1,3-取代吲唑类低氧诱导因子l抑制剂的设计合成及其抗肝癌活性

低氧诱导因子l（HIF-1）与肿瘤细胞的生长、侵袭和耐药密切相关,在肿瘤细胞内HIF-1高度表达,因此新型的HIF-1抑制剂可作为潜在的抗肿瘤药物。本文合成了9个1,3-取代吲唑衍生物。通过蛋白质印迹（Western Blot）法及实时定量荧光PCR（Real time-PCR）等方法检测了其对HIF-1及其靶基因血管内皮生长因子（VEGF）表达水平的影响,并以3-（5’-羟甲基-2’-呋喃基）-1-苯甲基吲唑（YC-1）为阳性对照药物初步评价了其体外抗肝癌细胞增殖的生物活性。实验发现化合物7b可显著抑制HIF-1及其下游靶基因VEGF的表达,且体外抗肝癌增殖生物活性优于YC-1,半抑制浓度(IC50)值为10.37μmol/L。研究结果表明,3-（5’-羟甲基-2’-呋喃）-1-（1″-对甲苯磺酰基）吲唑具有靶向抑制HIF及良好的抗肝癌活性作用。福建省科技厅项目(2015Y0081,2015J01350);;厦门大学大学生创新创业训练计划项目(2016X0644,20720152005)~

效应物对牛肠激酶活性的影响

肠激酶(EK,EC3.4.21.9)是一种在基因工程产品中广泛应用的工具酶.以小分子荧光物质甘氨酰-天冬氨酰-天冬氨酰-天冬氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-β-萘胺(Gly-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-β-naphthylamide,GD4K-β-naphthylamide)为底物,采用荧光跟踪法研究了不同氨基酸、几种常用有机溶剂、EDTA、DTT等对牛肠激酶(BEK)活力的影响.结果表明:L-赖氨酸(L-Lys)、丙酮、EDTA、DTT对该酶的活性有较强的抑制作用,IC50分别约为25,50,50和120mmol/L.进一步研究了L-Lys与丙酮对BEK活力的抑制机理以及抑制类型,结果表明:L-Lys对该酶的抑制机理为可逆抑制,其抑制类型为竞争型抑制类型,其抑制常数KI为12.02mmol/L.丙酮对BEK的抑制类型表现为不可逆抑制

Selectivity of biopolymer membranes using HepG2 cells

Bioartificial liver (BAL) system has emerged as an alternative treatment to bridge acute liver failure to either liver transplantation or liver regeneration. One of the main reasons that the efficacy of the current BAL systems was not convincing in clinical trials is attributed to the lack of friendly interface between the membrane and the hepatocytes in liver bioreactor, the core unit of BAL system. Here, we systematically compared the biological responses of hepatosarcoma HepG2 cells seeded on eight, commercially available biocompatible membranes made of acetyl cellulose&ndash;nitrocellulose mixed cellulose (CA&ndash;NC), acetyl cellulose (CA), nylon (JN), polypropylene (PP), nitrocellulose (NC), polyvinylidene fluoride (PVDF), polycarbonate (PC) and polytetrafluoroethylene (PTFE). Physicochemical analysis and mechanical tests indicated that CA, JN and PP membranes yield high adhesivity and reasonable compressive and/or tensile features with friendly surface topography for cell seeding. Cells prefer to adhere on CA, JN, PP or PTFE membranes with high proliferation rate in spheriod-like shape. Actin, albumin and cytokeratin 18 expressions are favorable for cells on CA or PP membrane, whereas protein filtration is consistent among all the eight membranes. These results further the understandings of cell growth, morphology and spreading, as well as protein filtration on distinct membranes in designing a liver bioreactor.</p

Studies on metabolic profiling of terpenoid and artemisinin biosynthesis in Artemisia annua L. Studies on metabolic profiling of terpenoid and artemisinin biosynthesis in Artemisia annua L.

青蒿素是从中药青蒿，学名黄花蒿（Artemisia annua L.）植物地上部分分离出的抗疟疾有效单体，为一种倍半萜内酯类化合物，其生物合成途径属于植物类异戊二烯代谢途径。青蒿素生物合成途径及其调控机制仍不完全清楚，本论文采用GC-MS 和GC×GC-TOFMS 方法对青蒿萜类代谢物谱进行检测，用多维统计学方法对检测结果进行整理和比较分析，研究青蒿素生物合成及其与青蒿中其他萜类代谢的关系，取得了以下结果： 一、通过GC×GC-TOFMS 方法对青蒿挥发油成分进行分析，共鉴定出303 种组分。其中挥发油中相对百分含量大于1%的10 种组分中有9 种为萜类化合物，含量接近总挥发油的50%。在相对百分含量大于0.1%的49 种成分中，有30 种萜类化合物。有27 种相对百分含量大于0.1%的成分首次在青蒿挥发油中报道，其中包括10 种萜类化合物。 二、利用GC-MS 方法分析了青蒿001 和SP18 两个青蒿素高产株系不同生长时期萜类代谢物谱，结果表明：青蒿中萜类化合物在不同时期合成和积累是动态变化的，萜类化合物的种类和数量在营养生长期随生长时间的延长而提高，在营养生长后期和现蕾前期达到最高水平，进入生殖生长后随生长时间的延长而迅速降低。通过多维统计PLS-DA（Partial Leasted Square Discriminant Analysis） 分析，确定001 中有17 个化合物的含量在不同生长时期有明显变化，其中15 个为萜类化合物。SP18 中有18 个化合物的含量在不同生长时期有明显变化，其中16 个为萜类化合物。青蒿素，青蒿酸，二氢青蒿酸，青蒿素B 都是含量变化明显的标记物。其中青蒿酸和二氢青蒿酸含量在营养生长后期达到最高水平，进入生殖生长后迅速下降，而青蒿素和青蒿素B 在整个检测时期含量变化相对较小，在营养生长时期含量已经较高，在现蕾前期含量稍有上升，进入现蕾期后有所下降，本研究确定现蕾前期为代谢物谱分析最佳取样时期，并为药材采收提供指导。 三、不同基因型青蒿代谢物谱研究表明，青蒿素高产株系SP18 和001 代谢物表现出一定的差异，通过多维统计PLS-DA 分析，共找出了22 种在两种基因型中差异明显的化合物，其中包括倍半萜化合物12 种，单萜化合物3 种，三萜化合物4 种。SP18 特征化合物为樟脑和两个未鉴定倍半萜化合物，而001 特征化合物是龙脑和β-法呢烯。另外两种基因型中青蒿素及相关前体化合物的积累模式差异明显，SP18 中二氢青蒿酸和青蒿素含量高，而青蒿酸和青蒿素B 含量极低；001 中二氢青蒿酸和青蒿素含量相对SP18 要低，但青蒿素B 和青蒿酸含量比SP18 要高。该结果表明在青蒿素高产株系中，青蒿素含量与二氢青蒿酸的含量呈正相关，结合Brown 等的活体标记研究结果分析，从二氢青蒿酸到青蒿素的转化可能是青蒿素合成的限速步骤。 四、利用GC×GC-TOFMS 方法对转基因青蒿萜类代谢物谱进行了分析，共对200 个左右化合物峰进行PLS-DA 和OSC-PLS (Orthogonal Signal Correction–Partial leasted Square)多维统计分析，结果表明：青蒿萜类代谢物谱在外源基因转入后发生显著变化，与对照株系相比均呈现显著差异。其中过量表达Amorpha-4,11-diene 合酶基因（ads）株系中青蒿素及相关化合物变化最明显，而过量表达FPP 合酶基因（fps）株系中青蒿素及相关化合物变化相对较小，在受到调控而成为差异标记物的化合物中，70%是倍半萜类化合物。 五、考察了外源茉莉酸甲酯对青蒿素生物合成的影响，结果表明：300 μM 外源茉莉酸甲酯能提高青蒿素含量，在处理后第8 天青蒿素含量提高38%。青蒿萜类代谢物谱研究表明，茉莉酸甲酯不仅可以诱导青蒿中青蒿素的合成，还能诱导很多化合物，特别是倍半萜和三萜类的合成。OSC-PLS 分析结果找出了9 个处理后含量明显提高的标记物，其中6 个倍半萜化合物，3 个三萜化合物。标记物鲨烯含量提高了67%，另一个未鉴定出结构的倍半萜提高了60%，这些化合物可能与青蒿素有着类似的调控机制，而外源喷洒茉莉酸甲酯可以作为提高青蒿素产量的有效途径之一

Ｉｍｐａｃｔ ｏｆ Ｓｏｉｌ ａｎｄ Ｗａｔｅｒ Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ

&nbsp;针对水土保持工程实施后农业资源&mdash;产业系统的变化情况,运用耦合度模型,对安塞县水土保持系统和农业资源&mdash;产业系统及其子系统耦合演变过程进行了分析。结果表明:水土保持和农业资源&mdash;产业耦合系统演变过程可划分为4个阶段:Ⅰ.水土保持与农业资源&mdash;产业系统协调化发展阶段;Ⅱ.水土保持与农业资源&mdash;产业系统耗损发展阶段;Ⅲ.水土保持系统退化限制农业发展阶段;Ⅳ.水土保持系统退化农业系统掠夺式发展阶段。安塞县先后经历了Ⅰ,Ⅱ阶段,目前处于第Ⅱ阶段。由于农业系统内部资源、产业协调耦合效率不高,导致农业系统发展潜伏着较大危机,为此,需要在巩固水土保持成果的前提下,通过农户行为优化和政府政策科学导向调整资源、产业结构,避免资源的结构性剩余,形成农业系统内部良性耦合。 更多还原Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ－ｉｎｄｕｓｔｒｙ　ｃｏｕｐｌｉｎｇ　ｓｙｓｔｅｍ　ａｆｔｅｒ　ｔａｋｉｎｇ　ｓｏｉｌ　ａｎｄ　ｗａｔｅｒ　ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ（ＳＷＣ）ｍｅａｓｕｒｅｓ，ｔｈｅ　ｃｏｕｐｌｉｎｇ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　ｔｈｅｍ　ｉｎ　Ａｎｓａｉ　Ｃｏｕｎｔｙ　ｗａｓ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ　ｔｈｅ　ｃｏｕｐｌｉｎｇ　ｄｅｇｒｅｅ　ｍｏｄｅｌ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｃｏｕｐｌｉｎｇ　ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　４ｓｔａｇｅｓ　ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｈａｒｍｏｎｉｏｕｓ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｗｏｒｎ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｄａｍａｇｅｄ　ｓｏｉｌ　ａｎｄ　ｗａｔｅｒ　ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ａｃｈｉｅｖｅｍｅｎｔｓ　ｌｉｍｉｔ　ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌｓｙｓｔｅｍ，ａｎｄ　ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　ｓｙｓｔｅｍ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｓｕｓｔａｉｎａｂｌｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃａｓｅ　ｏｆ　ｄａｍａｇｅｄ　ｓｏｉｌ　ａｎｄ　ｗａｔｅｒ　ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ａｃｈｉｅｖｅｍｅｎｔｓ．Ｔｈｅ　ｃｏｕｐｌｉｎｇ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　Ａｎｓａｉ　Ｃｏｕｎｔｙ　ｈａｄ　ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅｄ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ｔｗｏ　ｓｔａｇｅｓ．Ａｔ　ｐｒｅｓｅｎｔ，ｔｈｅｌｏｗ　ｃｏｏｒｄｉｎａｔｉｏｎ　ｄｅｇｒｅｅ　ｏｆ　ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　ａｎｄ　ｉｎｄｕｓｔｒｙ　ｓｙｓｔｅｍ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　ｓｙｓｔｅｍ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｌｕｒｋｅｄ　ｉｎ　ａ　ｌａｒｇｅｒ　ｃｒｉｓｉｓ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｉｔ　ｉｓ　ｎｅｃｅｓｓａｒｙ　ｔｏ　ｃｏｎｓｏｌｉｄａｔｅ　ｔｈｅ　ａｃｈｉｅｖｅｍｅｎｔｓ　ｏｆ　ＳＷＣ　ａｎｄ　ｒｅａｄｊｕｓｔ　ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　ａｎｄ　ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆａｒｍｅｒ　ｂｅｈａｖｉｏｒ　ａｎｄ　ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　ｐｏｌｉｔｉｃａｌ　ｇｕｉｄｉｎｇ　ｏｆｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ　ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ａｖｏｉｄ　ｒｅｓｏｕｒｃｅ　ｓｕｒｐｌｕｓｅｓ　ａｎｄ　ｆｉｎａｌｌｙ　ｆｏｒｍ　ａ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｕｐｌｉｎｇ　ｓｙｓｔｅｍ

Inhibition Effect of Protocatechuik Acid on Tyrosinase Acitivity and Melanin Content in Mouse Melanoma B16 Cell

酪氨酸酶是生物体内黑色素合成的关键酶,其抑制剂有着广泛的应用前景.从天然药物的有效成分中筛选安全的酶抑制剂具有重要意义.以小鼠黑色素瘤b16细胞为模型,研究了天然药物有效成分原儿茶酸对黑色素生成和酪氨酸酶活力的影响.实验结果显示:原儿茶酸可显著降低细胞的黑色素含量,浓度为10μMOl/l时使黑色素含量降低60%.进一步研究发现,原儿茶酸对小鼠黑色素瘤b16细胞粗提取和共培养体系中的酪氨酸酶均有较强的抑制作用.对粗提酪氨酸酶的活力半抑制浓度(IC50)约为160μMOl/l,与共培养体系中酪氨酸酶活力的抑制、抑制剂浓度和作用时间有关,10μMOl/l作用54H可使酪氨酸酶活力下降88%.本研究为原儿茶酸作为酪氨酸酶抑制剂的开发应用奠定了基础.Tyrosinase(EC 1.14.18.1)plays an important role in melanogenesis,thus tyrosinase inhibitors have multiple potential applications.Screening safe inhibitors from natural herbal medicines is of important significances.In this study,the inhibitory effect of protocatechuik acid,an activite ingredient of Chinese traditional Medicinces,on melanin content and tyrosinase activity from mouse melanoma cell(B16cell)were studied.The results showed that protocatechuik acid can decrease 60% of melanin content in mouse B16cell.Further research demonstrated that protocatechuik acid has significant inhibitory effect on crude tyrosinase from both mouse B16cell and co-culture system.It can significantly decrease tyrosinase activity.The IC50of protocatechuik acid on crude tyrosinase is about 160μmol/L.The inhibition effects were related with time of duration and concentration.The inhibition rate was about 88%after treated with 10μmol/L protocatechuik acid for 54h.The study provided a fundamental framework for the research and application of protocatechuik acid as tyrosinase inhibitor.国家自然科学基金项目(31071611); 福建省科技计划项目(2010N5013