Exonuclease Ⅲ-mediated DNA Molecular Cloning

DNA克隆技术,作为最基本的现代分子生物学实验技术之一,已经成为生物医学研究领域的重要研究手段。传统的分子克隆方法需要经过限制性内切酶酶切和DNA连接酶连接的步骤,是否存在合适的酶切位点和DNA连接酶的效率成为影响克隆的重要限制因素。本文描述了一种由外切核酸酶Ⅲ介导的,以3'-5'外切核酸酶活性和细菌细胞内DNA修复机制为理论基础的DNA分子克隆方法,称为不依赖连接酶的分子克隆(ligation-independent cloning,LIC);证明了该方法的高效性和可靠性,并进一步对酶的用量、反应温度、反应时间、片段载体比例和量等多个参数进行了优化,建立了一种快速、简便和高效的DNA克隆方法。As a basic technique of modern molecular biology,molecular cloning has become an important tool for biomedical research. The traditional method for molecular cloning usually includes two key processes: restriction digestion and ligation. The success of a traditional cloning depends on suitable restriction sites and high ligation efficiency to a great degree. In the present study,we have developed a DNA cloning method mediated by exonuclease Ⅲ. Because this method is based on the 3' to 5' exonuclease activity of exonuclease Ⅲ and the intrinsic DNA repair machinery of bacteria,and is independent of DNA ligase,we designated it as ligation-independent cloning( LIC). We optimized the reaction parameters including the quantity of enzyme for each reaction,reaction time,reaction temperature and the ratio of vector to fragment,and found that this method showed high efficiency and reliability under optimal condition. We have thus established a rapid,simple and efficient DNA cloning method.国家自然科学基金项目(No.81402285)资助~

城市商业银行资本金补充分析

按照《商业银行资本充足率管理办法》规定,商业银行资本充足率最后达标期限为2007年1月1日。城市商业银行由于各种原因,面临的处境比其他的商业银行艰难得多。本文分析了城市商业银行资本金补充的重要性,并就各种补充渠道做了简要的分析

区块链与数字版权反思:困境与重述

2018年4月25日,著名音乐填词人方文山通过新浪微博发表声明,澄清其与区块链音乐版权保护项目的合作进度,从而不经意间将区块链在版权保护方面的应用前景推到世人眼前:在工信部工业经济研究所所长于佳宁看来,区块链是版权保护天然需要的技术;IDG技术创业投资基金董事长熊晓鸽同样表示,区块链技术是版权保护最好用的"武器"。~①商业

要素视角下的微博舆论引导方法研究

本文基于微博舆论的多元主体、复杂客体和分散本体,分析和探讨微博舆论的形成和引导方法。提出制定舆论引导方案前,需结合微博舆论本体的监测结果及舆论客体的事件特征来判断舆情走向,舆论引导中的重要策略是与舆论主体的沟通,尤其是意见领袖和媒体用户的意见和看法,对微博上的公众能够产生重要影响。一次成功的舆论引导必然是综合考虑多方因素,使舆论的诸多要素共同发挥作用

学者“框架”反思:整合传播过程与效果的理论

对于新闻传播学现有的过程及效果理论来说,李普曼于1922年在《公众舆论》一书中提出的"刻板印象"概念及其相关研究成果至关重要。它们一方面作为信息选择的关键因素解释了大部分的新闻生产机制,另一方面也以"导向选择"的方式提示或曰限定新闻传播学者对传播过程与效果理论的生产——这一脉理论几乎都关涉"选择"。在新媒体时代,从主观与客观、现实与新闻建构、信息搜集与扩散、宏观与微观、集体与个人等五个方面理清传播过程及效果理论的内在逻辑关系,有助于整合相关理论

博弈论视野下的股权分置改革

股权分置改革的本质是非流通股东与流通股东之间关于非流通股流通权的讨价还价博弈,博弈主体是非流通股东与流通股东,而不是上市公司、历史流通股东等。对价博弈中,非流通股东拥有先动优势和耐心优势,不利于保护流通股东的权益;而“未完成股改,暂停再融资和股权激励改革”等措施,有利于纠正耐心优势;从先动优势看,应赋予流通股东以股改提案权。股权分置改革首先应保证程序理性;当前试点公司的股改结果并未真正进入全流通,对于试点之后进入股改的公司没有学习价值;应逐步试行全流通。在对价形式上,应简单合理,要有利于投资者进行价值判断;应摒弃复杂性和不确定性较大的权证方案

American Faculty Development in the Age of Networker: Multiple Interpretations and Practical Strategies

美国高校教师专业发展培训经历了从无到有的阶段,如今已经进入了“协统时代“。这个时代有着不同以往的鲜明特色,对高校教师培训工作提出了全新的挑战。“协统时代“的美国高校教师培训工作需要致力于满足教师职业的多种角色定位、应对学生群体的新变化,并适应高等教育教学、学习与学术的新范式。“协统时代“的培训工作在实践层面主要采取三种策略:扩大培训范围、丰富培训项目和加强项目评估。在这个时代,美国的高校教师培训工作已从早期“被边缘化“的状态一跃成为大学保持创造力的动力来源。After the development of more than fifty years,the faculty development practice in American universities and colleges has stepped into the Age of Networker.The new age has some distinctive features and challenging requirements.The faculty developers need to help balance the multiple roles required by the meta-profession,to help meet the needs of increasingly diversified college students groups,and to adapt to the new paradigm of teaching,learning and scholarship.In practice,three key strategies are undertaken,which are to enlarge the scope of trainees,to enrich the development programs and to implement program evaluations.全国教育科学“十二五”规划2011年度国家重点课题(AFA110008)研究成果之一; 中国博士后科学基金第51批资助项目(2012M511443)研究成果之

美国高校教师专业发展培训中心的发端、历程及模式

美国高校教师专业发展培训中心经过半个世纪之久的发展,已经形成较为成熟和完整的体系,对中国方兴未艾的高校教师培训工作具有极大借鉴价值。文章首先从历史的角度分析了美国高校教师专业发展培训中心兴起的原因,继而介绍了教师培训中心在美国的发展历程,并着重分析了目前所处的阶段,最后探讨了目前美国高校教师专业发展培训中心的四种组织模式。教育部哲学社会科学研究重大攻关项目“人才强校战略的理论与实践研究”(编号:09JZD0036-1

Direct Transformation of Amides: Reductive Cycloaddition of Secondary Amides with Danishefsky Diene

酰胺作为稳定的合成中间体被广泛应用于有机合成和药物化学.因此,发展通用、化学选择性的酰胺直接转化的方法十分重要.在本工作中,我们报道仲酰胺与丹尼谢夫斯基双烯的还原环加成反应,用于把仲酰胺直接转化为2-取代-2,3-二氢-4-吡啶酮.该“一瓶反应“包含酰胺通过三氟甲磺酸酐活化、部分还原、和[4+2]环加成反应3个环节.基于这一步骤经济型方法,建立了生物碱(±)-lASubInE I和(±)-MyrTInE的简便、无保护基全合成.Amides are widely used as stable synthetic intermediates in organic synthesis and medicinal chemistry.Versatile and chemoselective C—C bond forming methods for the direct transformation of amides are highly demanding.In this paper, we report the reductive cycloaddition of common secondary amides with the Danishefsky diene to produce 2-substituted 2,3-dihydro-4-pyridones.This one-pot procedure involves amide activation with triflic anhydride, partial reduction, and [4+2] cycloaddition.The synthetic utility of this step-econimical method was demonstrated by the short and protecting-group-free total syntheses of alkaloids(±)-lasubine I and(±)-myrtine.国家自然科学基金(No.21332007); 国家基础科学人才培养基金(No.J1310024); 中央高校基本科研业务费专项资金(No.20720150048); 教育部长江学者和创新团队发展计划的资助~