Aspectos moleculares emergentes relacionados ao gene TP53 e à síndrome de Li-Fraumeni : prevalência de variantes funcionais, modificadores de fenótipo e regulação por miRNAs

A Síndrome de Li-Fraumeni (SLF) é uma doença autossômica dominante caracterizada pelo risco aumentado de câncer de mama, sarcomas, tumores cerebrais e adrenocorticais (tumores centrais da SLF), bem como outras neoplasias em idade jovem em indivíduos portadores de variantes germinativas patogênicas (VGP) em TP53. Nas regiões Sul e Sudeste do Brasil, a VGP fundadora TP53 R337H está presente em 0,3% da população geral. Outra variante funcional no gene, rs78378222 (A>C), altera o sinal de poliadenilação e tem sido associada com risco para câncer em geral. Objetivos: Considerando a heterogeneidade clínica observada em portadores da VGP R337H e a importância dos miRNAs como reguladores de p53, os objetivos desta tese foram: (a) determinar a prevalência das variantes funcionais TP53 R337H e rs78378222 em pacientes com diferentes tipos de tumores da região Sul do Brasil; (b) atualizar a rede de miRNAs envolvida na regulação da via de p53; e (c) investigar o papel de polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) em genes de miRNAs (miRSNPs) que regulam indiretamente p53 como potenciais modificadores de fenótipo em portadores da variante R337H. Resultados: Dentre os principais achados podemos destacar: (a) identificação de uma baixa prevalência tanto de portadores da VGP fundadora R337H em amostras de adenocarcinoma de pulmão (análise somática; 1,2%), quanto da variante funcional rs78378222 em coortes de pacientes com adenocarcinomas de pulmão (análise somática; 1%) e próstata (análise germinativa; 0,65%), em comparação com achados prévios; (b) obtenção de uma rede atualizada contendo 26 genes da via de p53 e 238 interações miRNA-alvo validadas experimentalmente; e (c) seleção de miRSNPs funcionais relacionados a miR-605 (rs2043556 A>G) e miR-34 (rs4938723 T>C), permitindo identificar que, em portadores da R337H, o genótipo MIR605 rs2043556[G/G] está associado com a ocorrência de múltiplos tumores primários e pri-miR-34b/c rs4938723[C/C] associado com o desenvolvimento de tumores não-centrais da SLF. Conclusões: Em comparação com estudos anteriores, as prevalências das variantes funcionais de TP53 aqui obtidas sugerem que existem variações regionais e tumorespecíficas, enquanto os achados do papel dos miRSNPs no contexto da SLF mostram a importância da análise de genes de miRNAs reguladores da atividade de p53 como potenciais modificadores de fenótipo da doença.Introduction: Li-Fraumeni syndrome (LFS) is an autosomal dominantly inherited disorder characterized by an increased risk of early-onset breast cancer, sarcomas, brain and adrenocortical tumors (LFS core tumors) and other neoplasms in individuals harboring germline TP53 pathogenic variants (GPV). In Southern and Southeastern regions of Brazil, the founder GPV TP53 R337H has been detected in 0.3% of the general population. Another functional variant in the gene, rs78378222 (A>C), changes the polyadenylation signal and has been associated with increased risk of cancer in general. Objectives: Given the clinical heterogeneity observed in carriers of GPV R337H and the importance of miRNAs as regulators of p53 expression, the objectives of this thesis were: (a) determine the prevalence of the functional variants TP53 R337H and rs78378222 in patients with different tumor types from Southern Brazil; (b) update the network of miRNAs involved in the p53 pathway regulation; and (c) investigate the role of single nucleotide polymorphisms (SNPs) located in miRNA genes (miRSNPs) that indirectly regulate p53 as potential phenotype modifiers in R337H carriers. Results: Among the main findings, we can highlight: (a) when compared with previous findings, identification of a low carriers’ prevalence of both the founder GPV R337H in lung adenocarcinoma samples (somatic analyses; 1.2%) and the functional variant rs78378222 in cohorts of patients diagnosed with lung (somatic analyses; 1%) and prostate adenocarcinomas (germinative analyses; 0.65%); (b) generation of an updated network containing 26 genes of the p53 signaling pathway and 238 experimentally validated miRNA-target interactions; and (c) selection of functional miRSNPs related to miRNA families miR-605 (rs2043556 A>G) and miR-34 (rs4938723 T>C), allowing to identify that the MIR605 rs2043556[G/G] homozygous genotype is associated with the occurrence of multiple primary tumors as well as pri-miR-34b/c rs4938723[C/C] genotype is associated with the development of LFS non-core or atypical tumors in R337H carriers. Conclusions: Compared to previous studies, the prevalence of functional TP53 variants found here suggest that there may be regional and tumor-specific frequency variations, while the findings about the role of miRSNPs in the LFS context demonstrate the importance in evaluating genes encoding miRNAs that regulate p53 activity as potential phenotype modifiers

Caracterização das sequências regulatórias de poliadenilação e modulação da expressão por micrornas em um conjunto abrangente de genes de predisposição ao câncer

A poliadenilação consiste na etapa de processamento da extremidade 3’ dos pré-mRNAs em eucariotos. Duas sequências regulatórias localizadas na região 3’ não-traduzida (3’UTR) desses transcritos primários apresentam um papel fundamental nesse processo: o sinal de poliadenilação (SP) AAUAAA e suas variantes funcionais; e o sítio de clivagem (SC), preferencialmente um dinucleotídeo “CA”. Outros elementos de sequência também situados na região 3’UTR são os sítios de ligação para microRNAs (miRNAs), os quais representam uma classe de pequenos RNAs não-codificantes que regulam negativamente a expressão gênica e podem atuar como supressores de tumor e/ou oncogenes. Os principais objetivos desse estudo foram: (1) caracterizar os SP e SC em um conjunto de genes de predisposição ao câncer (GPC); (2) avaliar a frequência de poliadenilação alternativa entre os GPC estudados; e (3) identificar miRNAs e/ou famílias de miRNAs potencialmente oncogênicos e supressores de tumor considerando o mesmo grupo de genes. Para caracterizar essas sequências nos GPC selecionados (n=117) foram utilizados os bancos de dados do NCBI (referência) e os bancos de dados de poliadenilação alternativa APADB e APASdb. A busca por miRNAs reguladores de genes supressores de tumor (n=81) e oncogenes (n=17) foi realizada utilizando fontes de dados preditos computacionalmente e com validação experimental. Em relação ao objetivo (1), 21 dos 117 GPC (~18%) não apresentaram SP indicados no NCBI, sendo que um método computacional foi empregado para detectar SP putativos nesses genes. A maioria dos SP descritos para GPC nesse banco (74,4%) possuía a sequência canônica AAUAAA, enquanto 24,1% continha a variante funcional AUUAAA. Curiosamente, o dinucleotídeo “AA” representou o SC mais frequente dentre os GPC analisados. Além disso, análises relacionadas ao objetivo (2) identificaram evidências de poliadenilação alternativa (mais de um SP funcional) em 105 GPC (~90%), em comparação com uma estimativa anterior de que isso ocorreria em cerca de 50% dos genes humanos, sugerindo uma maior complexidade na regulação da poliadenilação nesses transcritos. Quanto ao objetivo (3), a família de miRNA miR-192 foi significativamente super-representada entre os genes supressores de tumor (P<0,01), o que sugere 10 uma função potencialmente oncogênica. Em contraste, um número maior de famílias de miRNAs foi fortemente associado com a regulação de oncogenes: miR-128, miR-1471, miR-483, miR-3170 e miR-218. Nossos dados fornecem um mapeamento das sequências regulatórias de poliadenilação (SRP) em GPC, o qual pode ser utilizado no desenvolvimento de análises moleculares incluindo esses elementos da região 3’UTR frequentemente negligenciados na rotina de diagnóstico molecular. Ademais, estudos funcionais devem ser realizados para validar as funções potencialmente atribuídas às famílias de miRNAs aqui mencionadas. Em suma, esse é o primeiro estudo focado nesse tipo de caracterização abrangente (SRP e miRNAs) em GPC.Polyadenylation is the processing step of 3’end in eukaryotic pre-mRNAs. Two regulatory sequences located in the 3’ untranslated region (3’UTR) of these primary transcripts play an essential role in this process: the polyadenylation signal (PAS) AAUAAA and its functional variants; and the cleavage site (CS), preferentially a “CA” dinucleotide. Other 3’UTR sequence elements are the binding sites for microRNAs (miRNAs), which represent a class of small non-coding RNAs that negatively regulate gene expression, and can act as tumor suppressors and/or oncogenes. The main goals of this study were: (1) to characterize PAS and CS in a set of cancer predisposition genes (CPGs); (2) assess the frequency of alternative polyadenylation among the studied genes; and (3) identify potentially oncogenic and tumor-suppressive miRNAs or miRNA families considering the same group of genes. In order to characterize these sequences in the selected CPGs (n=117) the NCBI database (reference source) and the alternative polyadenylation databases APADB and APASdb were used. The search for miRNAs that regulate tumor suppressor genes (n=81) and oncogenes (n=17) was performed using computationally predicted and experimentally validated data sources. In relation to the first aim, 21 of the 117 CPGs (~18%) did not exhibited a PAS sequence indicated in NCBI, and a computational method was employed to detect putative PAS in these genes. In this database, most described PAS (74.4%) for CPGs had the canonical sequence AAUAAA, while 24.1% contained the functional variant PAS AUUAAA. Interestingly, “AA” dinucleotide was the most frequent CS associated with the CPGs. In addition, second aim related-analyses identified alternative polyadenylation evidences (more than one functional PAS) for 105 CPGs (~90%), while a previous estimate indicated that it occurs in about 50% of human genes, suggesting a greater complexity in the regulation of polyadenylation in these transcripts. Regarding the third aim, miR-192 family was significantly overrepresented among tumor suppressor genes (P<0.01), which suggests a potentially oncogenic function. In contrast, a larger number of miRNA families was strongly associated with regulation of oncogenes: miR-128, miR-1471, miR-483, miR-3170 and miR-218. Our data provide a mapping of polyadenylation regulatory sequences (PRS) in CPGs, which can be used in the 12 development of molecular analyses including these 3'UTR elements often neglected during the routine molecular diagnosis. Furthermore, functional studies should be performed to validate the potential functions assigned to the miRNA families mentioned herein. In summary, this is the first study focused on this type of comprehensive characterization (PRS and miRNAs) in CPG

Frequência da variante germinativa rs78378222 em pacientes com câncer de mama HER2-positivo e potenciais mecanismos moleculares de patogenicidade

Mutações germinativas no gene TP53 estão associadas com a Síndrome de Li-Fraumeni (SLF) e sua variante, a Síndrome de Li-Fraumeni-like (LFL), ambas doenças autossômicas dominantes caracterizadas pela predisposição a múltiplos tumores em idade precoce. O câncer de mama (CM) é o tipo de tumor mais frequente em mulheres com SLF/LFL, apresentando predominantemente o fenótipo molecular HER2-positivo neste grupo de pacientes. Em um estudo recente do nosso grupo de pesquisa, o SNP (Single Nucleotide Polymorphism) rs78378222 (A>C), uma variante germinativa rara localizada na região 3‟ não-traduzida (3‟UTR) de TP53 e, mais especificamente, na sua sequência sinal de poliadenilação, foi identificado em uma alta frequência (5.4%) em um grupo de pacientes SLF/LFL sem mutações germinativas identificadas em regiões codificadoras do gene TP53. Sendo assim, os objetivos deste trabalho foram determinar a frequência do SNP funcional rs78378222 em uma amostra de mulheres com CM HER2-positivo do sul do Brasil, bem como investigar os mecanismos moleculares de patogenicidade do alelo variante rs78378222[C]. Inicialmente, através da genotipagem do SNP em nossa série de 105 casos de CM HER2-positivo, não foi identificada nenhuma paciente portadora do alelo rs78378222[C]. A avaliação dos níveis de expressão da proteína p53, tanto em tecido tumoral quanto em células normais (fibroblastos) de pacientes LFL portadores da variante, mostrou uma redução na expressão de p53. Além disso, utilizando-se ferramentas de predição in silico, foi possível observar que o SNP rs78378222 está situado em uma sequência-alvo da região 3‟UTR do mRNA TP53 predita para ligação de miR-545-3p. A presença de rs78378222[C] pode enfraquecer a ligação de miR-545-3p ao sítio-alvo predito, mas não parece criar um novo sítio de ligação para miRNAs na região 3‟UTR de TP53. Nossos resultados sugerem que a haploinsuficiência pode ser um novo mecanismo pelo qual TP53 promove predisposição ao câncer em famílias SLF/LFL. Entretanto, estudos em novas séries de casos devem ser realizados para confirmar estes achados

Turismo Cubano: Uma Análise do Novo Mecanismo de Desenvolvimento Econômico no Pós-Revolução (1959-2023)

Este artigo propõe compreender e analisar o desenvolvimento do turismo em Cuba e investigar sua contribuição econômica para a ilha. Para tal, o trabalho encontra-se calcado na seguinte pergunta: o setor turístico demonstra ser uma alternativa de atração de moedas fortes, frente ao bloqueio norte-americano? A hipótese desse texto é de que o turismo apresenta-se como uma possibilidade de atração, contudo gera inúmeros e perigosos desafios sociais que são contrários aos princípios revolucionários. A metodologia deste artigo é fundamentada em dados qualitativos, baseando-se na análise de materiais técnicos como artigos e livros científicos. Confirma-se portanto, a partir desse estudo, a veracidade da hipótese, mas não nega os riscos que um desenvolvimento desenfreado pode gerar

Eutanásia: uma abordagem à luz da legislação penal brasileira

A eutanásia é um método empregado para que se tenha uma “boa morte”, isso por que a pessoa que está em estado terminal pode utilizá-lo para cessar seu sofrimento. Acontece que não há tipificação especifica para a eutanásia no Brasil, principalmente na lei penal, e por isso é importante que se pesquise para saber se existe possibilidade ou não para uma tipificação. Além disso, também é importante conhecer quais são as possibilidades dentro do método e também de como fazê-lo. Há possibilidade de estudar o tema através de livros, artigos, reportagens e os mais variados meios de informação que mostram justamente o que acontece, qual a real necessidade e também como o tema é tratado em outros lugares. O mais importante é perceber que existe um caminho para a tipificação e que, apesar de já se ter tentado, o tema não para de ser discutido, mesmo que com menor intensidade que outros. A eutanásia é um tema relevante e aceito em alguns lugares do mundo e de certa forma pode ser muito proveitoso para a sociedade

Policiamento Orientado à Solução de Problemas na Polícia Militar do Estado de Santa Catarina – Brasil

Além de demonstrar o Policiamento Orientado à Solução de Problemas e sua metodologia como estratégia e ferramenta de preservação da ordem pública utilizada pela 1ª Companhia do 4º Batalhão de Polícia Militar do Estado de Santa Catarina, o presente estudo visa apresentar e disseminar alternativa de policiamento complementar ao método tradicional de policiamento essencialmente reativo. A pesquisa de estudo de caso revelou uma evolução na forma de policiamento, focada na prevenção mediante aproximação com a população, sedimentando parcerias que procuram agir de maneira criativa sobre as causas do problema e direcionando o policiamento para a construção de soluções que busquem gerar qualidade de vida. Apresenta-se que a adoção do Policiamento Orientado à Solução de Problemas como estratégia complementar ao policiamento tradicional constitui-se em importante ferramenta de gerenciamento para ações de polícia ostensiva, afastando o empirismo e tornando técnico e profissional a prestação de segurança à sociedade catarinense

Estudo do desempenho térmico de uma edificação da POLI-UPE de acordo com a NBR 15575

This research aims to verify the simulation method suggested by NBR 15575-1 as a procedure to qualify the thermal performance of a building. For that, the lobby’s edification of the Polytechnic School of the University of Pernambuco was adopted, which is located in the city of Recife. The simulation was performed with the EnergyPlus software. It was also sought to compare the internal air temperature of the building’s room with the highest temperature peak, according to the simulation’s results, with measurements in loco through the use of temperature sensor. The results showed that the desconsideration, in the simulation, of the internal loads acting on the building, as well as the use of only the maximum daily value of the outdoor air temperature for the typical summer day as a criterion, can exert a considerable influence on the thermal performance qualification of a building.Esta pesquisa tem como objetivo verificar o método da simulação sugerido pela NBR 15575-1 como procedimento de qualificação do desempenho térmico de uma edificação. Para isso, foi adotada a edificação da portaria da Escola Politécnica da Universidade de Pernambuco que se localiza na cidade do Recife. A simulação foi efetuada com o software EnergyPlus. Buscou-se também comparar a temperatura do ar interno do cômodo da edificação de maior pico de temperatura, de acordo com os resultados da simulação, com medições in loco através do uso de sensor de temperatura. Os resultados mostraram que a desconsideração, pela simulação, das cargas internas que atuam na edificação, assim como a utilização apenas do valor máximo diário da temperatura do ar exterior para o dia típico de verão como critério, podem exercer considerável influência na qualificação do desempenho térmico de uma edificação

Clinical and molecular characterization of patients fulfilling Chompret criteria for Li-Fraumeni syndrome in Southern Brazil

Li-Fraumeni syndrome (LFS) is an autosomal dominant cancer predisposition syndrome caused by pathogenic germline variants in the TP53 gene, characterized by a predisposition to the development of a broad spectrum of tumors at an early age. The core tumors related to LFS are bone and soft tissue sarcomas, premenopausal breast cancer, brain tumors, adre nocortical carcinomas (ACC), and leukemias. The revised Chompret criteria has been widely used to establish clinical suspicion and support TP53 germline variant testing and LFS diag nosis. Information on TP53 germline pathogenic variant (PV) prevalence when using Chom pret criteria in South America and especially in Brazil is scarce. Therefore, the aim of this study was to characterize patients that fulfilled these specific criteria in southern Brazil, a region known for its high population frequency of a founder TP53 variant c.1010G>A (p. Arg337His), as known as R337H. TP53 germline testing of 191 cancer-affected and indepen dent probands with LFS phenotype identified a heterozygous pathogenic/likely pathogenic variant in 26 (13.6%) probands, both in the DNA binding domain (group A) and in the oligo merization domain (group B) of the gene. Of the 26 carriers, 18 (69.23%) were R337H het erozygotes. Median age at diagnosis of the first tumor in groups A and B differed significantly in this cohort: 22 and 2 years, respectively (P = 0.009). The present study shows the clinical heterogeneity of LFS, highlights particularities of the R337H variant and underscores the need for larger collaborative studies to better define LFS prevalence, clinical spectrum and penetrance of different germline TP53 pathogenic variants