57 research outputs found

    PREPARATION AND PROPERTIES OF MURINE ANTI-IDIOTYPIC MONOCLONAL ANTIBODIES RECOGNIZING PRIMARY RABBIT POLYCLONAL ANTIBODIES AGAINST MORPHINE DERIVATIVES

    Get PDF
    Anti-idiotypic antibodies (Ab2), according to the network theory of Jerne, are second-generation immunoglobulins that are produced against the idiotype of an antibody to a specific antigen. Despite the large number of works devoted to the study of the properties of these proteins, their role in the regulation of the immune system is not fully known. It may consist in maintaining or blocking a minimal immune response to the antigen. The study of Ab2 is of great practical and scientific importance. The special properties of Ab2, namely, the ability to partially reproduce the structure of the primary antigen and, upon immunization, induce the appearance of tertiary antibodies, which, like first-generation antibodies, can bind to the antigen, have found application in the development of Ab2-based vaccines, in particular, for the treatment of tumors. In view of the presence of a number of limitations on research related to psychoactive substances, the development of Ab2- based vaccines against drug addiction also seems promising. To example, anti-idiotypic antibodies obtained for this purpose possessing a cocaine-like structure are described in the literature. In this work, murine monoclonal anti-idiotypic antibodies (mAb2) mimicking the structure of various morphine derivatives were obtained. Rabbit polyclonal antibodies to the 6-hemisuccinyl derivative of morphine conjugated with bovine serum albumin isolated by affinity chromatography were used as primary antibodies for immunization. Four hybridoma clones were obtained as a result of the fusion of immunized mice lymphocytes with mouse Sp2/0 mouse myeloma cells by the Milstein-Köhler method. After growth in animals, mAb2 produced by hybridoma cells were affinity purified. We investigated the physicochemical and antigenic properties of the isolated antibodies. It was shown that the obtained mAb2 differ in immunological specificity, competing in different degree with morphine derivatives for binding to first-generation antibodies. We tested the possibility of using the obtained mAb2 as antigen analogues in the solid-phase enzyme-linked immunosorbent assay to determine the titer of primary antibodies against morphine in the blood serum of laboratory animals immunized with morphine derivatives. Based on the obtained anti-idiotypic antibodies, it is proposed to develop test systems to determine the serum opiate-specific antibodies in people after specific vaccination for therapeutic or prophylactic purposes to avoid the use of drugs as antigens immobilized on the solid phase in the analysis

    Creation of a recombinant Komagataella phaffii strain, a producer of proteinase K from Tritirachium album

    Get PDF
    The objects of the study were recombinant clones of Komagataella phaffii K51 carrying the heterologous proteinase K (PK-w) gene from Tritirachium album integrated into their genome as well as samples of recombinant proteinase K isolated from these clones. The aims of this work were i) to determine whether it is possible to create recombinant K. phaffii K51 clones overexpressing functionally active proteinase K from T. album and ii) to analyze the enzymatic activity of the resulting recombinant enzyme. The following methods were used: computational analysis of primary structure of the proteinase K gene, molecular biological methods (PCR, electrophoresis of DNA in an agarose gel, electrophoresis of proteins in an SDS polyacrylamide gel under denaturing conditions, spectrophotometry, and quantitative assays of protease activity), and genetic engineering techniques (cloning and selection of genes in bacterial cells Escherichia coli TOP10 and in the methylotrophic yeast K. phaffii K51). The gene encoding natural proteinase K (PK-w) was designed and optimized for expression in K. phaffii K51. The proteinase K gene was synthesized and cloned within the plasmid pPICZα-A vector in E. coli TOP10 cells. The proteinase K gene was inserted into pPICZα-A in such a way that – at a subsequent stage of transfection into yeast cells – it was efficiently expressed under the control of the promoter and terminator of the AOX1 gene, and the product of the exogenous gene contained the signal peptide of the Saccharomyces cerevisiae a-factor to ensure the protein’s secretion into the culture medium. The resultant recombinant plasmid (pPICZα-A/PK-w) was transfected into K. phaffii K51 cells. A recombinant K. phaffii K51 clone was obtained that carried the synthetic proteinase K gene and ensured its effective expression and secretion into the culture medium. An approximate productivity of the yeast recombinant clones for recombinant proteinase K was 25 μg/ mL after 4 days of cultivation. The resulting recombinant protease has a high specific proteolytic activity: ~5000 U/mg

    Изучение корреляций различных форм простатспецифического антигена и клинико-морфологических характеристик опухолевого процесса у больных раком предст ательной железы

    Get PDF
    Serum samples from 226 primary patients with prostate cancer (PC) and a baseline total prostate-specific antigen (t-PSA) of < 30.0 ng/ml were used to investigate f-PSA and [-2]proPSA levels and to calculate f-PSA%, [-2]proPSA%, and prostate health index (PHI). The findings were compared with cancer stage (pTNM) and Gleason grade (Gleason index) in accordance with a postoperative histological report. PHI was shown to have the best differentiating properties (pT2c/pT3a/pT3b; localized indolent PC / localized aggressive PC / locally advanced PC / PC with regional metastases; Gleason score 5-6 / Gleason score 7 (3+4) / Gleason score 7 (4+3).В сыворотке крови 226 первичных больных раком предстательной железы (РПЖ) с исходным уровнем общего простатспецифического антигена (общПСА) < 30,0 нг/мл исследованы уровни свободного ПСА (свПСА), [-2]проПСА, высчитаны % свПСА, %[-2] проПСА и индекс здоровья простаты (ИЗП). Полученные данные сопоставлены со стадией опухолевого процесса (pTNM) и степенью злокачественности опухоли по шкале Глисона (индекс Глисона) в соответствии с послеоперационным гистологическим заключением. Показано, что наилучшими дифференцирующими свойствами (pT2c/pT3a/pT3b; локализованный индолентный РПЖ / локализованный агрессивный РПЖ / местно-распространенный РПЖ / РПЖ с регионарными метастазами; индекс Глисона 5–6 / индекс Глисона 7 (3+4) / индекс Глисона 7 (4+3)) обладает ИЗП

    Индекс ВИЗГ – новый мультипараметрический показатель для рака предстательной железы

    Get PDF
    Serum of 336 patients with primary prostate cancer (PC) with baseline total prostate-specific antigen level (totPSA) < 30.0 ng/ml was tested for free PSA (freePSA) and [-2]proPSA; %freePSA, %[-2]proPSA, prostate health index (phi), and a new index APHIG calculated using lab tests and taking into account age, T stage and Gleason score from biopsy were evaluated. Obtained data was compared to tumor stage (pTNM) and malignancy grade according to the Gleason score based on the final histological report after prostatectomy. APHIG has statistically significant benefits compared to PSA-associated markers for differentiation of clinically significant subgroups of PC: pT2c/pT3a/pT3b; local indolent PC/local aggressive/locally advanced/PC with regional metastases; total Gleason score 5–6/7(3 + 4)/7(4 + 3).В сыворотке крови 336 первичных больных раком предстательной железы (РПЖ) с исходным уровнем общего простатического специфического антигена (общПСА) < 30,0 нг/мл исследованы показатели свободного ПСА (свПСА), [-2]проПСА, определены %свПСА, %[-2]проПСА, индекс здоровья предстательной железы (ИЗП) и новый показатель ВИЗГ, рассчитанный на базе лабораторных анализов с учетом возраста, стадии Т и индекса Глисона по результатам биопсии. Полученные данные сопоставлены со стадией опухолевого процесса (pTNM) и степенью злокачественности опухоли по шкале Глисона в соответствии с окончательным гистологическим заключением после проведения простатэктомии. Показано, что ВИЗГ имеет статистически достоверное преимущество перед ПСА-ассоциированными маркерами в дифференцировке клинически значимых подгрупп РПЖ: pT2c/pT3a/pT3b; локализованный индолентный РПЖ/локализованный агрессивный/местно-распространенный/РПЖ с регионарными метастазами; сумма баллов по шкале Глисона 5–6/7(3 + 4)/7(4 + 3)

    Определение происхождения природного битума в мумифицирующих смолах древнеегипетских мумий из собрания ГМИИ им. А.С. Пушкина

    Get PDF
    This work presents the results of a study of the resins of seven Ancient Egyptian mummies from the collection of the Pushkin State Museum of Fine Arts using a complex of analytical methods: gas chromatography, atomic emission and mass spectrometry. Natural bitumen and beeswax were identified in the resins using the gas chromatography–mass spectrometry method. Based on the results of hydrocarbon distribution in the profiles of n-alkanes in the resin coatings of the mummies and naturally occurring bitumen, it was assumed that the Dead Sea bitumen was used. The gas chromatography–mass spectrometry studies of mummy resins in the selected ion mode (m/z 217 and 191) provided additional evidence of the bitumen’s geographic origin. Atomic emission spectrometry with inductively coupled plasma was used as a means to determine the content of microelements. Vanadium, nickel and molybdenum were found in the tar of five mummies. The determined relative amounts of vanadium, nickel, and molybdenum in the resins of the studied mummies showed a good correlation with the available data on the content of these elements in the Dead Sea bitumen, as well as the Fayum mummy resin based on this bitumen. The advantages of using the method of identifying bitumen in mummy resins based on relative content of vanadium, nickel, and molybdenum were revealed.В работе представлены результаты исследования составов смол семи древнеегипетских мумий из коллекции Государственного музея изобразительных искусств имени А.С. Пушкина с применением комплекса аналитических методов: газовой хроматографии (ГХ), атомно-эмиссионной и масс-спектрометрии (МС). Методом ГХ–МС в них идентифицированы природный битум и пчелиный воск. По результатам распределений углеводородов в профилях н-алканов в смоляных покрытиях мумий и природных битумов высказано предположение об использовании битума Мертвого моря. Дополнительные доказательства географического происхождения битума получены ГХ–МС-исследованием смол мумий в режиме мониторинга заданных ионов (m/z 217 и 191). Методом атомно-эмиссионной спектрометрии с индуктивно связанной плазмой определено содержание микроэлементов и показано, что в смолах пяти мумий присутствуют ванадий, никель и молибден. Полученные результаты свидетельствуют об удовлетворительной корреляции их с литературными данными по содержанию указанных элементов в битуме Мертвого моря и смоле Фаюмской мумии на основе этого битума. Выявлены преимущества использования метода идентификации битума в смолах мумий по относительному содержанию ванадия, никеля и молибдена

    Итоги первого этапа валидации алгоритма ВИЗГ для уточнения стадирования рака предстательной железы до начала лечения

    Get PDF
    Background. We have previously described an algorithm APhiGT (Age, Prostate Health index, Gleason score, TNM stage) for staging of prostate cancer (PC) before treatment. The algorithm was developed by logistic regression on an educational selection (ES) of 337 PC cases. The algorithm includes data about the age of patients, the levels of total prostate-specific antigen (PSA), free PSA, [-2]proPSA and the ranked data of the Gleason score (by biopsy results) and T (by TNM).Objective. Validation of APhiGT on the validation selection (VS) of 83 PC cases was carried out in this work.Materials and methods. ROC analysis was performed in ES and VS.Results and сonclusion. It is established that area under the curve (AUC), characterizing the ability to divide clinically significant subgroups of patients (Gleason score <7 vs. Gleason score ≥7, рТ2 vs. рТ3, localized indolent PC vs. localized aggressive PC) for APhiGT both in ES and VS was significantly higher than AUC for total PSA, %[-2]proPSA in free PSA and prostate health index. At the same time, in all clinical subgroups of patients AUC for VS was lower than AUC for ES, which may be due to a significantly smaller size of VS compared to ES.Введение. Ранее нами был описан алгоритм ВИЗГ (Возраст, Индекс Здоровья предстательной железы, сумма баллов по шкале Глисона, стадия TNM) для уточнения стадирования рака предстательной железы (РПЖ) до начала лечения. Алгоритм был разработан путем логистической регрессии на учебной выборке (УВ) из 337 наблюдений РПЖ. В алгоритм входят данные о возрасте пациентов, уровнях общего простатического специфического антигена (общПСА), свободного ПСА, [-2]проПСА и ранжированный показатель суммы баллов по шкале Глисона (по результатам биопсии) и ранжированный показатель Т (по TNMклассификации).Цель исследования – валидация ВИЗГ на валидационной выборке (ВВ) из 83 случаев РПЖ.Материалы и методы. Был проведен ROC-анализ в УВ и ВВ.Результаты и заключение. Установлено, что площадь под ROC-кривой (АUС), характеризующая способность разделять клинически значимые подгруппы больных (сумма баллов по шкале Глисона в соответствии с патоморфологическим заключением <7 / ≥7, рТ2 / рТ3, локализованный индолентный РПЖ / локализованный агрессивный РПЖ) для ВИЗГ как в УВ, так и в ВВ, существенно превосходила АUС для общПСА, доли [-2]проПСА в свободном ПСА и индекса здоровья предстательной железы. В то же время во всех клинических подгруппах больных АUС для ВВ была меньше, чем для УВ, что может быть обусловлено существенно меньшим объемом ВВ по сравнению с УВ.

    Валидация пороговых решающих правил и калькулятора для алгоритма ВИЗГ, предназначенного для уточнения стадии рака предстательной железы до начала лечения

    Get PDF
    Background. We have previously described an algorithm APhiG (Age of patients, Prostate health index and Gleason score), for staging of prostate cancer before treatment. The algorithm was developed by logistic regression on a training dataset and validated on a validation dataset (VD). Objective. Validation of threshold decision rules and a program for APhiG calculation on the VD.Materials and methods. ROC curve analysis on VD (83 cases).Results and conclusion. It was shown that sensitivity, specificity, positive and negative predictive value, diagnostic accuracy threshold decision rules and area under the curve (AUC) for APhiG in the VD (n = 83) not significantly different from those indicators in the training dataset (n = 337), which was the basis for the algorithm APhiG development.Введение. Ранее нами был описан алгоритм ВИЗГ (Возраст, Индекс Здоровья предстательной железы, сумма баллов по шкале Глисона), предназначенный для уточнения стадирования рака предстательной железы (РПЖ) до начала лечения. Алгоритм разработан путем логистической регрессии на учебной выборке и валидирован на валидационной выборке (ВВ) данных.Цель исследования – валидация пороговых решающих правил и программы-калькулятора для алгоритма ВИЗГ на ВВ данных.Материалы и методы. ROC-анализ данных ВВ (n = 83).Результаты и заключение. Показано, что чувствительность, специфичность, положительное и отрицательное прогностические значения, диагностическая точность пороговых решающих правил и площадь под кривой (АUC) для ВИЗГ по результатам ROC-анализа данных ВВ, включающей 83 случая РПЖ, достоверно не отличаются от показателей, рассчитанных по данным учебной выборки, на основании которой был разработан алгоритм ВИЗГ, состоящей из 337 наблюдений РПЖ

    СЕРОТИПЫ STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE, ВЫЗЫВАЮЩИХ ВЕДУЩИЕ НОЗОЛОГИЧЕСКИЕ ФОРМЫ ПНЕВМОКОККОВЫХ ИНФЕКЦИЙ

    Get PDF
    First in Russia prospective non-interventional hospital-based study on Streptococcus pneumoniae serotypes causing meningitis and acute otitis media (AOM) in children and community-acquired pneumonia (CAP) in children and adults, as well as serotype coverage by pneumococcal conjugate vaccines (PCV’s) of different composition has been conducted. Serotypes 19F, 14 and serogroup 6 are the leading in meningitis; serotype coverage is 70,6% for PCV7, and 76,5% – for PCV10 and PCV13. Among S. pneumoniae serotypes causing AOM 19F, 3, 23F and serogroup 6 have been the most prevalent in Saint Petersburg. PCV7 and PCV10 provide equal serotypes coverage in AOM – 63,2% among children 0–2 years old, and 32,5% among children 5–17 years old. PCV13 covers up to 79% of serotypes in infants. In CAP PCV7 and PCV10 provide 57,1% serotype coverage in children and 56,1% – in adults. Serotype coverage in CAP for PCV13 has been 14,3% and 34,5% higher for children and adults, correspondingly. Obtained data supports PCV inclusion in children immunization program in Saint Petersburg, whereas PCV13 provides the broadest serotype coverage. In the course PCV’s implementation continued pneumococcal infection surveillance is advisable.Впервые в России в проспективном неинтервенционном госпитальном эпидемиологическом исследовании изучен серотиповой состав Streptococcus pneumoniae, вызывающих менингиты, внебольничную пневмонию и острый средний отит (ОСО), а также охват циркулирующих серотипов пневмококковыми конъюгированными вакцинами (ПКВ) различного состава. К ведущим серотипам S. pneumoniae, вызывающим у детей гнойный менингит, относятся 19F, 14 и серогруппа 6. Охват серотипов S. pneumoniae, вызывающих гнойный менингит для ПКВ7, составляет 70,6%, а для ПКВ10 и ПКВ13 – 76,5%. Ведущими серотипами пневмококков, вызывающих ОСО, в Санкт-Петербурге являются серотипы 19F, 3, 23F и серогруппа 6. Охват серотипов для ПКВ7 и ПКВ10 одинаков и составляет 63,2% для детей в возрасте 0–2 лет и 32,5% для детей в возрасте 5–17 лет. Для ПКВ13 эти показатели составляют соответственно 79% и 55%. При внебольничной пневмонии ПКВ7 и ПКВ10 обеспечивали одинаковый охват: 57,1% у детей и 56,1% у взрослых. Для ПКВ13 эти показатели были на 14,3% больше у детей и на 34,5% у взрослых. Полученные данные обосновывают целесообразность применения пневмококковых конъюгированных вакцин для массовой иммунизации детей в Санкт-Петербурге, при этом ПКВ13 обеспечивает наибольший охват серотипов S. pneumoniae, вызывающих основные пневмококковые заболевания. Для оценки эффективности вакцинации целесообразно продолжить эпидемиологическое наблюдение за пневмококковыми инфекциями после проведения массовой иммунизации ПКВ13

    Session 17 Ecophysiology

    Get PDF
    n/
    corecore