. Co-inhibition of WEE1 and ATM efficiently suppresses PC cell migration.---------------------------------21 6. Co-inhibition of WEE1 and ATM downregulates PD-L1 expression in PC cells ------------------------------25 7. Co-inhibition of WEE1 and ATM augmented anti-tumor growth in Capan-1-xenograft model----------29 DISCUSSION---------------------------------------------------33 REFERENCES-------------------------------------------------37 ABSTRACT IN KOREAN-----------------------------------41Docto

Alteration of TGF-β-ALK-Smad signaling in hyperoxia-induced bronchopulmonary dysplasia model of newborn rats

학위논문 (박사)-- 서울대학교 대학원 : 의학과 소아과학 전공, 2013. 8. 김한석.Background: Bronchopulmonary dysplasia (BPD) is a main chronic lung disease that commonly occurs in preterm infants. BPD is characterized by impaired alveolarization and vascularization of the developing lung. The transforming growth factor-β (TGF-β) signaling pathway is known to play an important role during lung vascular development. Objective: To investigate whether the regulation of TGF-β-ALK-Smad signaling pathway influences the disruption of pulmonary vascular development in newborn rats using a hyperoxia-induced BPD model. Methods: Neonatal rats were continuously exposed to 21% or 85% O2 for 7 days and subsequently kept in normoxic conditions for another 14 days. Lung tissues were harvested at each time point and were evaluated for the expression of TGF-β1, ALK1, ALK5, phosphorylated Smad1/5, phosphorylated Smad2/3, VEGF and endoglin by both biochemical and immunohistological analyses. Results: Double-fluorescence immunohistochemical staining indicated that these molecules were mainly expressed in pulmonary endothelial cells. The expression of TGF-β1 and ALK5 mRNA and protein were significantly increased in the D5 hyperoxia group, while the expression of ALK1 mRNA and protein was significantly decreased. The level of phosphorylated Smad1/5 was significantly decreased in the D7 hyperoxia group, whereas the expression of phosphorylated Smad2/3 was increased. In addition, the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) mRNA was increased at D1, with a subsequent decrease in the D7 hyperoxia group. There was no significant difference in endoglin expression over the entire experimental period. Conclusion: Our results indicate that exposure to hyperoxia altered the balance between the TGF-β-ALK1-Smad1/5 and TGF-β-ALK5-Smad2/3 signaling pathways in pulmonary endothelial cells, which may ultimately lead to the development of BPD.Abstract………………………………………………………… ⅰ Contents………………………………………………………… ⅲ List of tables and figures………………………………………ⅳ Introduction……………………………………………………… 1 Material and Methods………………………………………… 5 Results………………………………………………………… 13 Discussion………………………………………………………26 References………………………………………………………31 Abstract in Korean…………………………………………… 38Docto

상사와 회사에 대한 신뢰와 불신의 기반요인 : 한국과 중국 기업조직 구성원간의 비교연구

학위논문(석사)--서울대학교 대학원 :심리학과 사회심리학전공,2004.Maste

The Impact of Technology on World Trade

학위논문 (석사)-- 서울대학교 국제대학원 : 국제학과(국제통상전공), 2014. 2. 김종섭.Growing world economy and varying demand resulted in the explosive expansion of exports worldwide. Manufacturing exports, which has become the main driver of exports, has grown enormously. At the same time, the role of developing countries is becoming more important. Also, export sophistication is an inevitable trend which affects overall export patterns. Understanding this circumstance, this thesis identifies the determinants which encourage this change. There are common or country specific factors which affect exports. This thesis, however, focuses on the role of the technology and postulates that a countrys level of technology is the key determinant of exports. Technology, which builds a production capacity (both qualitatively and quantitively), can improve a firm or a nations production competitiveness. Therefore, a countrys level of technology ultimately contributes to the export growth. Hence, this thesis aims to identify the relationship between the level of technology and a country's share of export in the world. Also, adapting Hummels and Klenows methodology, this research decomposes a countrys share on world export as an intensive margin and an extensive margin. Further, it aims to find out the impact of the level of technology on a countrys export share, intensive margin, and extensive margin. Therefore, it diagnoses the main channel (between intensive margin and extensive margin) of delivering the impact of the level of technology on a countrys share of export. R&D expenditure and High-technology exports are represents the level of technology of each country. This research tests eight different models. In general, the impact of technology on total world exports is not as high as the impact of income or labor, but the impact to manufacturing exports is higher than its impact to total exports. Results also demonstrate that, the contribution of the level of technology is delivered through intensive margin mostly. However, only for the analysis on the impact of high-technology exports on developing countries' share of exports, extensive margin plays more crucial role than intensive margin to deliver the effect of technology on the share of exports.CHAPTER Ⅰ. INTRODUCTION 1. Background 2. Research questions CHAPTER Ⅱ. LITERATURE REVIEW 1. Technology improvement and its impact on world exports 2. The implication of Intensive margin and Extensive margin CHAPTER Ⅲ. METHODOLOGY 1. Calculation of Intensive margin and Extensive margin 2. OLS estimations 3. Data collection CHAPTER Ⅳ. EMPIRICAL RESULTS 1. Analysis of intensive and extensive margin 2. The impact of technology on exports CHAPTER Ⅴ. CONCLUSION BIBLIOGRAPHY APPENDIX 국문초록Maste

초․중등학교 학급담임 배정 영향 요인 분석

학위논문 (석사)-- 서울대학교 대학원 : 교육학과(교육행정전공), 2013. 8. 정동욱.학급 담임은 학생들과 가장 오랜 시간 접촉하며 학급 안에서의 교육활동을 스스로 계획하고 실행하며 이를 통해 학교 교육의 효과성을 결정하는 인적자원이다. 그러나 이러한 학급 담임의 중요성에도 불구하고, 오늘날의 학교에서는 담임을 지원하는 교사가 부족하여 학급 담임 배정에 어려움을 겪고 있다. 학급 담임 배정은 주로 학교장에 의해 수행되는데, 교사는 인적자원으로서 금전적․물질적 자원들과는 달리 근무 여건에 대한 선호를 바탕으로 이러한 배정 절차에 영향을 미쳐 원하는 근무 여건 하에서 일하고자 하는 특성을 지닌다. 이에 본 연구는 교내 교사 자원 배분의 측면에서 학교급별로 학급 담임의 배정에 영향을 미치는 요인을 알아보고자 하였다. 연구를 위해 학교 교육 수준 및 실태 분석 연구의 2주기 데이터를 분석 대상으로 선정하였고, 최종적으로 196개 초등학교와 6,206명의 초등학교 교사, 177개 중학교와 5,111명의 중학교 교사, 150개의 고등학교와 5,931명의 고등학교 교사를 분석에 이용하였다. 분석을 위한 변수들로 교사의 성별, 교직 경력, 현임교 재직경력, 기간제 교사 여부, 담임 배정시의 의사반영 여부, 교사 능력, 교사의 학력 그리고 학교의 규모, 학업성취도, 평균 교사 경력, 여교사비율, 학교 SES, 사립학교 여부, 지역을 사용하였다. 이러한 데이터와 변수를 토대로 로지스틱 회귀분석을 통하여 학급 담임 배정에 영향을 미치는 요인을 알아보았으며, 다항로지스틱 회귀분석 방법으로 학년별 학급 담임 배정의 영향 요인을 알아보았다. 본 연구에서 설정한 연구문제와 결과는 다음과 같다. 첫째, 학급 담임 배정에 영향을 미치는 교사 특성 요인은 무엇인가? 분석 결과, 초등학교 고학년과 중학교․고등학교의 전 학년에 걸쳐, 교직경력이 낮은 교사들이 학급 담임 교사로 배정되어 있으며 특히 중학교의 경우 현임교 재직경력 역시 낮은 교사들이 학급 담임으로 배정되어 있다. 그리고 이들은 공통적으로 학급 담임 배정에 교사의 의견이 반영되지 않았다고 인식하고 있다. 이는 저경력 교사와 남교사가 교내 교사배정에서 상대적으로 약한 입지를 지니고 있다는 점을 반영한다. 둘째, 학년별 학급 담임 특성에는 차이가 있는가? 분석 결과, 전체 교사 가운데 대다수가 학급 담임을 맡고 있는 초등학교의 경우 학년별 학급 담임 특성의 차이가 두드러지게 나타났다. 특히, 초등학교 5, 6학년의 경우 저경력 교사와 남교사가 학급 담임으로 배정될 확률이 높은 것으로 나타났다. 중학교․고등학교의 경우 학년별 학급 담임의 특성에 큰 차이는 나타나지 않고 담임과 비담임의 특성 차이가 두드러졌다. 학교급에 따라 학년별 학급 담임 배정의 결과가 차이가 나는 까닭은 초등학교와는 달리 중등학교는 비담임 교사가 상대적으로 많이 존재하여 교사들에게 담임 여부가 선택 가능한 것으로 인식되기 때문이다. 셋째, 학급 담임 배정에 영향을 미치는 교사 특성 이외의 요인은 무엇인가? 분석 결과, 여교사비율과 재직교사 평균 경력이 높은 학교에서는 교사가 학급 담임을 맡을 확률이 더 높은 것으로 나타났으며, 이는 여교사와 고경력 교사가 교내 교사배정에서 상대적으로 강한 입지를 차지하고 있다는 점과 일맥상통한다. 한편 초등학교의 경우 사립학교에서 교사들이 학급담임을 더 맡는 것으로 나타났는데 이는 전체 초등학교 중 사립학교가 1%에 불과하다는 측면에서 공립학교 학생들과 사립학교 학생들의 특성에 차이가 있을 수 있다는 점을 반영한다. 그러나 그 외의 학교 수준의 변수는 학교 내 교사 배정의 양상에 차이를 일으키지는 않고 있는 것으로 나타났다. 분석 결과를 통하여 다음과 같은 논의가 전개되었다. 교사들은 교직 경력․소속학교 근무 경력을 기반으로 한 연공서열에 따라 학교 조직 내에서 입지를 구축하고 있으며, 신규 교사나 저경력 교사, 전입교사 등은 이러한 연공서열 체계 하에서 상대적으로 약한 입지를 차지하고 있다. 학급담임 업무는 비담임에 비하여 담임 교사들의 직무 부담을 증가시키고, 가중되는 생활지도의 어려움은 학급 담임 교사의 낙담과 사기저하를 초래할 수 있다. 이러한 현실 속에서 저경력 교사 위주의 학급 담임 배정 실태는 오늘날 학교 현장에 만연한 담임 기피 현상을 반영한다. 저경력 교사 위주의 학급 담임 배정은 적재적소의 원칙과 어긋나 학교 교육의 효율성을 저해할 수 있으며 의사결정 과정에서 교사들의 의사를 충분히 반영하지 못해 자원배분 과정의 형평성 문제가 제기될 수 있다. 또한 저경력 교사들은 고경력 교사에 비하여 학생 지도 노하우가 부족하므로 궁극적으로 학생들 사이의 배움의 기회 측면에서 불평등을 초래할 수 있다. 따라서 담임교사에 대한 추가적인 행․재정적 지원 제공, 경력별로 교사들이 균형 있게 학급 담임에 배정될 수 있도록 명확한 배치 기준 마련, 교사들의 의견을 충분히 수렴하는 민주적인 과정을 통한 학급 담임 배정을 정책적 시사점으로 제안하였다.Ⅰ. 서론 1 1. 연구의 필요성 및 목적 1 2. 연구 문제 4 3. 연구의 의의 5 4. 연구의 제한점 6 Ⅱ. 이론적 배경 8 1. 학급 담임교사 배정의 의의 8 2. 학급 담임제 9 3. 학급 담임 배정의 기본 원리 12 4. 학급 담임 선정 방법의 유형 13 5. 학급 담임교사의 역할 15 6. 학급 담임교사 배정에 대한 선행연구 25 Ⅲ. 연구 방법 33 1. 분석자료 33 2. 변수 선정 34 3. 연구모형 및 연구방법 42 Ⅳ. 결과 47 1. 학교급별 MOR(Median Odds Ratio) 도출 결과 47 2. 초등학교의 학급 담임 배정 영향 요인 48 3. 중학교의 학급 담임 배정 영향 요인 58 4. 고등학교의 학급 담임 배정 영향 요인 64 Ⅴ. 논의 71 1. 학교급별 학급 담임 배정 영향 요인 비교 71 2. 담임교사의 근무여건과 담임기피 현상 73 3. 학급 담임 배정 실태의 원인 분석 75 4. 저경력 교사 위주의 학급 담임 배정의 문제점 77 5. 학교 간 학급 담임 배정 차이 78 Ⅵ. 결론 81 참 고 문 헌 85 Abstract 95Maste

치매 치료제 donepezil이 랫트의 뇌로 투과되는 기전과 약물 수송체와의 연관성에 관한 연구

Thesis(doctors) --서울대학교 대학원 :제약학과(약제과학전공),2009.8.Docto

siRNA에 의한 Caco-2 cell 단층막에 발현되어 있는 MDR1의 functional silencing

학위논문(석사)--서울대학교 대학원 :제약학과 약제과학전공,2004.Maste

Resistance mechanism to Trastuzumab in HER2-positive cancer cells and its overcome by Src inhibition

학위논문 (석사)-- 서울대학교 대학원 : 의학과 내과학전공, 2016. 8. 방영주.Background: Trastuzumab in combination with chemotherapy is a standard of care for patients with HER2-positive breast and gastric cancer. Resistance mechanism to trastuzumab, anti-HER2 therapy, includes multiple pathways. Among them, Src is not well known especially in HER2-positive gastric and biliary tract cancers. We investigated the role of Src involved in trastuzumab resistance and explored the potential of Src inhibition as a trastuzumab resistance overcoming strategy. Methods: Four trastuzumab-resistant (HR) cells (SNU216HR, N87HR, SNU2670HR, SNU2773HR) were established from 2 HER2-amplified gastric cancer cells (SNU216, NCI-N87) and 2 HER2-amplified biliary tract cancer cells (SNU2670, SNU2773). For Src inhibition, bosutinib was used. MTT assay, colony formation assay, cell cycle analysis by FACS Calibur flow cytometer, and cell migration assay were done. Animal experiments were conducted to test anti-tumor effect of bosutinib using SNU2670 and SNU2670HR xenograft models. Results: SNU2670HR/NCI-N87HR cells showed pSrc activation, in contrast, SNU216HR/SNU2773HR cells exhibited decreased pSrc expression. In these pSrc decreased HR cells, pFAK was elevated. Bosutinib downregulated Src-FAK signaling more obviously in Src activated HR cells than parental cells. In pSrc decreased HR cells, bosutinib reduced Src-dependent FAK phosphorylation to affect cell fate. Bosutinib inhibited the growth of both parental cells and HR cells, and induced apoptosis and G1 arrest in HR cells. Bosutinib suppressed HR cell migration more effectively compared with parental cells. Bosutinib exhibited potent tumor growth inhibition in both SNU2670 and SNU2670HR xenograft models and more significantly suppressed tumor growth in HR models. Conclusion: Src activation may contribute to trastuzumab resistance in part in HER2-positive gastric and biliary tract cancer cells. Targeting Src might be a candidate strategy to overcome trastuzumab resistance in HER2-positive cancers.INTRODUCTION 1 MATERIALS AND METHODS 4 1. Cell lines and reagents 4 2. Generation of trastuzumab resistant cell lines 4 3. Cell growth inhibition assay 4 4. Colony formation assay 5 5. Western blot 5 6. Cell cycle analysis 5 7. Migration assay 5 8. In vivo study 6 RESULTS 7 1. Characterization of trastuzumab resistant (HR) cell lines 7 2. Bosutinib inhibits the growth of both parental and HR cells 9 3. Src contributes to trastuzumab resistance and Src inhibitor downregulates the signaling pathway 13 4. Bosutinib induces G1 arrest and apoptosis 15 5. Bosutinib inhibits HR cell migration more effectively compared with parental cells 18 6. In vitro effects of combination of trastuzumab and bosutinib 21 7. Bosutinib overcomes trastuzumab resistance in vivo 27 DISCUSSION 30 REFERENCES 33 ABSTRACT IN KOREAN 38Maste

Analysis of factors influencing on readmission of home ventilator-assisted children

아동간호전공/석사의료기술의 발달로 가정용 인공호흡기를 장착하는 아동의 수가 점차 증가하나, 질환의 진행, 갑작스런 응급상황의 발생 등으로 재입원 또한 증가하고 있다. 본 연구는 후향적 조사연구로 가정용 인공호흡기 장착 아동의 인공호흡기를 장착 후 1년간 재입원에 대한 재입원의 영향요인을 분석하는데 그 목적이 있다. 연구대상은 서울 소재 S 대학교 어린이 병원에서 2007년 6월 1일부터 2010년 5월 31일 기간에 가정용 인공호흡기를 장착 후 퇴원한 아동 30명을 대상으로 하였다. 연구 결과, 연구 대상자 30명 중 21명에게서 재입원 63사례가 있었다. 인공호흡기 장착 후 1년 동안 총재입원 횟수는 평균 2.1회, 총재입원일은 평균 7.43일 이었다. 비위관을 보유하고 있는 경우 총재입원 횟수가 유의하게 많았고(t=7.232, p=.012), 총재입원기간이 유의하게 길었다(t=4.761, p=.038). 심호흡계 동반질환이 있는 경우 총재입원 횟수가 유의하게 많았다(t=5.444, p=.027). 예정되지 않은 재입원 시 총재입원 기간이 유의하게 길었다(t=6.745, p=.007). 재입원 경로가 응급실로 오는 경우 총재입원횟수(t=6.466, p=.000)와 총재입원 기간(t=14.686, p=.000)에 영향을 주었다. 재입원 연령이 2세 미만일 때 총재입원 횟수에 유의한 차이를 보였다(t=7.414, p=.008). 이중 총재입원 횟수의 영향요인으로 심호흡계 동반질환과 입원 경로가 38.1%를 설명하였고, 총재입원기간의 영향요인으로는 영양방법이 15.0%를 설명하였다. 이상의 연구결과에 기반 두어 볼 때, 심호흡기계 동반 질환, 비위관 영양을 하는 경우와 같이 재입원 가능성이 높은 그룹에서는 좀 더 체계적이고 개별적인 교육이 필요하며, 간호제공자에 대한 적극적인 응급상황에 대처교육으로 예정되지 않은, 응급실로 경유한 재입원의 감소를 기대해볼 수 있다.restrictio

A study on the Effectiveness of Urban air temperature Through Citizen Participation

At the point of implementing policies related to urban heat through the overall environmental assess- ment of the city using national data, citizen science projects that can collect data in a wide range are emerging for effective policy establishment. Although the utility of citizen data is improving, data qual- ity is a primary concern for researchers employing public participation in scientific research. In this study, validation was conducted based on citizen data acquired in the Suwon City Heat Map Project, and the applicability to temperature monitoring was confirmed based on the results. As a result of ana- lyzing the validity verification of citizen data using three methods, the data result value is 0.843, RMSE: 0.683 ℃ , and a meaningful value was found within 3km of national data. We found that citizen data utilization is high through the results of this study and These projects are expected to be used as basic data for establishing effective policies or can be reflected in the various planning.N