Nifurtimox response of Trypanosoma cruzi isolates from an outbreak of Chagas disease in Caracas, Venezuela

Background & objectives: In Venezuela, Chagas disease (ChD) is considered a serious health problem, with about 6 million people at risk; and acute outbreaks due to oral transmission of Chagas Disease (OChD) are becoming increasingly important. In 2007 there was a major outbreak of OChD and although patients from this episode were treated with nifurtimox (Lampit®—Bayer), about 70% therapeutic failure was registered. These results led us to examine whether parasite’s drug susceptibility was related to this therapeutic failure. Methods: The Trypanosoma cruzi parasites were isolated by haemoculture of the peripheral blood drawn from the pre- and post-nifurtimox treated patients infected in the 2007 OChD outbreak at Caracas, Venezuela. The in vitro assays for drug testing were performed by the MTT methodology followed by calculation of inhibitory concentration-50 (IC50) values. Results: Parasite isolates obtained from the infected patients prior and after nifurtimox treatment when subjected to variable concentrations of the drug showed great heterogeneity in susceptibility with IC50 values ranging from 4.07 ± 1.82 to 94.92 ± 7.24 µM. Interpretation & conclusion: The high heterogeneity in nifurtimox IC50 values in the isolates and clones from the OChD patients, suggests that the therapeutic failure to nifurtimox could be due in part to a phenotypic variability that existed in the wild parasite population at the original source of contamination. Though, further pharmacological studies are needed to confirm the existence of natural nifurtimox resistance in the parasite.Fil: Muñoz Calderon, Arturo Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Central de Venezuela; VenezuelaFil: Diaz Bello, Zoraida. Universidad Central de Venezuela; VenezuelaFil: Ramirez, José Luis. Fundacion Instituto de Estudios Avanzados Idea; VenezuelaFil: Noya, Oscar. Universidad Central de Venezuela; Venezuela. Ministerio del Poder Popular para la Salud; VenezuelaFil: Alarcón de Noya, Belkisyolé. Universidad Central de Venezuela; Venezuel

Seroprevalence of Trypanosoma cruzi infection in dogs and cats in the north central bioregion of Venezuela

La enfermedad de Chagas (ECh) es una parasitosis del grupo de enfermedades desatendidas de la OMS. Endémica del continente americano, la transmisión se realiza en ciclos selvático, peridomiciliario y domiciliario. Epidemiológicamente, los caninos y felinos constituyen una fuente importante de infección y son centinelas de la transmisión. El perro es un hospedador común e importante del parásito ya que la presencia y número de caninos infectados en la vivienda del hombre constituyen factores de riesgo de transmisión doméstica de Trypanosoma cruzi. El presente estudio reporta la seroprevalencia de la infección por T. cruzi en la bioregión centro norte de Venezuela (Distrito Capital, Chichiriviche de la Costa del Estado La Guaira y parte del Estado Miranda), en 301 perros y 49 gatos empleando el ensayo inmunoenzimatico (ELISA). La prevalencia global en perros fue del 30,2 % en las tres zonas estudiadas mientras que en gatos fue de 40,8 %. Con relación al sexo de los animales, se encontró una prevalencia general de perros hembras del 27,6 % y para los perros machos del 33,1%. Los gatos machos presentaron una prevalencia mayor que las hembras en todas las localidades. Tanto en perros como en gatos la distribución de seropositividad fue mayor en animales intradomicilio. Se evidenció diferencia en los valores de ELISAIgG para las poblaciones de perros muestreados en la localidad de Petare comparado con perros presentes en la localidad de Aricagua (perros de caza), (p=0,006). En líneas generales, esta última localidad presentó una media de densidad óptica para la prueba de ELISA-IgG de 0,959 [0,369 - 1,975]. La presencia de perros y gatos infectados es un factor de riesgo actual de infección por T. cruzi para el hombre tanto en el medio rural como en el urbano.Chagas disease (ChD) is a parasitic infection in the WHO Neglected Diseases group. Endemic to the american continent, transmission takes place in sylvatic, peridomiciliary and domestic cycles. Epidemiologically, canines and felines constitute an important source of infection and are sentinels of transmission. The dog is a common and important host of the parasite, since the presence and number of infected canines in the man's house are risk factors for domestic transmission of Trypanosoma cruzi. This study reports the seroprevalence of T. cruzi infection in the north-central bioregion of Venezuela (Capital District, Chichiriviche de la Costa, La Guaira State, and part of Miranda State), in 301 dogs and 49 cats using the immunoenzymatic assay (ELISA). The overall prevalence in dogs was 30.2 % in the three studied areas, while in cats it was 40.8 %. Regarding the sex of the animals, a general prevalence of 27.6 % for female dogs and 33.1% for male dogs was found. Male cats presented a higher prevalence than females in all localities. In both, dogs and cats, the distribution of seropositivity was greater in indoor animals. There was of a difference in ELISA-IgG values for the populations of dogs sampled in the town of Petare compared to dogs present in the town of Aricagua (hunting dogs), (p=0.006). In general, this last locality presented a mean optical density for the ELISA-IgG test of 0.959 [0.369 - 1.975]. The presence of infected dogs and cats is a current risk factor for T. cruzi infection for man in both of them in the rural and in the urban environment.Fil: Muñoz Calderon, Arturo Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina. Universidad Central de Venezuela; VenezuelaFil: Bello, Zoraida Diaz. Universidad Central de Venezuela; VenezuelaFil: Alarcón de Noya, Belkisyolé. Universidad Central de Venezuela; VenezuelaFil: Beitia, Yubiri. Unidad Móvil Veterinaria; Venezuel

Trypanosoma cruzi loop-mediated isothermal amplification (Trypanosoma cruzi loopamp) kit for detection of congenital, acute and chagas disease reactivation

A Trypanosoma cruzi Loopamp kit was recently developed as a ready-to-use diagnostic method requiring minimal laboratory facilities. We evaluated its diagnostic accuracy for detection of acute Chagas disease (CD) in different epidemiological and clinical scenarios. In this retrospective study, a convenience series of clinical samples (venous blood treated with EDTA or different stabilizer agents, heel-prick blood in filter paper or cerebrospinal fluid samples (CSF)) from 30 infants born to seropositive mothers (13 with congenital CD and 17 noninfected), four recipients of organs from CD donors, six orally–infected cases after consumption of contaminated guava juice and six CD patients coinfected with HIV at risk of CD reactivation (N = 46 patients, 46 blood samples and 1 CSF sample) were tested by T. cruzi Loopamp kit (Tc LAMP) and standardized quantitative real-time PCR (qPCR). T. cruzi Loopamp accuracy was estimated using the case definition in the different groups as a reference. Cohen’s kappa coefficient (κ) was applied to measure the agreement between Tc LAMP (index test) and qPCR (reference test). Sensitivity and specificity of T. cruzi Loopamp kit in blood samples from the pooled clinical groups was 93% (95% CI: 77–99) and 100% (95% CI: 80–100) respectively. The agreement between Tc LAMP and qPCR was almost perfect (κ = 0.92, 95% CI: 0.62–1.00). The T. cruzi Loopamp kit was sensitive and specific for detection of T. cruzi infection. It was carried out from DNA extracted from peripheral blood samples (via frozen EDTA blood, guanidine hydrochloride-EDTA blood, DNAgard blood and dried blood spots), as well as in CSF specimens infected with TcI or TcII/V/VI parasite.Fil: Besuschio, Susana Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Picado, Albert. Foundation For Innovative New Diagnostics; SuizaFil: Muñoz Calderon, Arturo Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Wehrendt, Diana Patricia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Fernández, Marisa. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Infecciosas "Dr. Francisco Javier Muñiz"; Argentina. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud "Dr. C. G. Malbrán". Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben"; ArgentinaFil: Benatar, Alejandro Francisco. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Diaz Bello, Zoraida. Universidad Central de Venezuela; VenezuelaFil: Irurtia, Cecilia. Hospital Nacional Profesor Alejandro Posadas; ArgentinaFil: Cruz Mata, Israel. Foundation for Innovative New Diagnostics; SuizaFil: Ndungu, Joseph M.. Foundation for Innovative New Diagnostics; SuizaFil: Cafferata, María L.. Instituto de Efectividad Clínica y Sanitaria; ArgentinaFil: Montenegro, Graciela. Hospital Nacional Profesor Alejandro Posadas; ArgentinaFil: Sosa-Estani, Sergio Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones en Epidemiología y Salud Pública. Instituto de Efectividad Clínica y Sanitaria. Centro de Investigaciones en Epidemiología y Salud Pública; Argentina. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud "Dr. C. G. Malbrán". Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben"; ArgentinaFil: Lucero, Raúl H.. Universidad Nacional del Nordeste. Instituto de Medicina Regional; ArgentinaFil: Alarcón de Noya, Belkisyole. Universidad Central de Venezuela; VenezuelaFil: Longhi, Silvia Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Schijman, Alejandro Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentin

Analytical Performance of a Multiplex Real-Time PCR Assay Using TaqMan Probes for Quantification of Trypanosoma cruzi Satellite DNA in Blood Samples

Background: The analytical validation of sensitive, accurate and standardized Real-Time PCR methods for Trypanosoma cruzi quantification is crucial to provide a reliable laboratory tool for diagnosis of recent infections as well as for monitoring treatment efficacy. Methods/Principal Findings: We have standardized and validated a multiplex Real-Time quantitative PCR assay (qPCR) based on TaqMan technology, aiming to quantify T. cruzi satellite DNA as well as an internal amplification control (IAC) in a single-tube reaction. IAC amplification allows rule out false negative PCR results due to inhibitory substances or loss of DNA during sample processing. The assay has a limit of detection (LOD) of 0.70 parasite equivalents/mL and a limit of quantification (LOQ) of 1.53 parasite equivalents/mL starting from non-boiled Guanidine EDTA blood spiked with T. cruzi CLBrener stock. The method was evaluated with blood samples collected from Chagas disease patients experiencing different clinical stages and epidemiological scenarios: 1- Sixteen Venezuelan patients from an outbreak of oral transmission, 2- Sixty three Bolivian patients suffering chronic Chagas disease, 3- Thirty four Argentinean cases with chronic Chagas disease, 4- Twenty seven newborns to seropositive mothers, 5- A seronegative receptor who got infected after transplantation with a cadaveric kidney explanted from an infected subject. Conclusions/Significance: The performing parameters of this assay encourage its application to early assessment of T. cruzi infection in cases in which serological methods are not informative, such as recent infections by oral contamination or congenital transmission or after transplantation with organs from seropositive donors, as well as for monitoring Chagas disease patients under etiological treatment.Fil: Duffy, Tomas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones En Ingeniería Genética y Biología Molecular; ArgentinaFil: Cura, Carolina Inés. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular; ArgentinaFil: Ramírez, Juan C.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular; ArgentinaFil: Abate, Teresa. Universidad Central de Venezuela. Instituto de Medicina Tropical; VenezuelaFil: Cayo, Nelly M.. Universidad Nacional de Jujuy. Instituto de Biologia de la Altura; ArgentinaFil: Parrado, Rudy. Universidad San Simón; BoliviaFil: Diaz Bello, Zoraida. Universidad Central de Venezuela. Instituto de Medicina Tropical; VenezuelaFil: Velazquez, Elsa Beatriz. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud. Instituto Nacional de Parasitología; ArgentinaFil: Muñoz Calderón, Arturo. Universidad Central de Venezuela. Instituto de Medicina Tropical; VenezuelaFil: Juiz, Natalia Anahí. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular; ArgentinaFil: Basile, Joaquín. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular; ArgentinaFil: Garcia, Lineth. Universidad San Simón; BoliviaFil: Riarte, Adelina. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud. Instituto Nacional de Parasitología; ArgentinaFil: Nasser, Julio Rubén. Universidad Nacional de Salta. Facultad de Ciencias Naturales; ArgentinaFil: Ocampo, Susana B.. Universidad Nacional de Jujuy. Instituto de Biologia de la Altura; ArgentinaFil: Yadon, Zaida E.. Pan-American Health Organization; Estados UnidosFil: Torrico, Faustino. Universidad San Simón; BoliviaFil: Alarcón de Noya, Belkisyole. Universidad Central de Venezuela. Instituto de Medicina Tropical; VenezuelaFil: Ribeiro, Isabela. Drugs and Neglected Diseases Initiative; SuizaFil: Schijman, Alejandro Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular; Argentin

Chagas disease and the mother-son binomy

La infección por Trypanosoma cruzi está garantizada por la presencia del parásito en muchos géneros animales incluido el hombre. Este a su vez, no solo adquiere el parásitoa través del vector (cutánea, por mucosas, oral) o por secreciones de didelfidos o accidentalmente por manipulación de material biológico infectante,sino también por la trasmisión hombre-hombre la cual aumenta la diseminación de la Enfermedad de Chagas aunque en menor proporción (trasmisión congénita, transfusional o por trasplante de tejidos). El parásito alcanza al feto in utero principalmente por su capacidad de atravesar la placenta especialmente después de la semana 20 cuando la barrera placentaria se adelgaza progresivamente. Sin embargo solo del 1 al 10% de los niños nacidos de madres con Enfermedad de Chagas desarrollan infección aguda variando de acuerdo al país, edad gestacional, al genotipo y carga del parásito entre varios factores. La clínica del neonato con T. cruzi va desde casos asintomáticos, bajo peso, prematuridad, hepatoesplenomegalia, dificultad respiratoria,hastael desenlace fatal. La prevención se basa en la detección por serología y tratamiento oportuno en niñas y mujeres antes del embarazo ya que los antiparasitarios específicos producen efectos adversos y en principio están contraindicados durante el embarazo. En cambio el tratamiento está indicado en el niño en cualquier momento cuando se demuestre la patología. El despistaje de la infección por T. cruzi debería ser obligatorio en toda Latinoamérica y en toda mujer latinoamericana en el mundo a fin de estar preparado para la atención postparto al infante y a la madre.Infection with Trypanosoma cruzi is guaranteed by the presence of the parasite in many animal genera including man. This in turn, not only acquires the parasite by contact with a vector (skin, mucoses and oral transmission) or by secretions of didelfides or accidentally by manipulation of infecting biological material, but also by man-man transmission which increases the spread of Chagas disease (congenital, transfusion or tissue transplant transmission). The parasite reaches the fetus in utero mainly due to its ability to cross the placenta especially after week 20 when the placental barrier becomes progressively thinner. However, only 1 to 10% of children born from mothers with Chagas disease develop acute infection, varying according to country, gestational age, genotype, and parasite load among various factors. The clinic of the neonate with T. cruzi ranges from asymptomatic cases, low weight, prematurity, hepatosplenomegaly, respiratory distress to the fatal outcome. Prevention is based on the detection by serology and timely treatment in girls and women before pregnancy since specific antiparasitic drugs produce adverse effects and are in principle contraindicated during pregnancy. Instead, treatment is indicated in the child at any time when the pathology is demonstrated. The screening of T. cruzi infection should be mandatory in all Latin America and in all Latin American women in the world in order to be prepared for the postpartum care of the infant and the mother.Fil: Alarcón de Noya, Belkisyolé. Universidad Central de Venezuela; VenezuelaFil: Muñoz Calderon, Arturo Alejandro. Universidad Central de Venezuela; Venezuela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Perez Chacon, Gladymar. Universidad Central de Venezuela; VenezuelaFil: Diaz Bello, Zoraida. Universidad Central de Venezuela; VenezuelaFil: Mauriello, Luciano. Universidad Central de Venezuela; VenezuelaFil: Navarro, Eduardo. Universidad Central de Venezuela; Venezuel

Oral-transmitted Chagas disease, a pediatric emergency: Review of two school outbreaks in Venezuela

El escenario epidemiológico de la Enfermedad de Chagas (ECh) se ha modificado por efecto de la migración de latinoamericanos infectados, la presencia de vectores fuera del área endémica, la capacidad vectorial de otros artrópodos y la trasmisión oral a humanos de Trypanosoma cruzi (Tc). En Venezuela se han reportado las microepidemias más numerosas de ECh de transmisión oral (EChO), afectando principalmente a niños. La presencia de fiebre prolongada, edema facial, síntomas generales y otros sugestivos de miocarditis, debe orientarnos a la sospecha de EChO, sobre todo si hay varias personas con sintomatología similar y nexo epidemiológico entre ellas. La elevada morbilidad y mortalidad de la EChO hacen de esta entidad una emergencia sobre todo en población infantil. La determinación simultanea de IgG e IgM especifica aumenta la sensibilidad del diagnóstico serológico, la demostración de Tc y del genotipo circulante debe realizarse con métodos parasitológicos y moleculares. El tratamiento antiparasitario es mejor tolerado por los niños, pero a pesar de aplicarse tempranamente fue efectivo solo en 60% de los pacientes a los 10 años de seguimiento. La EChO puede simular otras infecciones, pero es necesario sospecharla para el pronto diagnóstico y administración temprana del tratamiento evitando la mortalidad.The epidemiological scenario of Chagas Disease (ChD) has been modified by the effect of the migration of infected Latin Americans, the presence of vectors outside the endemic area, the vectorial capacity of other arthropods and the oral transmission of Trypanosoma cruzi (Tc) to humans. Acute Tc infection constitutes an emergency and when it affects children the risk of a fatal outcome increases. The consultation of review articles corresponding to three Latin American countries Brazil, Colombia and Venezuela reporting on acute cases of oral infection by Tc, suggests that the most numerous microepidemics of orally transmitted ChD (OChD) occurred in two schools Artículo Especial 14 I Rev. Hosp. Niños (B. Aires) 2023;65(288):13-22 / Artículo Original Alarcón de Noya B, et al. in Venezuela, affecting children mostly. The presence of prolonged fever, facial edema, general symptoms and others suggestive of myocarditis should lead us to suspect OChD, especially if there are several people with similar symptoms and an epidemiological link between them. The high morbidity and mortality of OChD make this entity an emergency, because morbidity and mortality are frequent in the child population. The simultaneous determination o f s pecific Ig G an d Ig M in creases the sensitivity of the serological diagnosis, the demonstration of Tc is more feasible in these acute cases, but the number of people affected limits the coverage of the parasitological diagnosis. Determination of parasitic DNA in all exposed persons is desirable because it is more sensitive than parasitological diagnosis and is useful for subsequent evaluation of treatment efficacy; however, the urgency of administering anti-parasitic treatment did not allow access to a second pretreatment sample for this purpose. The circulating genotype was characterized more for epidemiological investigation than as a diagnostic requirement. The antiparasitic treatment is better tolerated by children with OChD, but despite being applied early it was effective only in 60% of patients at 10 years of follow-up,based on serologyand parasiteDNAdeterminations. OChD can mimic other infections, but it is necessary to suspect it for prompt diagnosis and early administration of treatment, avoiding mortality.Fil: Alarcón de Noya, Belkisyolé. Universidad Central de Venezuela; VenezuelaFil: Ruiz Guevara, Raiza. Universidad Central de Venezuela; VenezuelaFil: Diaz Bello, Zoraida. Universidad Central de Venezuela; VenezuelaFil: Colmenares, Cecilia. Universidad Central de Venezuela; VenezuelaFil: Mauriello, Luciano. Universidad Central de Venezuela; VenezuelaFil: Muñoz Calderon, Arturo Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Noya González, Oscar. Universidad Central de Venezuela; Venezuela. Ministerio del Poder Popular para la Salud. Instituto de Altos Estudios “Dr. Arnoldo Gabaldón”. Centro para Estudios sobre Malaria; Venezuel

Publisher Correction: Spermine synthase deficiency causes lysosomal dysfunction and oxidative stress in models of Snyder-Robinson syndrome

The originally published version of this Article contained errors in Figure 1. In panel c, the grey shading denoting evolutionary conservation and the arrowheads indicating amino acids affected in Snyder-Robinson syndrome were displaced relative to the sequence. These errors have now been corrected in both the PDF and HTML versions of the manuscript