基于多色探针熔解曲线分析技术的华法林个体化用药相关基因多态性快速检测方法

华法林是一种广泛使用的抗凝剂，其治疗窗口较窄，患者间达到抗凝所需剂量的变异性大。已有研究表明CYP2C9*3 (rs1057910)、CYP2C9 IVS3-65G>C (rs9332127)、VKORC1 c.-1639G>A (rs9923231)和CYP4F2*3 (rs2108622)的单核苷酸多态性（SNP）是影响中国人群华法林敏感性的主要遗传因素。该研究利用多色探针熔解曲线（MMCA）技术，建立可同时检测4个华法林敏感性基因多态性的单管PCR反应体系，可在2.5 h内完成检测，能检测低至50 pg/反应的人基因组DNA。对218份厦门地区随机人群各SNP进行筛查结果及部分样本测序结果表明，MMCA体系有极高的准确性，厦门地区各SNP的发生频率与此前报道的中国汉族人群相近，其中rs1057910的等位基因A和C的频率分别为96.3%和3.7%；rs9332127的等位基因G和C的频率分别为96.3%和3.7%；rs9923231的等位基因G和A的频率分别为92.2%和7.8%；rs2108622等位基因G和A的频率分别为75.7%和24.3%。基于MMCA技术的SNP分型体系具有快速、简便、准确、低成本等优点，适合在临床实验室推广使用。厦门市科技计划项目（3502Z20179044）;;\n福建省高校杰出青年科研人才培育计划项

基于多色探针熔解曲线分析技术的华法林个体化用药相关基因多态性快速检测方法

华法林是一种广泛使用的抗凝剂,其治疗窗口较窄,患者达到抗凝所需剂量的变异性大.已有研究表明CYP2C9*3 (rs1057910)、CYP2C9IVS3-65G>C(rs9332127)、VKORC1 c.-1639G>A (rs9923231)和CYP4F2*3 (rs2108622)的单核苷酸多态性(SNPs)是影响中国人群华法林敏感性的主要遗传因素.该研究利用多色探针熔解曲线分析(MMCA)技术,建立可同时检测4个华法林敏感性基因多态性位点的单管PCR反应体系,可在2.5h内完成检测,每个反应能检测低至0.05ng的人基因组DNA.对218份厦门市随机人群的4类SNPs进行筛查及其中40份样本测序的结果表明,MMCA体系准确性高,厦门市人群的4类SNPs发生频率与此前报道的中国汉族人群的相近,其中rs1057910的等位基因A和C的频率分别为96.4%和3.6%,rs9332127的等位基因G和C的频率分别为96.4%和3.6%,rs9923231的等位基因G和A的频率分别为7.8%和92.2%,rs2108622的等位基因G和A的频率分别为75.7%和24.3%.上述基于MMCA技术的SNP分型体系具有快速、简便、准确、低成本等优点,适合在临床上推广用于指导华法林用药剂量.福建省高校杰出青年科研人才培育计划项目厦门市科技计划项目（3502Z20179044

血流感染的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的分子机制及临床研究

目的探讨血流感染的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌（CRAB）耐药机制,分析菌株同源性及患者的临床特征,为CRAB的感染控制提供实验依据。方法采用Bact/Alert 3D全自动血培养系统进行血培养,细菌鉴定和药敏使用Vitek-2 Compact全自动微生物分析系统。对2010年6月—2016年5月临床血流感染患者分离到的27株碳青霉烯类药物（亚胺培南和/或美罗培南MIC≥16μg/m L）耐药的CRAB复苏菌株,重新采用Vitek-MS质谱分析仪鉴定,采用改良Hodge试验检测碳青霉烯酶,PCR法检测B类酶基因(blaNDM、blaIMP和blaVIM)和D类酶基因(blaOXA-23、blaOXA-24、blaOXA-51和blaOXA-58)并测序比对。采用MALDI-TOF分析菌株同源性,并分析患者的临床资料及感染相关信息。结果血流感染的CRAB绝大多数对常用抗生素耐药。27株CRAB改良Hodge试验均阳性。所有CRAB均未检测到B类酶基因(blaNDM、blaIMP和blaVIM);25株CRAB同时检测到blaOXA-23和blaOXA-51;另2株CRAB则为blaOXA-58阳性。采用Vitek-MS进行同源性分析,细菌分成3大簇（Ⅰ型13株、Ⅱ型12株、Ⅲ型2株）。85.2%（25/27）患者来自重症监护病房或专科的监护病床,原发感染灶以肺部炎症最常见（11例）。所有的患者在血培养出CRAB前的30d内均有抗菌药物使用史,使用频率较高的抗菌药物有:碳青霉烯类、氟喹诺酮类、头霉素类。15例CRAB血流感染患者死亡。结论厦门地区的CRAB以D类产碳青霉烯酶OXA-23和OXA-51最为多见。CRAB血流感染的原发感染多为肺部炎症。福建省卫生联合资金面上项目(No.2016J01643

A sandwich-type DNA electrochemical biosensor for hairpin-stem-loop structure based on multistep temperature-controlling method

National High Technology and Development of China (863 Project) [2012AA022604]; National Natural Science Foundation of China [20975021, 21175023, 81171668, 21275028]; Fujian Provincial University-Industry Cooperation Science and Technology Major Program [2010Y4003]; Foundation of Fujian Key Laboratory of Hematology [2009J1004]; Scientific Research Major Program of Fujian Medical University [09ZD013]; Natural Science Foundation of Fujian Province of China [2010J06011, 2012J01428]; Medical innovation subject of Fujian Province of China [2012-CX-30]; Science and Technology Project of Fuzhou City of China [2011-S-67-3]A highly sensitive and selective method for amplified electrochemical detection for hairpin-stem-loop structured target sequences was developed based on the temperature regulation of DNA hybrids on a sandwich-type electrochemical DNA sensor. Multistep hybridization was applied to promote the hybridization efficiency of each section of sandwich structure. The results showed that both multistep and temperature-controlling hybridization techniques were both especially made to fabricate the sensor for the tendency of internal hybridization of target gene sequences. This strategy provides significantly enhanced hybridization efficiency and sequence specificity of electrochemical detection