Overexpression of gK in gK-transformed cells collapses the Golgi apparatus into the endoplasmic reticulum inhibiting virion egress, glycoprotein transport, and virus-induced cell fusion

Intracellular transport and egress of alphaherpesviruses require the coordinate function of multiple proteins and glycoproteins. Recently, we showed that gK is expressed on infected cell surfaces and that gK cell-surface expression required the presence of the UL20 protein [J. Virol. 77 (2003), 499]. Overexpression of gK by gK-transformed cells blocked transport of enveloped virions from perinuclear spaces and inhibited virus-induced cell fusion caused by gK syncytial mutants [J. Virol. 69 (1995), 5401]. Therefore, we investigated whether altered synthesis and transport of gK was responsible for the observed gK-mediated interference phenomena. HSV-1 infection of the gK-transformed cell line Vero (gK9) caused a profound entrapment of gK in the endoplasmic reticulum and total inhibition of gK cell surface expression. In addition, gK drastically inhibited intracellular transport and maturation of gD and caused substantial defects in Golgi-dependent glycosylation of gB. Visualization of intracellular organelles via confocal microscopy revealed a profound collapse of the Golgi apparatus into the endoplasmic reticulum. These results were analogous to those observed in the presence of brefeldin A, a known Golgi disruptor. Therefore, virion entrapment within perinuclear spaces and inhibition of glycoprotein transport are due to gK-mediated collapse of the Golgi apparatus. © 2003 Elsevier Inc. All rights reserved

Ризики виникнення африканської чуми свиней на території Житомирської області

The purpose and task of the work was to study the epizootic situation regarding African swine fever on the territory of Zhytomyr region, to study the role of etiological factors as well as to analyze the risks of new cases. In conducting research, commonly used methods of epizootic study, statistical analysis. Analyzing the epizootic situation with ASF in Zhytomyr region for 2015–2017, it should be noted that among other regions, the number of ASF incident is lower than in Zhytomyr only in Ivano-Frankivsk – 3, and in L’viv – 1 case, in Dnipropetrovsk the same number as in Zhytomyr – 4 cases. In all other regions, the number of ASF incident is greater than in Zhytomyr. When considering the geographical position of Zhytomyr region, we have identified a number of criteria that may promote the spread of ASF. The following risks should be taken into account. The border accommodation of the region – in the north Zhytomyr region borders on the Republic of Belarus. Although there are few cases of ASF in Belarus officially registered (2 in 2013), worryingly that the countries bordering Belarus are unfavorable to ASF and have registered significantly more cases of this disease. Here, from our point of view, there can be two opinions: either in Belarus conducting measures to eliminate ASF are really effective, or new cases simply are not covered. The latter option is more likely if you analyze the Internet resources and see a map-diagram of ASF incident in Western Europe. Therefore, the risks here can be quite high. According to official data the wild boar depopulation in Belarus may in turn lead to the migration of wild pigs to the territory of Ukraine. The northern part of the Zhytomyr region is located in the forest area, which is a natural habitat for wild boar populations, which can be the carrier of ASF. Particularly disturbing is the fact that in the north of the Rivne region, there have been many cases of ASF, where forest areas also predominate. There is, therefore, a risk of wild boar with ASF virus entering from the Rivne region to the Zhytomyr. Zhytomyr region borders on areas in which the epizootic situation regarding the ASF is much more intense. In the Kyiv region, 15 cases of ASF were registered, in Vinnitsa – 9, in Khmelnyts’ky – 6, in Rivne – 21. Zhytomyr region occupies a central position, through its territory there are many auto and railway routes of international importance, which go to the capital of Ukraine. Thus, the region has close economic ties with other regions. If we take into account all of the abovementioned risks in the Zhytomyr region, we can say that the situation is sufficiently controlled. If on the territory of Ukraine on January 20, 2005 there were registered 323 ASF incidents, then in Zhytomyr oblast – 4. Analyzing the spread of ASF in Zhytomyr region on the fact of registration of dysfunctional points in 2015–2017, it can be assumed that the disease spread to Zhytomyr region with wild pigs from the eastern direction, from the Kyiv region (cases in the Radomyshl and Malyn districts). In all cases, measures were taken to contain ASF in accordance with the instruction, the effectiveness of which is confirmed by the subsequent prosperity of the area.Метою і завданням роботи було вивчити епізоотичну ситуацію щодо африканської чуми свиней (АЧС) на території Житомирської області, вивчити роль етіологічних чинників, проаналізувати ризики появи нових випадків. При проведенні досліджень застосовувалися загальноприйняті методи епізоотологічного дослідження, статистичного аналізу. Аналізуючи епізоотичну ситуацію щодо АЧС в Житомирській області за 2015–2017 рр. слід зазначити, що серед інших областей за кількістю спалахів АЧС менше ніж у Житомирській лише у Івано-Франківській – 3 і у Львівській – 1 випадок, у Дніпропетровській така ж кількість як у Житомирській – 4 випадки. В усіх інших областях кількість спалахів АЧС більша, ніж у Житомирській. При розгляді географічного положення Житомирської області ми виділили ряд критеріїв, які можуть сприяти поширенню АЧС. Варто врахувати такі ризики. Прикордонне розміщення області – на півночі Житомирська область межує з Республікою Білорусь. Хоча випадків АЧС в Білорусі офіційно зареєстровано небагато (2 в 2013 році), але занепокоєння викликає той факт, що країни, які межують з Білорусією, неблагополучні щодо АЧС, і в них зареєстровано значно більше випадків цієї хвороби. Тут, з нашої точки зору може бути два варіанти: або в Білорусі дійсно ефективно проводять заходи щодо ліквідації АЧС, або про нові випадки просто не повідомляють. Останній варіант більш вірогідний, якщо проаналізувати інтернет-ресурси і подивитись карту-схему спалахів АЧС в Західній Європі. Тому ризики тут можуть бути досить високі. Проведена депопуляція дикого кабана в Білорусі згідно з офіційними даними може своєю чергою спричинювати міграцію диких свиней на територію України. Північна частина Житомирської області знаходиться в лісовій місцевості, що є природнім ареалом популяції дикого кабана, який може бути переносником АЧС. Особливе занепокоєння викликає те, що на півночі Рівненської області було зареєстровано багато випадків АЧС, де також переважає лісиста місцевість. Отже – існує ризик занесення дикими кабанами з Рівненської області в Житомирську вірусу АЧС. Житомирська область межує з областями, в яких епізоотична обстановка щодо АЧС є значно напруженіша. В Київській області зареєстровано 15 випадків АЧС, в Вінницькій – 9, в Хмельницькій – 6, в Рівненській – 21. Житомирська область займає центральне положення, через її територію проходять багато авто- і залізничних шляхів міжнародного значення, які прямують до столиці України. Таким чином область – має тісні економічні зв’язки з іншими регіонами. Якщо врахувати всі вищеперераховані ризики Житомирської області, то можна сказати, що в області достатньо контрольована ситуація. Якщо в Україні станом на 20.01.18 – 323 спалахи АЧС, то у Житомирській області – 4. Аналізуючи поширення АЧС в Житомирській області за фактом реєстрації неблагополучних пунктів 2015–2017 рр., можна припустити, що хвороба поширилась в Житомирську область з дикими свинями зі східного напрямку Київської області (випадки в Радомишльському і Малинському районах). В усіх випадках були проведенні заходи щодо ліквідації АЧС згідно з інструкцією, ефективність яких підтверджена подальшою благополучністю області

A new class of glycomimetic drugs to prevent free fatty acid-induced endothelial dysfunction

Background: Carbohydrates play a major role in cell signaling in many biological processes. We have developed a set of glycomimetic drugs that mimic the structure of carbohydrates and represent a novel source of therapeutics for endothelial dysfunction, a key initiating factor in cardiovascular complications. Purpose: Our objective was to determine the protective effects of small molecule glycomimetics against free fatty acid­induced endothelial dysfunction, focusing on nitric oxide (NO) and oxidative stress pathways. Methods: Four glycomimetics were synthesized by the stepwise transformation of 2,5­dihydroxybenzoic acid to a range of 2,5­substituted benzoic acid derivatives, incorporating the key sulfate groups to mimic the interactions of heparan sulfate. Endothelial function was assessed using acetylcholine­induced, endotheliumdependent relaxation in mouse thoracic aortic rings using wire myography. Human umbilical vein endothelial cell (HUVEC) behavior was evaluated in the presence or absence of the free fatty acid, palmitate, with or without glycomimetics (1µM). DAF­2 and H2DCF­DA assays were used to determine nitric oxide (NO) and reactive oxygen species (ROS) production, respectively. Lipid peroxidation colorimetric and antioxidant enzyme activity assays were also carried out. RT­PCR and western blotting were utilized to measure Akt, eNOS, Nrf­2, NQO­1 and HO­1 expression. Results: Ex vivo endothelium­dependent relaxation was significantly improved by the glycomimetics under palmitate­induced oxidative stress. In vitro studies showed that the glycomimetics protected HUVECs against the palmitate­induced oxidative stress and enhanced NO production. We demonstrate that the protective effects of pre­incubation with glycomimetics occurred via upregulation of Akt/eNOS signaling, activation of the Nrf2/ARE pathway, and suppression of ROS­induced lipid peroxidation. Conclusion: We have developed a novel set of small molecule glycomimetics that protect against free fatty acidinduced endothelial dysfunction and thus, represent a new category of therapeutic drugs to target endothelial damage, the first line of defense against cardiovascular disease

Expression of the enhanced green fluorescent protein by herpes simplex virus type 1 (HSV-1) as an in vitro or in vivo marker for virus entry and replication

Glycoprotein K (gK) is involved in membrane fusion phenomena during infectious virus production and egress and is an important determinant for neurovirulence. To assess better the in vitro and in vivo roles of gK in virus replication, a recombinant virus was constructed expressing an engineered enhanced green fluorescent protein (EGFP) under the control of the human cytomegalovirus immediate early gene promoter (HCMV-IEP) inserted in place of the gK gene. The EGFP gene insertion was confirmed by diagnostic polymerase chain reaction (PCR), and the presence of the EGFP protein was detected by western immunoblot analysis using anti-GFP monoclonal antibody. Fluorescence microscopy revealed that virus infected cells emitted bright fluorescence when examined using filters for fluorescein. Fluorescence emission was detected as early as 4 h post-infection. Fluorescence intensity increased over time and was stable at late times after infection at which point viral plaques continued to emit bright green fluorescence. The amount of fluorescence emitted by virus infected Vero cells was monitored by fluorescence cytometry using a FACS cytometer. At an MOI of 3, all infected cells emitted strong green fluorescence as quantified by cytometry at 48 h post-infection. The ΔgK-EGFP expressing recombinant virus will enable the determination of the role of gK in virus entry and egress as well as the role of gK in the molecular pathogenesis of herpes simplex virus type 1 (HSV-1). Copyright (C) 1998 Elsevier Science B.V

1-Isobutanoil-2-isopropylisothiourea Phosphate, T1082: A Safe and Effective Prevention of Radiotherapy Complications in Oncology

The radioprotective effects of a new 1-isobutanoil-2-isopropylisothiourea derivative named T1082 are presented. Research methods included toxic characteristics, radioprotective activity (Till– McCulloch’s test and 30-day survival test) in γ-ray total-body-irradiated mice, and a clinical and histological study of the effect of T1082 on acute radiation skin reactions (RSR) in rats after a single or fractionated β-ray local irradiation. T1082 is more effective than its analogue, the NOS inhibitor T1023, at low concentrations and doses (1/12–1/8 LD10 ), both parenterally and intragastrically. In this case, its therapeutic index (LD50 /ED50 ) reaches 30, and the optimal radioprotective doses (ED84–98 —141–224 mg/kg) are an order less than the maximum tolerated doses—1/16–1/10 LD10 . These properties allowed T1082, at a low intragastrical dose (160 mg/kg; 1/14 LD10), to significantly limit the severity of acute RSR after single (40 Gy) and fractionated (78 Gy) β-ray irradiation. The results confirm T1082 as one of the safest emergency radioprotectors and indicate the prospects for its further development as a pharmacological agent for the prevention of RT complications. © 2022 by the authors. Licensee MDPI, Basel, Switzerland