Evaluación de proteínas de una isla de patogenicidad y de envolturas bacterianas de Escherichia coli 0157:H7 como vacunas para reducir su incidencia en bovinos

Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) is the pathogen responsible for the hemolytic uremic syndrome (HUS). Argentina has the world's highest incidence of HUS in children under five years. The serotype O157:H7 is the most prevalent in patients with HUS. Cattle are the primary reservoir of EHEC O157:H7, and the main source of infection for humans. Vaccination of cattle constitutes a pre-slaughter intervention strategy to reduce shedding of EHEC O157:H7. In this work, two vaccines were evaluated: the first comprises recognized colonization factors, Intimin and EspB proteins recombinantly produced; the second consisting of EHEC O157:H7 bacterial envelopes. An experimental inoculation model was developed, then a vaccination test for each vaccine with subsequent challenge was carried out. Our results indicate that systemic immunization with two doses of vaccine with recombinants EspB and Intimin could reduce the colonization and shedding of EHEC O157:H7. Colonization time and magnitude of excretion were also reduced by subcutaneous immunization of calves with O157: H7 bacterial envelopes. Additional trials would be needed to evaluate the efficacy of vaccines in calves under natural conditions.Fil: Vilte, Daniel Alejandro. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; ArgentinaEscherichia coli enterohemorrágico (EHEC) es el patógeno que responsable del síndrome urémico hemolítico (SUH. Argentina tiene la mayor incidencia mundial de SUH en niños menores de 5 años. El serotipo O157:H7 es el más frecuente en pacientes con SUH. El ganado bovino es el reservorio primario de EHEC O157:H7, y la principal fuente de infección para humanos. La vacunación del ganado bovino constituye una estrategia de intervención prefaena para reducir la excreción de EHEC O157:H7. En este trabajo se evaluaron dos vacunas: la primera compuesta por 2 factores de colonización, las proteínas Intimina y EspB, producidas de modo recombinante; la segunda consistente en envolturas bacterianas de EHEC O157:H7. Se desarrolló un modelo de inoculación experimental de EHEC, luego se llevó a cabo un ensayo de vacunación con desafío posterior para cada vacuna. Nuestros resultados indican que la inmunización sistémica con dos dosis de la vacuna con Intimina y EspB recombinantes podría reducir la colonización y la excreción de EHEC O157:H7 en terneros. También se redujeron el tiempo de colonización y la magnitud de la excreción por la inmunización subcutánea con envolturas bacterianas de O157:H7. Se necesitarían ensayos adicionales para evaluar la eficacia de las vacunas en terneros en condiciones naturales

Necrotic enteritis in young calves

Non-enterotoxin (CPE)-producing Clostridium perfringens type A has been associated with enteritis in calves. Recent evidence has suggested that a novel toxin, named beta2 (CPB2), is implicated in the pathogenesis of this disease, although there is little evidence supporting this. In the current study, the role of C. perfringens type A in an outbreak of enteritis in calves was studied. Two 20-day-old dairy calves exhibiting apathy and reluctance to eat, with paresis of the anterior limbs, were euthanized for postmortem examination. Gross and histological changes compatible with acute enteritis, rumenitis, meningitis, and pneumonia were seen in both calves. Clostridium perfringens type A non-CPE, non-CPB2 was isolated from the abomasum and the small intestine. Escherichia coli ONT:H8 (with cdtBIII and f17 virulence genes detected by polymerase chain reaction) was also isolated from the brain, abomasum, and intestine from both calves. All the samples were negative for Salmonella spp. When the C. perfringens strain was inoculated into bovine ligated small and large intestinal loops, cell detachment, erosion, and hemorrhage of the lamina propria were observed, predominantly in the small intestine. The results suggest that non-CPE, non-CPB2 C. perfringens type A is able to induce pathologic changes in the intestine of calves, probably enhanced by other pathogens, such as some pathogenic E. coli strains.Fil: Morris, Winston Eduardo. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias; ArgentinaFil: Venzano, Agustín J.. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias; ArgentinaFil: Elizondo, Ana. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias; ArgentinaFil: Vilte, Daniel Alejandro. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias; ArgentinaFil: Mercado, Elsa Cristina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias; ArgentinaFil: Fernandez Miyakawa, Mariano Enrique. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Detección de la mutación responsable de α-manosidosis en bovinos cruza Angus de Argentina

PosterLa α-manosidosis es una enfermedad de almacenamiento lisosomal causada por la acumulación intracitoplasmática de hidratos de carbono, debido a un defecto congénito o adquirido de la enzima α-manosidasa. La forma congénita ha sido descripta para diversas razas. En la raza Angus, esta ocurre en animales homocigotas que posean una mutación puntual (transición) en el exón 7 del gen que codifica la enzima. Esto produce el cambio de una base T por una C en la posición 961 del gen que sustituye un aminoácido, dando como resultado una proteína defectuosa con actividad nula. Generalmente los terneros afectados no sobreviven al período postnatal, y los que lo hacen muestran enfermedad neurológica progresiva y severa caracterizada por temblores de cabeza, ataxia y agresividad que termina en la muerte. Si bien su diagnóstico puede realizarse por varios métodos, para determinar el origen congénito del cuadro es necesario determinar la homocigocis para el alelo alterado en animales afectados, lo cual es necesario tambien para prevenir la aparición de la enfermedad. El objetivo del presente trabajo fue aplicar un procedimiento previamente descripto para determinar la presencia de animales portadores de la mutación responsable de la α-manosidosis en bovinos cruza Angus de un establecimiento de cría de Argentina.Instituto de PatobiologíaFil: Vilte, Daniel Alejandro. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología Veterinaria; ArgentinaFil: Garro, Carlos Javier. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología Veterinaria; ArgentinaFil: Ebinger, Maren. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; ArgentinaFil: Morris, Winston Eduardo. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología Veterinaria; ArgentinaFil: Olguin Perglione, Cecilia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; ArgentinaFil: Garbaccio, Sergio Gabriel. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología Veterinaria; ArgentinaFil: Delgado, Fernando Oscar. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología Veterinaria; Argentin

Early immune innate hallmarks and microbiome changes across the gut during Escherichia coli O157: H7 infection in cattle

The zoonotic enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) O157: H7 bacterium causes diarrhea, hemorrhagic colitis, and hemolytic uremic syndrome (HUS) in humans. Cattle are primary reservoirs and EHEC O157: H7; the bacteria predominately inhabit the colon and recto-anal junctions (RAJ). The early innate immune reactions in the infected gut are critical in the pathogenesis of EHEC O157: H7. In this study, calves orally inoculated with EHEC O157: H7 showed infiltration of neutrophils in the lamina propria of ileum and RAJ at 7 and 14 days post-infection. Infected calves had altered mucin layer and mast cell populations across small and large intestines. There were differential transcription expressions of key bovine β defensins, tracheal antimicrobial peptide (TAP) in the ileum, and lingual antimicrobial peptide (LAP) in RAJ. The main Gram-negative bacterial/LPS signaling Toll-Like receptor 4 (TLR4) was downregulated in RAJ. Intestinal infection with EHEC O157: H7 impacted the gut bacterial communities and influenced the relative abundance of Negativibacillus and Erysipelotrichaceae in mucosa-associated bacteria in the rectum. Thus, innate immunity in the gut of calves showed unique characteristics during infection with EHEC O157: H7, which occurred in the absence of major clinical manifestations but denoted an active immunological niche.Fil: Larzabal, Mariano. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Marques Da Silva, Wanderson. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Multani, Anmol. University of Calgary; CanadáFil: Vagnoni, Lucas Emilio. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Moore, Dadin Prando. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Marin, Maia Solange. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Riviere, Nahuel Agustín. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Delgado, Fernando Oscar. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Patobiología; ArgentinaFil: Vilte, Daniel Alejandro. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Patobiología; ArgentinaFil: Romero Victorica, Matias. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Ma, Tao. University Of Alberta. Faculty Of Agricultural, Life And Environmental Sciences. Departament Of Agricultural, Food And Nutritional Science.; CanadáFil: Le Guan, Luo. University Of Alberta. Faculty Of Agricultural, Life And Environmental Sciences. Departament Of Agricultural, Food And Nutritional Science.; CanadáFil: Talia, Paola Monica. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Cataldi, Angel Adrian. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Cobo, Eduardo R.. University of Calgary; Canad

Evaluación de proteínas de una isla de patogenicidad y de envolturas bacterianas de Escherichia coli 0157:H7 como vacunas para reducir su incidencia en bovinos

Tesis para obtener el grado de Doctor en Farmacia y Bioquímica Ciencias Biológicas, de la Universidad de Buenos Aires, en 2015Escherichia coli enterohemorrágico (EHEC) es un patógeno que puede causar diarrea, colitis hemorrágica, y síndrome urémico hemolítico (SUH), una enfermedad sistémica grave que afecta principalmente a los niños. En Argentina el SUH se considera endémico, y se observa la mayor incidencia anual en niños menores de 5 años entre los países con sistema de registro; se estiman aproximadamente 500 casos por año. El serotipo prototípico de EHEC es O157:H7 debido a que es el más frecuentemente encontrado en pacientes. El ganado bovino es el reservorio primario de EHEC O157:H7, y la principal fuente de infección para los humanos. La vacunación del ganado bovino puede ser una estrategia de intervención pre-faena para reducir la excreción fecal de EHEC O157:H7 y disminuir, en consecuencia, el riesgo de infección en humanos. La inoculación con una vacuna contra EHEC O157:H7 compuesta por estructuras de la superficie bacteriana podría inducir una respuesta inmune capaz de reducir la colonización intestinal del ganado. En este estudio se evaluaron dos tipos de vacunas. Por una parte, se diseñó una vacuna a partir de la selección de factores de colonización reconocidos, como las proteínas Intimina y EspB, que se produjeron en forma recombinante. Por otra parte, se evaluó una vacuna consistente en envolturas bacterianas de Escherichia coli O157:H7 libres de ADN. Para poder evaluar la eficacia de las vacunas propuestas fue necesario desarrollar un modelo de inoculación experimental en bovinos. A continuación se llevó a cabo un ensayo de vacunación con desafío posterior para cada vacuna. Nuestros resultados indican que la inmunización sistémica con dos dosis de una vacuna que contiene Intimina y EspB recombinantes podría reducir la colonización y la excreción de EHEC O157:H7 en terneros. También se pudo reducir la colonización y excreción en terneros por la inmunización subcutánea d envolturas bacterianas de O157:H7. Se necesitarían ensayos adicionales a campo para evaluar la eficacia de las vacunas para reducir la portación de Escherichia coli O157:H7 en terneros en condiciones naturales.Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) is a pathogen that can cause diarrhea, hemorrhagic colitis, and hemolytic uremic syndrome (HUS), severe systemic disease that primarily affects children. In Argentina, HUS is considered endemic, and shows the highest annual incidence in children less than five years among the countries with registration system; and approximately 500 cases per year are estimated. Prototypical EHEC serotype is O157:H7 because it is most often found in patients. Cattle are the primary reservoir of EHEC O157:H7, and the main source of infection for humans. Vaccination of cattle can be an intervention strategy for reducing pre-slaughter fecal excretion of EHEC O157:H7 and decrease the risk of human infection. Inoculation with a vaccine against EHEC O157:H7 composed of bacterial surface structures may induce an immune response capable of reducing the intestinal colonization of cattle. In this study two types of vaccines were evaluated. On one hand, a vaccine was designed based on the selection of recognized colonization factors as Intimin and EspB proteins, which were produced in recombinant form. Furthermore, we evaluated a vaccine consisting of DNA free bacterial envelopes of Escherichia coli O157:H7. In order to evaluate the efficacy of the vaccines, a model of experimental inoculation in cattle was necessary to develop. Subsequently, a vaccination trial with a challenge to each vaccine was conducted. Our results indicate that systemic immunization with two doses of a vaccine containing recombinant EspB and Intimin could reduce the excretion and colonization of EHEC O157:H7 in calves. Subcutaneous immunization with Escherichia coli O157:H7 envelopes also could reduce colonization and excretion in calves. It would be required additional field trials to assess the effectiveness of vaccines to reduce the carriage of Escherichia coli O157:H7 in calves under natural conditions.Instituto de PatobiologíaFil: Vilte, Daniel Alejandro. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiologia; Argentin

The intranasal vaccination of pregnant dams with Intimin and EspBconfers protection in neonatal mice from Escherichia coli (EHEC)O157:H7 infection

Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) O157:H7 is responsible for intestinal disease and hemolytic uremic syndrome (HUS), a serious systemic complication which particularly affects children. In this study, we evaluated whether passive immunization protects from EHEC O157:H7 colonization and renal damage, by using a weaned BALB/c mouse model of infection. Recombinant proteins EspB and the carboxyl-terminal fragment of 280 amino acids of γ-intimin (γ-Int C280) were used in combination with a macrophage-activating lipopeptide-2 (MALP) adjuvant to immunize pregnant mice by the intranasal route. Neonatal mice were allowed to suckle vaccinated or sham-vaccinated dams until weaning when they were challenged by the oral route with a suspension of an E. coli O157:H7 Stx2+ strain. The excretion of the inoculated strain was followed for 72 h. All vaccinated dams exhibited elevated serum IgG response against both γ-Int C280 and EspB. Passive immunization of newborn mice resulted in a significant increase in serum IgG titers against γ-Int C280 and a slight increase in EspB-specific antibodies. The neonates from vaccinated dams showed a significant reduction in EHEC O157:H7 colonization 48 h post challenge. In addition, the level of plasma urea concentration, a marker of renal failure, was significantly higher in offsprings of sham-vaccinated mice. In conclusion, vaccination of pregnant dams with γ-Int C280 and EspB could reduce colonization and systemic toxicity of EHEC O157:H7 in their suckling offsprings.Fil: Rabinovitz, Bettina Carol. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología; ArgentinaFil: Larzabal, Mariano. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Vilte, Daniel Alejandro. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología; ArgentinaFil: Cataldi, Angel Adrian. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Mercado, Elsa Cristina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología; Argentin

The intranasal vaccination of pregnant dams with Intimin and EspB confers protection in neonatal mice from Escherichia coli (EHEC) O157: H7 infection

Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) O157:H7 is responsible for intestinal disease and hemolytic uremic syndrome (HUS), a serious systemic complication which particularly affects children. In this study, we evaluated whether passive immunization protects from EHEC O157:H7 colonization and renal damage, by using a weaned BALB/c mouse model of infection. Recombinant proteins EspB and the carboxyl-terminal fragment of 280 amino acids of -intimin (-Int C280) were used in combination with a macrophage-activating lipopeptide-2 (MALP) adjuvant to immunize pregnant mice by the intranasal route. Neonatal mice were allowed to suckle vaccinated or sham-vaccinated dams until weaning when they were challenged by the oral route with a suspension of an E. coli O157:H7 Stx2+ strain. The excretion ofthe inoculated strain was followed for 72 h. All vaccinated dams exhibited elevated serum IgG response against both -Int C280 and EspB. Passive immunization of newborn mice resulted in a significantincrease in serum IgG titers against -Int C280 and a slight increase in EspB-specific antibodies. The neonates from vaccinated dams showed a significant reduction in EHEC O157:H7 colonization 48 h post challenge. In addition, the level of plasma urea concentration, a marker of renal failure, was significantly higher in offsprings of sham-vaccinated mice. In conclusion, vaccination of pregnant dams with -Int C280 and EspB could reduce colonization and systemic toxicity of EHEC O157:H7 in their suckling offsprings.Fil: Rabinovitz, Bettina Carol. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Patobiología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Larzabal, Mariano. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Vilte, Daniel Alejandro. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Patobiología; ArgentinaFil: Cataldi, Ángel Adrián. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Mercado, Elsa Cristina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Patobiología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Physiopathological effects of Escherichia coli O157:H7 inoculation in weaned calves fed with colostrum containing antibodies to EspB and Intimin

Escherichia coli O157:H7 is responsible for severe intestinal disease and hemolytic uremic syndrome (HUS), a serious systemic complication which particularly affects children. Cattle are the primary reservoir for E. coli O157:H7 and the main source of infection for humans. In this study, we evaluated the ability of transferred maternal colostral antibodies against gamma-Intimin C280 and EspB, to protect young weaned calves from E. coli O157:H7 infection. Hyperimmune colostra were obtained by immunization of pregnant cows with a mix of the mentioned antigens. All vaccinated cows mounted a significant IgG response against gamma-Intimin C280, and EspB in sera and colostra. Colostrum-fed calves also exhibited high serum IgG titers against gamma-Intimin C280 and EspB along with a rise in mucosal gamma-Intimin C280-specific IgG antibodies at recto-anal junction and ileum. Additionally, 70 day-old calves received a challenge with E. coli O157:H7 but no reduction in total bacterial shedding or frequency of E. coli O157:H7 excretion from these calves was observed. Most tissue samples showed granulocyte focal infiltrations of the lamina propria and enterocyte erosion. In conclusion, up to the 70th day, the passively acquired gamma-Intimin-C280 and EspB-IgG antibodies present in sera and recto-anal mucosa reached a titer insufficient to reduce EHEC O157 shedding and damages of experimentally inoculated young calves.Fil: Ravinovitz, Bettina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Patobiología; ArgentinaFil: Vilte, Daniel Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Patobiología; ArgentinaFil: Larzabal, Mariano. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Abdala, Alejandro Ariel. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Santa Fe. Estación Experimental Agropecuaria Rafaela. Laboratorio de Mastitis y Calidad de Leche; ArgentinaFil: Galarza, Roxana. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Santa Fe. Estación Experimental Agropecuaria Rafaela. Laboratorio de Mastitis y Calidad de Leche; ArgentinaFil: Zotta, Elsa. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Ciencias Fisiológicas. Laboratorio de Fisiopatogenia; ArgentinaFil: Ibarra, Cristina Adriana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Ciencias Fisiológicas. Laboratorio de Fisiopatogenia; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Mercado, Elsa Cristina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Patobiología; ArgentinaFil: Cataldi, Ángel Adrián. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; Argentin

Occurrence of Cryptosporidium and other enteropathogens and their association with diarrhea in dairy calves of Buenos Aires province, Argentina

Cryptosporidiosis of neonatal dairy calves causes diarrhea, resulting in important economic losses. In Argentina, prevalence values of Cryptosporidium spp. and other enteropathogens such as group A rotavirus (RVA), bovine coronavirus (BCoV) and enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC, endotoxin STa+), have been independently studied in different regions. However, an integrative epidemiological investigation on large-scale farms has not been carried out. In this study, fecal samples (n = 908) were randomly collected from diarrheic and healthy calves from 42 dairy farms, and analyzed for the presence of Cryptosporidium spp., RVA, BCoV, ETEC (STa+) and Salmonella spp. In all sampled dairy farms, dams had been vaccinated against rotavirus and gram-negative bacteria to protect calves against neonatal diarrhea. The proportion of calves shedding Cryptosporidium spp., RVA, and BCoV in animals younger than 20 days of age were 29.8%, 12.4% and 6.4%, and in calves aged between 21 and 90 days, 5.6%, 3.9%, and 1.8%, respectively. ETEC was absent in the younger, and occurred only sporadically in the older group (0.9%), whereas Salmonella spp. was absent in both. The observed sporadic finding or even absence of bacterial pathogens might be explained by the frequent use of parenteral antibiotics in 25.3% and 6.5% of the younger and the older group of calves, respectively, within 2 days prior to sampling and/or vaccination of dams against gram-negative bacteria. Diarrhea was observed in 28.8% (95% CI, 24.7–32.8%) of the younger calves and 11.7% (95% CI, 9.1–15.5%) of the older calves. Importantly, Cryptosporidium spp. (odds ratio (OR) = 5.7; 95% CI, 3.3–9.9; p < 0.0001) and RVA (OR = 2.5; 95% CI, 1.2–5.1; p < 0.05) were both found to be risk factors for diarrhea in calves younger than 20 days old. Based on its high prevalence and OR, our results strongly suggest that Cryptosporidium spp. is the principal causative factor for diarrhea in the group of neonatal calves, whereas RVA seems to play a secondary role in the etiology of diarrhea in the studied farms, with about three-times lower prevalence and a half as high OR. Furthermore, a coinfection rate of Cryptosporidium spp. and RVA of 3.7% was observed in the group of younger calves, which strengthens the assumption that these events are independent. In contrast, due to a low infection rate of enteropathogens in older calves, mixed infection (<< 1%) was virtually absent in this group.Fil: Garro, Carlos. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Patobiología Veterinaria - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Patobiología Veterinaria; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires; ArgentinaFil: Morici, Gabriel Edgardo. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Patobiología Veterinaria - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Patobiología Veterinaria; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires; ArgentinaFil: Tomazic, Mariela Luján. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Patobiología Veterinaria - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Patobiología Veterinaria; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires; ArgentinaFil: Vilte, Daniel Alejandro. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Patobiología Veterinaria - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Patobiología Veterinaria; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires; ArgentinaFil: Encinas, Micaela. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Patobiología Veterinaria - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Patobiología Veterinaria; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires; ArgentinaFil: Vega, Celina Guadalupe. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires; ArgentinaFil: Bok, Marina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires; ArgentinaFil: Parreño, Gladys Viviana. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires; ArgentinaFil: Schnittger, Leonhard. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Patobiología Veterinaria - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Patobiología Veterinaria; Argentina. Universidad de Morón. Facultad de Ciencias Exactas, Químicas y Naturales; Argentin

Efficient immune responses against Intimin and EspB of enterohaemorragic Escherichia coli after intranasal vaccination using the TLR2/6 agonist MALP-2 as adjuvant

Mucosal vaccine formulations based on purified recombinant C280 γ-Intimin and EspB (Escherichia coli secreted protein B) from enterohaemorragic E. coli co-administered with a pegylated derivative of the TLR2/6 agonist MALP-2 (macrophage-activating lipopeptide) as adjuvant were evaluated in BALB/c mice. After intranasal vaccination, strong humoral and cellular immune responses were observed against C280 γ-Intimin and EspB. Sera of immunized mice inhibit bacterial haemolytic activity in vitro. Antigen-specific T-cell proliferation, IL-4, IL-2 and IFN-γ producing cells, and secretory IgA were mostly detected in animals receiving MALP-2 as adjuvant. These results suggest that C280 γ-Intimin and EspB are good candidate antigens to be incorporated into mucosal vaccines against this important pathogen.Fil: Cataldi, Ángel Adrián. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias Castelar. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Yevsa, Tetyana. Helmholtz Centre for Infection Research. Department of Vaccinology and Applied Microbiology; AlemaniaFil: Vilte, Daniel Alejandro. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias Castelar. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Patobiología; ArgentinaFil: Schulze, Kai. Helmholtz Centre for Infection Research. Department of Vaccinology and Applied Microbiology; AlemaniaFil: Castro-Parodi, Mauricio Omar. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina; ArgentinaFil: Larzabal, Mariano. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias Castelar. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Ibarra, Cristina Adriana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina; ArgentinaFil: Mercado, Elsa Cristina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias Castelar. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Patobiología; ArgentinaFil: Guzman, Carlos A.. Helmholtz Centre for Infection Research. Department of Vaccinology and Applied Microbiology; Alemani