Ocorrência e disseminação da microalga Gonyostomum semen em albufeiras portuguesas

Objetivos: Neste artigo pretende-se descrever a deteção de G. semen em amostras de água doce colhidas em albufeiras portuguesas. São ainda apresentados dados preliminares relativos à sua distribuição geográfica em território continental, no período entre 2009 e 2014

Avaliação do efeito da microcistina-LR no crescimento, sistema antioxidante e indução de apoptose em Saccharomyces cerevisiae

Neste trabalho pretendeu-se usar a levedura Saccharomyces cerevisiae como modelo para compreender melhor os mecanismos de toxicidade induzidos pela microcistina-LR. Este é o organismo eucariótico mais simples e estudado que tem sido amplamente utilizado como modelo no estudo de mecanismos de toxicidade, devido à facilidade de acesso à informação sobre o seu genoma (totalmente sequenciado e anotado), proteoma e processos bioquímicos correspondentes.Este trabalho foi parcialmente financiado pelo Programa Operacional Potencial Humano, pela Fundação para a Ciência e a Tecnologia através da Bolsa de pós-doc SFRH/BPD/75922/2011 e o Projeto PEst-C/MAR/LA0015/2013

Uso da levedura Saccharomyces cerevisiae para elucidar mecanismos de toxicidade da microcistina-LR

Até à data, foram já efetuados diversos estudos com vários organismos e linhas celulares para desvendar os mecanismos moleculares de toxicidade da microcistina, uma das mais frequentes hepatotoxinas produzida por cianobactérias. Em células de mamíferos, o mecanismo de toxicidade da microcistina é atribuída a um processo que envolve várias vias, um deles relacionado com a inibição das fosfatases proteicas PP1 / PP2A e outro com a produção de espécies reativas de oxigénio (ROS). Contudo, existem ainda algumas lacunas na identificação destes mecanismos, que impede a total caracterização do modo de ação desta toxina. Por forma a contribuir para a elucidação dos mecanismos de toxicidade da variante química microcistina-LR (MCLR), neste estudo foram avaliados os efeitos de várias concentrações de MCLR nos níveis de ROS, resposta do sistema antioxidante, indução de apoptose, expressão diferencial de proteínas e alteração da expressão génica na levedura Saccharomyces cerevisiae. Verificou-se que após coloração das células com fluorocromos, a exposição das células à toxina induziu um aumento dos níveis intracelulares dos ROS. Este aumento provocou uma ativação do sistema antioxidante, especialmente na resposta da catalase. Além disso, observou-se uma inibição da superóxido dismutase citosólica, o que em conjunto com o tipo de espécies reativas de oxigénio passíveis de estarem presentes, sugere que a ROS maioritariamente induzida é peróxido de hidrogénio (H2O2). Observaram-se ainda sinais de apoptose após avaliação por citometria de fluxo, usando um kit de Anexina V-FITC. Da análise proteómica, verificou-se que 14 proteínas foram diferencialmente expressas nas células expostas a diferentes concentrações de MCLR, quando comparada com o controlo. A análise da expressão relativa dos genes homólogos das PP1/PP2A e de genes BER envolvidos na reparação de DNA revelou que alguns destes apresentaram respostas diferenciais, dependentes da concentração de toxina usada. Os resultados obtidos neste estudo demonstram que a levedura Saccharomyces cerevisiae VL3 apresenta alguns dos principais efeitos tóxicos induzidos pela microcistina-LR em eucariotas superiores e o seu uso revelou que existem proteínas e genes alterados pela exposição à MCLR que são transversais a vários modelos eucarióticos

Prova do Suor no Diagnóstico Laboratorial da Fibrose Quistica

Objectivo: Apresentar a casuística da Prova do Suor, no período de 2009 a 2013 da UDR do DPS do INSA, I.P. Lisboa , e o estudo do gene CFTR, efetuado na Unidade de Genética Molecular, Departamento de Genética Humana, INSA, I.P. Lisboa

Iron Related Gene Expression and Biochemical Phenotype Support Iron Homeostasis Dysregulation in Alzheimer’s Disease

This research was supported by the Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT) [SFRH/BPD/29354/2006 to MM, SFRH/BD/60718/2009 to BS, and SFRH/BD/48671/2008 to LM]; Fundação Astrazeneca (Research Grant awarded through the “Programme of Support to Research”); Instituto Nacional de Saúde Dr. Ricardo Jorge; Portuguese Ministry of Health (Research Grant 53/2007 of the “Comissão de Fomento da Investigação em Cuidados de Saúde”); Lundbeck Portugal, Lda (Research Grant)

Decrease in APP and CP mRNA expression in Alzheimer’s disease patients suggests impairment of cellular iron export in this dementia

Recentemente tem-se assistido a um acumular de evidência sugerindo a implicação de uma desregulação do metabolismo do ferro (Fe) na fisiopatologia da doença de Alzheimer (DA). Neste trabalho, pretendemos esclarecer melhor os mecanismos moleculares subjacentes à homeostasia deste metal na DA, particularmente ao nível do efluxo celular. Assim, mediu-se em células mononucleares do sangue periférico de 73 doentes com DA e 74 controlos a expressão de genes diretamente envolvidos na regulação e exportação celular de Fe, utilizando a técnica de PCR quantitativo. Os resultados mostraram uma diminuição significativa na expressão dos genes aconitase (ACO1; P=0,007); ceruloplasmina (CP; P<0,001) e proteína precursora de beta amilóide (APP; P=0,006) em doentes com DA comparativamente com os voluntários saudáveis. Estas observações apontam para uma diminuição significativa da expressão dos genes associados com a exportação de Fe celular mediada pela ferroportina na DA. Assim, o presente estudo reforça resultados anteriores que mostram alterações no metabolismo do Fe e podem estar na origem da retenção intracelular deste metal e aumento de stress oxidativo caraterísticos desta patologia.A dysregulation of iron (Fe) metabolism in Alzheimer’s disease (AD) has been suggested previously. Herein, we intended to further clarify the molecular mechanisms underlying Fe homeostasis in AD particularly at the level of cellular iron efflux. Thus, the expression of specific Fe metabolism-related genes directly involved in Fe regulation and export was assessed by quantitative PCR in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from 73 AD patients and 74 controls. A significant decrease in the expression of aconitase 1 (ACO1; P=0.007); ceruloplasmin (CP; P<0.001) and amyloid peptide precursor (APP; P=0.006) genes was fund in AD patients compared with healthy volunteers. These observations point out to a significant downregulation of the expression of genes associated with ferroportin-mediated cellular Fe export in PBMCs from AD patients. The present findings support previous studies suggesting impairment of Fe homeostasis in AD, which may lead to cellular Fe retention and oxidative stress, a typical feature of this disease

Contributo para a avaliação não clínica do efeito do ião fluoreto sobre a fertilidade masculina

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Universitário Egas MonizIntrodução: A ingestão de doses significativas de ião fluoreto pode desencadear manifestações de natureza toxicológica. A fluorose dentária é um efeito colateral indesejável da ingestão excessiva de fluoreto. Para além dos efeitos negativos sobre o desenvolvimento dos dentes, uma exposição crónica e não-controlada a concentrações elevadas deste ião pode ter consequências nefastas noutros locais do organismo, nomeadamente nos órgãos reprodutores masculinos. No entanto, existe uma falta de consenso sobre os efeitos que o ião fluoreto nos órgãos de reprodução masculina. Objetivo: Avaliar o efeito da ingestão reiterada do ião fluoreto na função e estrutura dos órgãos reprodutores masculinos de duas espécies de roedores. Materiais e Métodos: Estudou-se o efeito da administração reiterada de fluoreto de sódio (NaF) (1mg/Kg/dia e 10mg/Kg/dia), durante 28 dias, na fertilidade dos ratinhos Charles River, através da medição de indicadores de fertilidade masculina (peso dos epidídimos, peso e capacidade secretória das vesículas seminais e avaliação do número e da mobilidade dos espermatozoides) e da realização de um teste de fertilidade, cruzando machos tratados e fêmeas não tratadas, assim como o efeito do ião fluoreto sobre a contratilidade do canal deferente de rato. Resultados: A administração reiterada de ião fluoreto a ratinho e rato induz modificações no padrão de mobilidade dos espermatozoides e conduz à acumulação deste ião no epidídimo. O ião fluoreto promove o aumento da contratilidade do canal deferente em doses baixas, mas induz uma diminuição desta resposta em doses/concentrações altas. Conclusões: O ião fluoreto interfere na modulação da fertilidade masculina em roedores. Este facto assume particular importância, uma vez que hoje em dia são prescritos em larga escala suplementos de flúor com o fim de prevenir a cárie dentária. Futuramente, torna-se necessário avaliar a concentração de ião fluoreto no organismo humano e as suas implicações na fertilidade masculina.Introduction: Ingestion of significant doses of fluoride ion may trigger manifestations of toxicological nature. Dental fluorosis is an undesirable side effect of excessive fluoride intake. However, in addition to the undesirable effects on normal tooth development, chronic and uncontrolled exposure to this ion can also have harmful consequences on other parts of the body, for example in male reproductive organs. However, there is a lack of consensus about the effect of fluoride in male reproductive organs. Objective: Evaluate the effect of the repeated administration of fluoride ion in the function and structure of male reproductive organs in two species of rodents. Materials and Methods: The effect of the repeated administration of NaF (1 mg/Kg/day; 10 mg/Kg /day) was evaluated during 28 days, on the fertility of Charles River mice, through the measurement of male fertility indicators (weight of the epididymis, weight and secretory capacity of the seminal vesicles and evaluation of the number and mobility of epididymal sperm) and the performance of a fertility test using Wister rats, crossing between treated male and untreated females, as well as the effect of fluoride ion on the contractility of the rat vas deferens. Results: The repeated administration of fluoride ion to mice and rats induces changes in the sperm motility pattern and leads to the accumulation of this ion in the epididymis. Fluoride ion promotes increased contractility of the vas deferens at low doses but induces a decrease in this response at high doses / concentrations. Conclusions: The fluoride ion interfere in the modulation of male fertility in rodents. This fact is of particular importance, since fluoride supplements are prescribed on a large scale to prevent dental caries. In the future, it is necessary to evaluate the concentrations of fluoride in the human body, and its implications in human males fertility

Effects of microcystin-LR on Saccharomyces cerevisiae growth, oxidative stress and apoptosis

Microcystins (MC) are cyanotoxins occurring globally, known for causing acute hepatotoxicity in humans/animals, tumor promotion in animals and potential carcinogenicity. The mechanism of MC toxicity is considered a multi-pathway process involving the inhibition of protein phosphatases PP1/PP2A and the production of reactive oxygen species (ROS). However, their mechanism of action is not fully characterized, thus hampering the complete hazard identification. In this study, we evaluated the effect of several microcystin-LR concentrations on the growth, ROS levels, antioxidant system response and apoptosis induction on Saccharomyces cerevisiae. Our results showed that the growth of S. cerevisiae was not inhibited when compared to control cells. However, the staining of cells with DHR123 and DHE revealed an intracellular increase of the ROS levels. This ROS increase resulted in an augment of catalase activity and inhibition of SOD. All these facts suggest that hydrogen peroxide was the main ROS induced by MCLR. Signs of apoptosis were also detected in the cells exposed to toxin. Our results show that S. cerevisiae VL3 displays MCLR toxicity effects known to occur in higher eukaryotes and confirmed that it can be a simple and good model to help further in the elucidation of MCLR molecular mechanisms of toxicity.This research was partially supported by the European Regional Development Fund (ERDF) through the COMPETE – Operational Competitiveness Programme – and national funds through FCT – Foundation for Science and Technology – under the project PEst-C/MAR/LA0015/2013 and grant (SFRH/BPD/75922/2011) to E. Valéri

Decrease of β-amyloid peptide precursor and ceruloplasmin mRNA levels in patients with Alzheimer’s disease support impairment of cellular iron efflux in this pathology

This research was supported by the Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT) [SFRH/BPD/29354/2006 to MM, SFRH/BD/60718/2009 to BS, and SFRH/BD/48671/2008 to LM]; Fundação Astrazeneca (Research Grant awarded through the “Programme of Support to Research”); Instituto Nacional de Saúde Dr. Ricardo Jorge; Portuguese Ministry of Health (Research Grant 53/2007 of the “Comissão de Fomento da Investigação em Cuidados de Saúde”); Lundbeck Portugal, Lda (Research Grant).Introduction: Alzheimer’s disease (AD) is the most common neurodegenerative disorder and the leading cause of dementia worldwide. Because of the clinical interest in its early diagnosis and prediction of patient evolution and prognosis, the identification of AD biomarkers is of crucial importance. Several lines of evidence implicate an imbalance of the redox-active biometals in AD. Metal-catalyzed hydroxyl radicals are potent mediators of cellular injury and are central to the oxidative injury hypothesis of AD pathogenesis [1,2]. Importantly, previous genetic and biochemical studies in AD patients support a concerted systemic iron metabolism dysregulation, namely at the level of cellular iron efflux [3]. Herein, we intended to further understand the molecular mechanisms underlying iron homeostasis in this pathology. In order to achieve this goal, the expression of specific iron metabolism-related genes directly involved in iron metabolism regulation and cellular iron export was measured in peripheral blood mononuclear cells from AD patients and healthy controls. Also, serum ceruloplasmin (CP) concentration and its oxidase activity were measured in all participants in the study, given the known role of this oxidase in facilitating iron exit from cells. Through this study we expect to further clarify the contribution of iron metabolism disruption to the etiopathogenesis of AD