Biochemical characterization of a 27kDa 1,3-β-d-glucanase from Trichoderma asperellum induced by cell wall of Rhizoctonia solani

AbstractTrichoderma asperellum produces two extracellular 1,3-β-d-glucanase upon induction with cell walls from Rhizoctonia solani. A minor 1,3-β-d-glucanase was purified to homogeneity by ion exchange chromatography on Q-Sepharose and gel filtration on Sephacryl S-100. A typical procedure provided 13.8-fold purification with 70% yield. SDS–PAGE of the purified enzyme showed a single protein band of molecular weight 27kDa. The enzyme exhibited optimum catalytic activity at pH 3.6 and 45°C. It was thermostable at 40°C, and retained 75% activity after 60min at 45°C. The Km and Vmax values for 1,3-β-d-glucanase, using laminarin as substrate, were 0.323mgml−1 and 0.315Umin−1, respectively. The enzyme was strongly inhibited by Hg2+ and SDS. The enzyme was only active toward glucans containing β-1,3-linkages. Peptide sequences showed similarity with two endo-1,3(4)-β-d-glucanases from Aspergillus fumigatus Af293when compared against GenBank non-redundant database

Avaliação do potencial de isolados de Trichoderma spp. nativos do estado de Mato Groso do Sul contra o fungo Colletotrichum musae / Evaluation of the potential of Trichoderma spp. native to the state of Mato Groso do Sul against the fungus Colletotrichum musae

 A banana (Musa spp.) está entre as frutas mais consumidas mundialmente. Uma de suas principais doenças de pós-colheita é a antracnose, causada pelo fungo Colletotrichum musae, podendo causar perdas de até 40% da produção. O fungo Trichoderma apresenta grande potencial para utilização como agente de controle biológico de doenças de plantas. O objetivo deste trabalho foi o isolamento de espécies nativas de Trichoderma do estado de Mato Grosso do Sul e a avaliação do potencial antagonistade alguns isolados contra o Colletotrichum musae. O isolado de C. musae foi obtido a partir de bananas as quais exibiam sintomas característicos da doença. Foram obtidos a partir de amostras de solo de 5 regiões do estado, 60 isolados de Trichoderma com grande diversidade morfológica, e após o isolamento foram selecionados 13 para as avaliações. Para a avaliação da inibição do crescimento micelial do C. musae foi realizado o teste de pareamento de colônias do patógeno com os isolados de Trichoderma e a produção de metabólitos voláteis, com cinco repetições por tratamento. As médias foram comparadas pelo teste de Scott-Knott, a 5% de probabilidade. Todos os isolados avaliados apresentaram potencial antagônico sobre o patógeno C. musae. Entretanto, o isolado Amambai AB 101 apresentou maior ocupaçãoda placa de Petri, com 95,6% da área total no teste de pareamento. No teste de metabólitos voláteis, todos os isolados de Trichoderma inibiram o crescimento do C. musae sendo que os isolados de Trichoderma B 201 e PP203 foram os que exibiram maior ação antifúngica contra o patógeno

Biochemical and Structural Characterization of Amy1: An Alpha-Amylase from Cryptococcus flavus Expressed in Saccharomyces cerevisiae

An extracellular alpha-amylase (Amy1) whose gene from Cryptococcus flavus was previously expressed in Saccharomyces cerevisiae was purified to homogeneity (67 kDa) by ion-exchange and molecular exclusion chromatography. The enzyme was activated by NH4+ and inhibited by Cu+2 and Hg+2. Significant biochemical and structural discrepancies between wild-type and recombinant α-amylase with respect to Km values, enzyme specificity, and secondary structure content were found. Far-UV CD spectra analysis at pH 7.0 revealed the high thermal stability of both proteins and the difference in folding pattern of Amy1 compared with wild-type amylase from C. flavus, which reflected in decrease (10-fold) of enzymatic activity of recombinant protein. Despite the differences, the highest activity of Amy1 towards soluble starch, amylopectin, and amylase, in contrast with the lowest activity of Amy1w, points to this protein as being of paramount biotechnological importance with many applications ranging from food industry to the production of biofuels

EFEITO DE ENZIMAS FIBROLÍTICAS SOBRE A COMPOSIÇÃO QUÍMICA DASILAGEM DE MILHO

Objetivou-se avaliar o efeito de níveis de enzimasfibrolíticas sobre a composição bromatológica e adegradabilidade ruminal da fibra em detergente neutro(FDN) da silagem de milho. O experimento consistiu dequatro níveis enzimáticos, dois períodos de armazenamentoe três repetições. Aplicaram-se, por aspersão, na ensilagem,os níveis enzimáticos de 0, 5, 10 e 20 mg de enzimas por kgde matéria natural (MN). Após 45 e 120 dias dearmazenamento, abriram-se os silos experimentais utiliza-dos em triplicata para avaliação do conteúdo de matériaseca (MS), FDN, proteína bruta (PB), nitrogênio amoniacalem relação ao nitrogênio total (N-NH3/NT) e pH. Coleta-ram-se amostras após 45 dias de ensilagem para estudo dadegradação ruminal in situ da FDN, empregando-se a atécnica do saco de náilon, de modo que três bovinos foramcanulados no rúmen, sendo os horários de incubação de 6,24 e 96 horas. Verificou-se que a solução enzimática nãoalterou o conteúdo de MS, pH e N-NH3/NT da silagem demilho. Na PB, não se observou diferença entre os períodosde armazenamento, porém houve interação período dearmazenamento e nível de enzima. Verificou-se aumento daPB no nível de 20 mg (10,14%) em relação ao controle (8,77%)no período de 45 dias. A solução enzimática alterou o teor daFDN para a média do nível de enzimas. Observou-se umaredução da FDN do nível de 10 mg (47,25%) em relação aotratamento-testemunha (49,96%). Não houve diferença en-tre os períodos de armazenamento nem interação período dearmazenamento e nível enzimático. Nos parâmetros de de-gradação ruminal da FDN da silagem de milho não se regis-traram diferenças entre os tratamentos. PALAVRAS-CHAVE: Aditivos, celulases, degradabilidade, hemicelulases, parede celular

Isolados nativos de Trichoderma spp. Como promotor de crescimento na fase inicial da cultura da soja / Native isolates of Trichoderma spp. As a growth promoter in the initial phase of soybean culture

O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência de isolados de Trichoderma spp. nativos de regiões do estado de Mato Grosso do Sul, como promotores de crescimento na fase inicial da cultura da soja (Glycinemax) quando coinoculados com a bactéria Bradyrhizobium japonicum. O experimento foi realizado utilizando cinco tratamentos, sendo eles: T1 = Testemunha (sem inoculação); T2 = Apenas inoculação de Bradyrhizobium; T3= inoculação do isolado de Trichoderma comercial + Bradyrhizobium; T4= inoculação do isolado de Trichoderma CPD102 + Bradyrhizobium e T5= inoculação do isolado de Trichoderma S404 + Bradyrhizobium. A variedade de soja utilizada no experimento foi a SOJA M 6410 IPRO, de ciclo precoce. Os isolados de Trichoderma spp foram inoculados no solo e nas sementes.  Bactéria Bradyrhizobium foi inoculada apenas nas sementes. Cada tratamento era composto de oito repetições mantidos em casa de vegetação. Após 50 dias de cultivo foi feita a coleta dos dados para análise do desenvolvimento aéreo, radicular e nodular das plantas. Os resultados obtidos mostram que os tratamentos coinoculados com os isolados nativos e o comercial de Trichoderma com a bactéria Bradyrhizobium japonicum, proporcionaram maior desenvolvimento das plantas, ao nível de parte área e radicular, dando destaque ao isolado Trichoderma S404, que apresentou resultados satisfatórios em todos os parâmetros avaliados. Possivelmente os isolados nativos de Trichoderma em Mato Grosso do Sul demonstrou bom desempenho como promotor de crescimento na cultura da soja, devido a adaptação desses fungos as condições climáticas e solos da região

Il Cristo in forma Pietatis del Rosso Fiorentino fra devozione e bellezza

<p>Differential distribution pattern of root- identified proteins in the four conditions described: TT, 42T, 42FS and 42RS.</p

Potencial de um complexo enzimático sobre a digestibilidade da casquinha de sojaPotencial de um complexo enzimático sobre a digestibilidade da casquinha de soja

O presente trabalho avaliou o efeito de um complexo multienzimático (CM) sobre a digestibilidade verdadeira in vitro da matéria seca (DVIVMS) da casquinha de soja. Os tratamentos testados foram: T controle (10 mL de água destilada); Nível 1 (2,5 mL de enzimas); Nível 2 (5,0 mL de enzimas) e Nível 3 (10 mL de enzimas). Para cada tratamento, o CM foi aplicado por aspersão em 17 g da casquinha, 2 e 20 horas antes da incubação do substrato com o líquido ruminal. A DVIVMS foi avaliada pela técnica adaptada ao rúmen artificial. O experimento foi instalado em blocos ao acaso, com quatro repetições, em esquema fatorial 2 x 4 (2 tempos de interação enzima-substrato e 4 níveis enzimáticos). Os blocos (repetições) foram constituídos de quatro rúmens. Observou-se digestibilidade de 79,07 e 82,80% para 2 e 20  horas de reação enzima-substrato (E-S), respectivamente. Aumentos de 9,87; 9,23 e 7,1% de digestibilidade foram verificados com adição de 2,5; 5,0 e 10 mL, respectivamente, para a média dos tempos de reação E-S em cada nível de enzima