CLICK:One-step generation of conditional knockout mice

Abstract Background CRISPR/Cas9 enables the targeting of genes in zygotes; however, efficient approaches to create loxP-flanked (floxed) alleles remain elusive. Results Here, we show that the electroporation of Cas9, two gRNAs, and long single-stranded DNA (lssDNA) into zygotes, termed CLICK (CRISPR with lssDNA inducing conditional knockout alleles), enables the quick generation of floxed alleles in mice and rats. Conclusions The high efficiency of CLICK provides homozygous knock-ins in oocytes carrying tissue-specific Cre, which allows the one-step generation of conditional knockouts in founder (F0) mice

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A imersão de uma rede de interconexão em outra é uma questão muito importante no desenvolvimento e na análise de algoritmos paralelos. Através destas imersões, os algoritmos originalmente desenvolvidos para uma determinada arquitetura podem sermapeados para uma outra arquitetura. Os resultados de imersão de um m-cubo r-ário em um hipercubo já são conhecidos na literatura. Neste trabalho, apresentaremos o método do código de Gray de Saad e Schultz e o método do dobramento recursivoproposto por Song e Hamdi para este tipo de imersão. Este segundo método possui uma propriedade que possibilita a identificação imediata de todos os subcubos menores de um m-cubo r-ário. Nas publicações anteriores sobre o método do dobramentorecursivo, entretanto, não há exemplos que ilustrem a aplicabilidade e utilidade desta propriedade. Mostramos neste trabalho que o método do dobramento recursivo pode ser útil para uma classe de problemas matriciais resolvidos com algoritmos dotipo divisão e conquista. Mais especificamente, apresentaremos três algoritmos recursivos, para os problemas de obtenção da transposta de uma matriz, multiplicação de matrizes e ordenação por intercalação Par-Ímpar, propostos para dar um m-cubor-ário que necessitem de todos os subcubos menoresnot availabl

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Table S4. Primer sets used for PCR and sequencing analysis in this study. (XLSX 10 kb

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Table S3. Crossing floxed founders with Cre-driver mice. (XLSX 11 kb

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Figure S6. Sequences of two gRNAs and lssDNA(−) designed to target exon 3 of the mouse KIAA1322 locus. (AI 1214 kb

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Figure S1. Schematic representation of the protocol to prepare long single-stranded DNA (lssDNA) using nicking endonucleases. (AI 1147 kb

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Table S1. Germline transmission of CLICK-mediated mutations in F1 offspring. (XLSX 12 kb

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Figure S8. Floxed Serpina3n alleles generated by the electroporation of two gRNA, Cas9 mRNA and lssDNA(−) into B6 mouse zygotes. (AI 1569 kb