Viabilidade in vitro do espermatozóide canino congelado em diluidor tris-frutose-ácido cítrico com etileno glicol

A utilização de sêmen congelado tornou-se extremamente comum na prática da inseminação artificial em cães, estimulando a pesquisa de métodos de congelação e diluidores. Neste estudo foram avaliadas as propriedades criopreservativas do etileno glicol na concentração final de 5%, utilizado em 3 diferentes protocolos de congelação. No Método I, uma parte de sêmen foi adicionada a duas partes de tris-frutose-ácido cítrico, contendo 7,5% de etileno glicol e congelado sem prévia refrigeração. No Método II, uma parte de sêmen foi adicionada a duas partes de tris-frutose-ácido cítrico contendo 7,5% de etileno glicol e resfrigerado até 5ºC por 1 hora antes da congelação. No Método III, uma parte de sêmen foi adicionada a uma parte de tris-frutose-ácido cítrico sem etileno glicol e refrigerado até 5ºC por 1 hora, sendo em seguida adicionada uma parte de tris-frutose-ácido cítrico, previamente refrigerado até 5ºC, contendo 15% de etileno glicol, mantido a 5ºC por mais 1 hora e congelado. Para a congelação em cada método, o sêmen foi envasado em palhetas plásticas de 0,5 ml, colocadas em vapor de nitrogênio a 5 cm da coluna líquida por 20 minutos, mergulhadas no nitrogênio líquido e armazenadas. Todas as amostras foram descongeladas em banho-maria a 37ºC durante 30 segundos e imediatamente avaliadas. O Método III não apresentou decréscimo significante da motilidade retilínea progressiva após a descongelação e apresentou os melhores resultados para o vigor espermático, comparando-se aos demais métodos. Entretanto, os 3 métodos não apresentaram diferença significativa com relação aos defeitos espermáticos pós-descongelação. Os tipos de defeitos mais freqüentemente encontrados foram cabeça solta normal, cauda dobrada, fortemente dobrada e fortemente enrolada. Foi possível concluir que o tempo de equilíbrio maior no diluidor tris-frutose-ácido cítrico seguido pela diluição em etileno glicol antes da congelação parece produzir para os espermatozóides de cães a melhor motilidade retilínea progressiva e vigor após a descongelação.The use of frozen semen has become increasingly popular in canine artificial insemination, stimulating research to improve freezing methods and extenders. In this study, was compared the final concentration of 5% ethylene glycol used in 3 equilibration protocols. In Method I, one part of semen was added to two parts of tris-fructose-citric acid with 7.5% ethylene glycol (Extender 2) and frozen without cooling. In Method II, one part of semen was added to two parts of tris-fructose-citric acid with 7.5% ethylene glycol (Extender 2) and cooled at 5ºC for 1 hour before freezing. In Method III, one part of semen was added to one part of tris-fructose-citric without ethylene glycol (Extender 1) and cooled at 5ºC for 1 hour. Just after this period, one part of 5ºC cooled tris-fructose-citric acid containing 15% ethylene glycol (Extender 3) was added to the previous extended semen, maintained at 5ºC for one additional hour and frozen. For freezing in each procedure semen was packaged in 0.5 ml plastic straws and placed for 20 minutes in vapor 5 cm above liquid nitrogen and then lowered into the liquid nitrogen and stored. All samples were thawed by immersion for 30 sec in a 37ºC water bath and immediately evaluated. Progressive motility was best after Method III (63%), which was not different from fresh semen (94%) but was better (p< 0.05) than after Method II (25%) or Method I (6%). Forward velocity was again best after Method III (2.9) comparable to fresh semen (4.6) and Method II (2.5), but better (p< 0.05) than Method I (1.7). Morphological abnormalities were lowest after Method III, but were not significantly different from Methods II or I. Most common abnormalities were detached heads and bent, hairpin and coiled tails. It was concluded that slow, step-wise equilibration in tris-fructose-citrate extender followed by extender with ethylene glycol before freezing seems to produce the best progressive motility and forward velocity in frozen-thawed canine spermatozoa

Controle ultra-sonográfico de gestações, de mortalidades embrionárias e fetais e do sexo de fetos bovinos zebuínos

This study analysed the efficiency of early pregnancy diagnosis and embryo and fetal mortality and sexing evaluation by ultrasound in two groups of zebu cows submitted to artificial insemination (G1) or embryo transfer (G2 = G2A and G2B). The animals that not returned to estrus at 21th day after artificial insemination (G1) and 14th day after embryo transfer (G2B) were examinated at 25th day of gestation for early pregnancy diagnosis, at 45th day for embryo mortality between 25th and 45th and at 60th days for fetal mortality between 45th and 60th days and sexing evaluation. The animals from group G2A were examinated by retal palpation at 45th day for gestation diagnosis and at 60th day for fetal mortality between 45th and 60th days and sexing evaluation. The pregnancy rates were 94.6%, 88.1% and 83.4%, respectively, to 25, 45 and 60 days of pregnancy. The embryo and fetal mortality and abortion rates were, respectively, 4.6%, 4.7% and 1.2%. The accurate early pregnancy diagnosis and fetal sexing were, respectively, 88.5% and 90.7%. The ultrasound was efficient to evaluate early pregnancy (25th day), embryo mortality (25th to 45th days), fetal mortality (45th to 60th days) and sexing (60th day). The detection of early pregnancy can be applied to establish the stages of highest embryo and fetal mortality rates in zebu cattle. This study revealed that embryo and fetal mortality rates in Bos indicus were not caused by ultrasound examination.Este trabalho avaliou a eficácia do ultra-som no diagnóstico precoce de prenhez e nas avaliações das mortalidades embrionárias e fetais e dos sexos de fetos em dois grupos de vacas zebuínas. Os animais que não retornaram ao estro aos 21 dias da Inseminação Artificial (G1) ou aos 14 dias da Transferência de Embriões (G2B) foram examinados aos 25 dias de gestação para o diagnóstico precoce de prenhez, aos 45 dias para avaliação das perdas embrionárias entre 26 e 45 dias e aos 60 dias para avaliações das perdas fetais entre 45 e 60 dias e dos sexos de fetos. O Grupo G2A foi examinado por palpação retal aos 45 dias para diagnóstico de prenhez e aos 60 dias para avaliações das perdas fetais e dos sexos de fetos. As taxas de prenhez foram, respectivamente, 94,6%, 88,1% e 83,4% aos 25, 45 e 60 dias de gestação. As taxas de perdas embrionárias e fetais e de abortos foram, respectivamente, 4,6%, 4,7% e 1,2%. As taxas de acertos do diagnóstico precoce de gestação e dos sexos de fetos foram 88,5% e 90,7%, respectivamente. A ultra-sonografia mostrou-se eficaz no diagnóstico precoce de prenhez aos 25 dias, nas avaliações das perdas embrionárias aos 45 dias e fetais aos 60 dias e no diagnóstico do sexo de fetos a partir dos 60 dias de gestação. Os exames ultra-sonográficos não causaram perdas gestacionais nos animais Bos indicus ou Bos indicus X Bos taurus

Determinação de valor nutritivo do resíduo de cultura de soja (Glycine Max (L) Merril) variedade Santa Rosa, através de ensaio de digestibilidade (aparente) com bovinos

A digestion trial was conducted with two steers, to study the nutritive value of soybean fodder (Glycine Max (L) Merril). The following digestible nutrients were obtained: DDM = 57.58%; DP = 2.83%; DCF = 32.32%; DNFE = 20.52%; DEE = 1.35% and TDN = 57.03%.O resíduo da cultura de soja (Glycine Max (L) Merril) var. Santa Rosa, foi estudado quanto ao seu valor nutritivo, utilizando-se de dois bovinos em gaiolas de digestibilidade. Os nutrientes digestíveis encontrados foram: MSD =57,58%; PD =2,83%; FD =32,32%; ENND = 20,52%; EED = 1,35% e NDT = 57,03%

Efeitos do crioprotetor e da temperatura de imersão em nitrogênio líquido sobre o desenvolvimento in vivo e in vitro de mórulas de camundongos

Os efeitos das temperaturas de imersão em nitrogênio líquido e dos métodos de remoção dos crioprotetores foram avaliados em mórulas de camundongos congeladas em etilenoglicol (E), propilenoglicol (P) e glicerol (G). Os embriões foram equilibrados em E (1,5M), P (1,5M) ou G (1,4M) por 10 minutos e envasados em palhetas de 0,25 ml com crioprotetor nas três colunas (E1, P1 G1) ou PBS nas colunas das extremidades (E2, P2). As palhetas foram resfriadas a 0,5ºC/minuto até -25 ou -30ºC e imersas em nitrogênio líquido. A descongelação dos embriões foi feita em água a 22ºC por 20 segundos. O crioprotetor dos embriões congelados em glicerol (Gl) foi removido em 3 etapas, dos congelados em etilenoglicol e propilenoglicol com crioprotetor nas 3 colunas (El e Pl) removido diretamente em PBS e dos congelados em etilenoglicol e propilenoglicol com PBS nas colunas das extremidades (E2, P2), após mistura das três colunas dentro da palheta, em PBS. Não houve influência da temperatura de imersão sobre o desenvolvimento embrionário in vitro, observando maior taxa (p < 0,0001) para El (69,2%) que para E2 (60,3%), Gl (51,9%) e a combinação P1 e P2 (46,9%). Para o desenvolvimento in vivo, a taxa de fetos foi menor (p < 0,07) para o grupo E1-25 do que para o Controle; Gl-30ºC; El-30ºC e E2-25ºC. Pode-se concluir que in vitro o melhor crioprotetor foi o etilenoglicol com remoção direta em PBS e que in vivo o etilenoglicol e o glicerol foram semelhantes a -30ºC.The effects of plunging temperature in liquid nitrogen and cryoprotectant dilution methods were evaluated for compacted mouse morulae frozen in 1.5 M ethylene-glycol (E), 1.5M propylene-glycol (P) or 1.4M glycerol (G). Morulae were equilibrated for 10 minutes in cryoprotectant solution and loaded into 0.25 ml straws with cryoprotectant solution in 3 columns (groups E1, P1, G1) or cryoprotectant in the center and PBS in the lateral columns (E2, P2). Straws were cooled at 0.5ºC/min to -25 or -30ºC and plunged into liquid nitrogen. Straws were thawed in water at 22ºC for 20 seconds. Cryoprotectant was diluted in 3 steps for group G1 and in one step for groups E1 and P1 (direct transfer to PBS + 10% FCS) and E2 and P2 (shaken to mix the 3 columns before transferring to PBS+ 10% FCS). Plunging temperature had no significant effect on the proportion of morulae developed to blastocysts in vitro; this proportion was higher (p < 0.0001) in E1 (69.2%) than in E2 (60.3%), G1 (51.9%) and combined for P1 and P2 (46.9%). In second experiment, the proportion of transferred morulae that developed to viable fetuses was lower (p < 0.07) for E1-25 than for E1-30, G1-30, E2-25 or unfrozen (control) embryos (8.7, 20.0, 20.0, 17.4 and 19.8%, respectively). In conclusion, the ethylene glycol diluted directly in PBS (E1) exhibit the highest rate of in vitro embryos development, but based on in vivo embryos development was more efficacious in plunging temperature at -30ºC (E1-30)

Eletroejaculação e características seminais em chinchila (Chinchilla laniger)

O método da eletroejaculação foi utilizado em chinchila através de eletrodo introduzido a 3 cm no reto do animal, obtendo-se os melhores resultados com uma série de 9 choques de 12,5 mA, 6 choques de 25,0 mA e 19 choques de 50,0 mA. O sêmen obtido nestas condições foi considerado de boa qualidade, comportando-se satisfatoriamente tanto no processo de congelamento, quanto no descongelamento.Semen collection in Chinchilla was attained through electroejaculation with an electrode inserted 3cm deep in the rectum, utilizing a series of 9 shocks of 12.5 mA, 6 shocks of 25.0 mA and 19 shocks of 50.0 mA. Material obtained was considered of good quality, both for freezing and thawing

Alterações do quadro espermático de cães infectados experimentalmente com Brucella canis

Semen alterations of 2 mongrel, adult dogs, experimentally infected with Brucella canis (ES 11/78), were studied, during a period for 12 weeks. Volume, motility, concentration and spermatic pathology were observed. The latter was estimated by two methods: the William’s stain and the glutaraldehyde 0.2% in differential interference contrast microscopy. Semen volume didn’t show significant alteration, while spermatic concentration showed a moderated oscilation, specially, a decrease in the 7th week after inoculation. It was also observed a reduction in the sperm motility. Among the morphologic alterations of spermatozoa, middle piece defects, coiled tails, proximal and distal droplets, head agglutination, and also the presence of inflammatory cells, such as neutrophiles and macrophages, were noted.Estudou-se o quadro espermático de 2 cães adultos, sem raça definida, infectados experimentalmente com Brucella canis ( IS 11/78), durante um período do 12 semanas. Observaram-se volume, motilidade e patologia espermática. Esta foi avaliada por dois métodos: pela coloração de William e pela técnica do glutaraldeído a 0,2% em microscopia do contraste de interferência diferencial. O volume seminal não mostrou alteração significante, enquanto que a concentração espermática revelou unia oscilação moderada, especialmente uma diminuição na 7ª semana após a inoculação. Observou-se também, uma redução na motilidade espermática. Dentre as alterações morfológicas dos espermatozoides, observaram-se defeitos de peça intermediaria, cauda enrolada, golas citoplasmáticas proximal e distal, aglutinação de cabeça, assim como a presença de células inflamatórias, tais como neutrófilos e macrófago

Effect of interrupted weaning on fertility in a herd of Nelore cows

O experimento foi realizado no município de Poconé, Pantanal Matogrossense, Brasil, utilizando 75 vacas da raça Nelore, em criação extensiva, cujos bezerros estavam com 3 a 4 meses de idade. Os animais foram separados em 3 grupos de 25, identificados por brincos de cores azul, vermelha e amarela. Os grupos amarelo e vermelho sofreram interrupção do aleitamento por meio de tabuletas especiais fixadas nos focinhos dos bezerros, respectivamente, por 10 e 15 dias. O grupo azul figurou como testemunha. A ocorrência de cio foi observada diariamente durante 45 dias, nos horários de 7 às 8 e das 17 às 18 horas. O diagnóstico de gestação foi efetuado através de palpação retal, decorridos 60 dias do término do experimento. A interrupção do aleitamento, independentemente se realizada por 10 ou 15 dias, aumentou em 41% o número de vacas em cio e acarretou cerca de 40% a mais de vacas prenhes.This experiment was conducted at Pocone county in the Pantanal of Mato Grosso State, Brazil, including 75 Nelore cows under range conditions with their calves 3 to 4 months of age. Cows were separated into 3 groups of 25, each group with ear tags of different colours: blue, red and yellow. Calves of red and yellow groups were subjected to interrupted weaning for 10 and 15 days, respectively, through adevice in their noses. Blue group acted as control. Estrus was detected by twice a day observations during 45 days, from 7 to 8 a.m. and 5 to B p.m. Pregnancy diagnosis was mad e throuh rectal palpation BO days after the end of the experiment. Interrupted weaning, for 10 or 15 days, increased both number of cows in estrus (41%) and pregnancy rate (40%)

Eficiência da recuperação de embriões e os efeitos de consecutivas colheitas sobre o aparelho reprodutor de doadoras da espécie caprina

The purpose of this trial was to compare the efficiency and effect of consecutive embryo recoveries by three different methods (T1 - transcervical; T2 laparoscopy and T3 laparotomy) on the reproductive activity of goat donors. Ten goats were allocated into each treatment (T1, T2 and T3) and submitted to three consecutive embryo recoveries. These were performed 56 days apart. The superovulation begun on 8th day of oestrus synchronization and all goats received 250 UI of porcine FSH splited into eight decreasing dosages at 12 hours intervals. The embryo recovery took place on the 5th or 6th day from the last mating. Fifty-six days after the third recovery of embryos, the animals were sacrified and the genital tract was evaluated. The time spent to recovery the embryos was 21min 32sec; 37min 14sec and 56min 22sec, respectively to T1; T2 and T3 (p<0.01). T3 showed the highest recovery rate of washing solution (83.7%), followed by T2 (72.2%) and T1 (64.3%) (p<0.05). Embryo recovery rate had as mean values, 57.1; 81.1 and 27.3%, respectivily to T1, T2 and T3. The variation ranged between 0 and 100%. Several factors affected the embryo recovery rate, such as the presence of demised corpora lutea, the ovulation rate and the presence of adhesions in the genital tract. Nonetheless, embryo recevery rate was acceptable in all treatments. The T1 caused eversion of endometrium and adherence between the uterine horn and epiploon in one animal, the T2 caused 30, 40 and 60% of endometrium eversion and 10, 10 and 70% adherence on genital tract, respectively, for the first, second and third embryo recovery. The T3 caused 80% of adherence on genital tract after the first embryo recovery and 100% after the second. It is possible to use the methods T1 and T2 to recovery embryos in goats.O objetivo deste experimento foi comparar a eficiência e o efeito de consecutivas colheitas de embriões, por três diferentes métodos (transcervical-T1, laparoscopia-T2 e laparotomia-T3), sobre a atividade reprodutiva de doadoras da espécie caprina. Utilizaram-se 10 cabras em cada método (T1, T2 e T3), sendo as colheitas de embriões repetidas três vezes consecutivas, nas mesmas fêmeas, com intervalo de 56 dias. As fêmeas foram sincronizadas com esponjas vaginais impregnadas com 60 mg de acetato de medroxiprogesterona durante 10 dias e 100 µg de cloprostenol aplicados pela via IM no oitavo dia da sincronização. No 8º dia, iniciou-se a superovulação com 250 UI de FSH de origem suína, divididas em oito doses decrescentes, aplicadas em intervalo de 12 horas. As fêmeas foram acasaladas e as colheitas de embriões realizadas no 5º ou 6º dia após a última cobertura. Após 56 dias da terceira colheita de embriões, foram realizados o abate e a necrópsia das doadoras. O tempo necessário para a colheita de embriões em cada método foi de 21 minutos e 32 segundos; 37 minutos e 14 segundos e 56 minutos e 22 segundos, respectivamente, para T1, T2 e T3 (p<0,01). A maior taxa de recuperação da solução de lavagem foi no T3 (83,7%), seguido por T2 (72,2%) e T1 (64,3%) (p<0,05). As taxas médias de recuperação dos embriões foram 57,1; 81,1 e 27,3% para T1, T2 e T3, respectivamente, com variação entre 0-100%. A taxa de recuperação de embriões sofreu influência de vários fatores, como a presença de corpos lúteos regredidos, a taxa de ovulação e a presença de aderências no sistema genital, mas, isoladamente, a taxa de recuperação de embriões foi satisfatória nos três métodos. O T1 causou eversão do endométrio e aderência entre o corno uterino e o epíploo em uma única fêmea, o T2 causou eversão do endométrio em 30%, 40% e 60% e aderências do sistema genital em 10%, 10% e 70% das fêmeas à 1ª, 2ª e 3ª colheitas, respectivamente. O T3 causou aderências no sistema genital em 80% das doadoras após a primeira e 100% após a segunda colheita. O T1 e o T2 permitem o uso de doadoras em repetidas colheitas de embriões, o que não ocorre com o T3, que causa aderências no sistema genital e órgãos circunvizinhos em 100% dos casos

Estudo comparativo entre as microscopias de contraste de fase e contraste de interferência diferencial para análise de sêmen congelado de bovinos

Two hundred ampules of frozen bull semen were evaluated for per cent acrosomal pathology and major and minor defects of spermatozoa. The ampules referred to 4 groups of 50 each, corresponding to semen frozen in 1975, 1976, 1977 and 1978. Semen examinations were made after thawing and after being placed in a 38°C water bath for 5 hours (Slow Thermo resistance Test) or in a 45°C water bath for 1 hour (Quick Thermo resistance Test). Analysis of variance showed highly significant differences (P<.01)between phase-contrast and differential interference contrast microscopies for evaluation of acrosomal pathology and major defects of spermatozoa. For minor defects analysis of variance did not show statistical differences between the two technics employed.Duzentas ampolas de sêmen de bovinos, constituindo 4 grupos de 50, correspondentes a congelamentos efetuados, respectivamente, nos anos de 1975, 1976, 1977 e 1978, foram estudadas para avaliação da porcentagem de patologia do acrossomo e de defeitos maiores e menores. Os exames foram realizados após o descongelamento e após submissão às provas rápida (1 hora a 45°C) e lenta (5 horas a 38°C) de termo resistência, em microscopia de contraste de fase e em microscopia de contraste de interferência diferencial. Os resultados das análises de variância mostraram haver diferença estatística, altamente significante (P<0,01), a favor da microscopia de contraste de interferência diferencial para patologia do acrossomo e defeitos maiores, o mesmo não ocorrendo em relação aos defeitos menores

Desenvolvimento in vitro de embriões bovinos cultivados sob diferentes concentrações de soro fetal bovino e tipos celulares

The present work was carried out to evaluate the in vitro development of bovine embryo co-cultured in granulosa, oviduct, BRL or VERO cells co-cultures, supplemented with 5% or 10% of Fetal Calf Serum (FCS). Cummulus oocyte complexes were aspirated, matured and fertilized in vitro. Embryonic structures were divided into eight treatments. They were placed in culture media TCM 199 containing granulosa, oviduct, BRL or VERO cells, each of them added with 5% or 10% FCS. The conditions for the co-culture were 38.5 ºC, 5% CO2 in air and high humidity for ten consecutive days. Cleavage, blastocyst and hatching rates did not differ (p &gt; 0.05) in co-culture with primary cells (granulosa and oviduct) when FCS concentration increased from 5 to 10%. However, in continuous cells co-culture (BRL and VERO), when FCS concentration increased from 5% to 10%, the blastocyst development rate decreased significantly (p < 0.05) from 33.6 to 16.3% and from 40 to 16.5% in embryo co-culture with BRL and VERO cells, respectively.O presente trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar o desenvolvimento in vitro de embriões bovinos co-cultivados em células da granulosa, do oviduto, BRL e VERO, suplementados com 5% ou 10% de Soro Fetal Bovino (SFB). Os complexos cummulus oócitos foram aspirados, maturados e fecundados in vitro. As estruturas embrionárias foram divididas em oito tratamentos: co-cultivo em TCM 199 contendo células da granulosa, do oviduto, BRL ou VERO adicionadas com 5% ou 10% de SFB. As condições de cultivo foram 38.5 ºC, 5% CO2 em ar e alta humidade por dez dias consecutivos. Os índices de clivagem, blastocisto e eclosão não diferiram (p &gt; 0,05) no co-cultivo com células primárias (granulosa e oviduto) quando a concentração de SFB aumentou de 5 para 10%. Entretanto, no co-cultivo com células de linhagens contínuas (BRL e VERO), quando a concentração de SFB aumentou de 5% para 10%, os índices de blastocistos diminuíram significativamente (p &lt; 0,05) de 33,6 para 16,3 % e de 40 para 16,5% nos embriões bovinos co-cultivados com células VERO e BRL, respectivamente