Caracterização fenotípica e genotípica da microbiota isolada de salames e queijos artesanais em dez capitais brasileiras

Orientadora : Profª. Drª. Ida Chapaval PimentelCoorientador : Profª. Drª. Patricia R. Dalzoto e Profª. Drª. Laura Lúcia CogoTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciencias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 31/03/2016Inclui referências : f. 26-29;43-46;63-67;85-88Área de concentraçãoResumo: Queijos e salames são alimentos prontos para consumo e artesanalmente produzidos são mais susceptíveis à contaminação microbiana. Poucos estudos tem verificado a qualidade desses alimentos provenientes de diferentes regiões do Brasil. Um dos parâmetros usados para avaliar a qualidade microbiológica de produtos de origem animal é a quantificação de Escherichia coli, Staphylococcus coagulase positiva, e pesquisa de Salmonella spp. e Listeria monocytogenes. A presença destes, além do risco de uma infecção ou intoxicação alimentar, indica contaminação e com isto, possibilidade de outras doenças com transmissão oral-fecal. Da mesma forma, a resistência a antimicrobianos com capacidade de aderência e formação de biofilme encontradas em cepas isoladas de alimentos, é preocupante do ponto de vista epidemiológico, pois indica disseminação de cepas resistentes. Neste contexto, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a qualidade microbiológica de 32 amostras de queijos e 13 de salames artesanais, adquiridos comercialmente, em casas de produtos artesanais ou feiras de produtores nas regiões metropolitana de dez capitais brasileiras. Análises microbiológicas com respectivas contagens de indicadores de contaminação microbiana, Escherichia coli e Staphylococcus coagulase positiva, bem como pesquisa dos patógenos Listeria monocytogenes e Salmonella spp. foram realizadas através de métodos bacteriológicos. Além de pesquisar genes de virulência, diarreiogênicos ou codificadores de enterotoxina estafilocócica, avaliou-se o perfil de susceptibilidade a antimicrobianos comumente utilizados na clínica humana, capacidade de formação de biofilme e aderência a células HeLa em E. coli e Staphylococcus coagulase positiva. Nas amostras de queijos analisadas foram observadas E. coli em 50,0%, Staphylococcus coagulase positiva em 34,4% e Salmonella spp. em 6,3%. Nas amostras de salames foram observadas Staphylococcus coagulase positiva em 23,1% e Salmonella spp. em 7,7%. Nenhuma das amostras apresentou genes codificadores de E. coli diarreiogênicas. A pesquisa dos genes codificadores de enterotoxinas demonstrou a presença de genes seg, sei, sen e seu. Quanto ao perfil de susceptibilidade a antimicrobianos, 28,9% das amostras apresentaram isolados resistentes a antimicrobianos. Resistência a duas ou mais classes de antimicrobianos foram observados em 20,0% das amostras. Todos os isolados apresentaram capacidade de formação de biofilme, e 26,7% das amostras apresentaram capacidade de aderência em células HeLa. De acordo com as regulamentações da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA), cerca de 51% das amostras de alimentos artesanalmente produzidas na Região Metropolitana de dez capitais brasileiras estavam impróprias para consumo, concluindo-se a importância de um monitoramento próximo e efetivo para prevenir surtos de origem alimentar. Apesar de não terem sido isoladas E. coli diarreiogênicas, a presença de Staphylococcus coagulase positiva enterotoxigênicas, isolados resistentes a antimicrobianos, capazes de formarem biofilmes e aderirem em células teciduais podem representar um potencial risco à saúde de seus consumidores. Palavras chave: resistência antimicrobiana; intoxicação alimentar estafilocócica; genes de virulência; Listeria monocytogenes, Salmonella spp., qualidade microbiológica.Abstract: Cheeses and fermented sausages are ready-to-eat foods, and the artisanal production process of these foods is susceptible to microbial contamination. Few studies have examined the quality of these foods from different Brazilian regions. One of the parameters used to evaluate the microbiological quality of animal origin products is the quantification of Escherichia coli, coagulase-positive staphylococci and the presence of Salmonella spp. and Listeria monocytogenes. The presence of them, besides the risk of food poisoning or an infection indicates contamination and thus, the possibility of other diseases with fecal-oral transmission. Similarly, resistance to antimicrobials with adhesion and biofilm formation found in isolated strains of foods worrisome from the epidemiological point, it indicates spread of resistant strains. In this context, the aim of this study was to evaluate the microbiological quality of 32 cheese samples and 13 fermented sausages purchased commercially from artisanal food houses or fair producers from the metropolitan area of ten Brazilian capitals. Microbiological analysis were conducted to determine the counts of microbial contamination indicators, including E. coli and coagulase-positive staphylococci, and evaluate the presence of pathogens like Listeria monocytogenes and Salmonella using bacteriological methods. In addition to searching virulence genes, diarrheagenic or staphylococcal enterotoxin encoders evaluated the susceptibility profile to antimicrobials commonly used in human clinical, biofilm-forming ability and adherence to HeLa cells in E. coli and coagulase-positive staphylococci. E. coli was detected in 50.0% of samples, coagulase-positive staphylococci in 34.4%, and Salmonella spp. in 6.3%. In fermented sausage samples, we detected coagulase-positive staphylococci in 23.1% of samples and Salmonella spp. in 7.7%. None of the samples showed genes encoding diarrheagenic E. coli. The research of the genes encoding enterotoxins showed the presence of seg, sei, sen and seu genes. As for the susceptibility profile to antimicrobials, 28.9% of the samples had isolates resistant to antimicrobials. Resistance to two or more classes of antimicrobials were observed in 20.0% of samples. All isolates have biofilm formation capacity, and 26.7% of the samples adherence capacity in HeLa cells. According to Brazilian Health Regulatory Laws (ANVISA), about 51% of the artisanal food samples from the metropolitan areas of 10 capital cities were improper for consumption, indicating the importance of close monitoring of these foods and effective measures for preventing foodborne outbreaks. Although they have not been isolated E. coli diarrheagenic, the presence of enterotoxigenic coagulase-positive staphylococci isolates resistant to antimicrobials, capable of forming biofilms and adhere to tissue cells may represent a potential risk to the health of its consumers. Keywords: Antimicrobial resistance, food poisoning, virulence genes, Listeria monocytogenes, Salmonella spp., microbiological qualit

PHYSICAL-CHEMICAL AND MICROBIOLOGICAL EVALUATION OF DIPYRONE AND ITS RELATIONSHIP WITH STORAGE HOUSEHOLD’S PROFILE

A dipirona é um dos analgésicos mais populares no Brasil, estando presente na maioria das “farmácias caseiras”. Essa prática de estocagem domiciliar, geralmente encontra-se de forma inadequada, o que pode levar a alterações físico-químicas e microbiológicas do produto farmacêutico. O objetivo deste trabalho foi verificar alterações na estabilidade de diferentes formas farmacêuticas de dipirona sódica, bem como comparar as características de armazenamento de medicamentos em residências. Para tal, foram simuladas em diferentes condições de armazenamento amostras de comprimidos, solução oral e xarope, durante quatro meses, sendo posteriormente analisadas conforme critérios estabelecidos pela Farmacopeia Brasileira 5ª edição. Para apresentações da dipirona solução oral e xarope, foram realizados testes de pH e segurança biológica (contagem de micro-organismo mesófilos e bolores/leveduras); para os comprimidos, foram realizados os testes de friabilidade, desintegração e doseamento. Os resultados obtidos das análises apresentaram determinações de pH entre 6,11 e 6,96 (dentro dos padrões); não observou-se crescimento de micro-organismos aeróbios e o desenvolvimento de fungos permaneceu <101 UFC/g; todas as amostras foram desintegradas em menos de 10 minutos; para o teste de friabilidade detectaram-se perdas não superiores a 0,60% e para o teor do fármaco as perdas se mantiveram inferiores a 10% do valor nominal. Assim, pode-se concluir que, durante o período da simulação, nenhuma das amostras apresentou variações de acordo com padrões farmacopeicos. Porém, se a exposição aos fatores ambientais continuar associada a um tempo mais prolongado de armazenamento e à falta de higiene na manipulação, os medicamentos estão sujeitos a sofrer alterações físico-químicas e microbianas

AVALIAÇÃO DA QUALIDADE MICROBIOLÓGICA DE ÁGUAS MINERAIS ENVASADAS - DINÂMICA POPULACIONAL DE Pseudomonas aeruginosa

Com o intuito de monitorar alterações no índice de contaminação durante o armazenamento, foram avaliadas quanto à contaminação por Pseudomonas aeruginosa setenta e cinco amostras, de cinco marcas distintas, de água mineral envasadas em copos ou garrafas plásticas de 500 mL e 1500 mL. Os ensaios foram efetuados em dois períodos diferenciados, o primeiro um dia após aquisição das amostras no ponto de venda e o segundo quando as amostras completaram seis meses de armazenamento. Segundo os padrões determinados pela RDC n. 275/05 do Ministério da Saúde, 53% dos lotes foram rejeitados. O monitoramento da contaminação durante o armazenamento revelou que, independente da elevação ou redução nas contagens, P.aeruginosa foi detectada mesmo após 180 dias de estocagem, confirmando que se trata de micro-organismo que se adapta em ambientes com baixo teor nutricional. O percentual de rejeição das amostras revelou a necessidade de práticas de higiene mais efetivas a serem adotadas durante o envase, garantindo a comercialização de produtos seguros e que atendam aos rigorosos padrões microbiológicos estabelecidos pela legislação brasileira

Incidência, fatores de virulência e resistência a antibióticos de Escherichia coli e Enterococcus spp isolados como indicadores de contaminação fecal em água de consumo de fontes alternativas de Curitiba e região metropolitana

Resumo: Águas provenientes de fontes e poços comunitários são consideradas fontes alternativas de abastecimento, no entanto para serem consumidas por seres humanos devem apresentar-se livres de indicadores de contaminação fecal. Microorganismos entéricos como coliformes termotolerantes ou Escherichia coli são empregados como indicadores de potabilidade. Enterococcus spp faz parte da flora intestinal normal e também considerado indicador de contaminação fecal, o qual apresenta como característica intrínseca a multirresistência a drogas antimicrobianas e constitui a segunda causa mais importante de infecções hospitalares. Para avaliar o risco de consumo desse tipo de água é necessário avaliar as amostras não só sob o aspecto vinculado aos parâmetros legais, mas principalmente aos vinculados à incidência de isolados resistentes a antibióticos e/ou com fatores de virulência nesses indicadores em virtude da presença de linhagens com potencial risco patogênico. Foram avaliadas 39 amostras de água de fontes alternativas, utilizadas pela população de Curitiba e região metropolitana. A maioria dos isolados de Enterococcus spp foi Enterococcus faecalis (78,4%), seguido de Enterococcus faecium (13,5%). Ao avaliar a sensibilidade aos antibióticos, através do método de disco-difusão, todos os 37 isolados de Enterococcus spp foram sensíveis à vancomicina e ampicilina, no entanto somente 24% foram sensíveis a todos os antibióticos testados, sendo que 37,8% dos isolados apresentaram multirresistência. Os antibióticos que apresentaram menor índice de sensibilidade foram a eritromicina (21,6%), seguido de rifampicina (43,2%) e, dentre os antibióticos de alta resistência, 8,1% dos isolados foram resistentes à gentamicina e 10,8% à estreptomicina. Dentre os 23 isolados de E. coli, todos foram sensíveis à efoxitina, gentamicina, ciprofloxacin, amicacina e cefepime, no entanto somente 39,1% foram sensíveis a todos os antibióticos testados e 26,1% dos isolados apresentaram multirresistência. Os antibióticos que apresentaram menor índice de sensibilidade foram eropenem (69,6%), seguido de cefuroxima (78,3%). Dentre os fatores de virulência em Enterococcus spp, 40,5% apresentaram gelatinase, 43,2% caseinase, 32,4% hemolisina, 2,7% beta-lactamase e 35,1% gene ace. Não foram detectados fatores e genes de virulência diarreiogênicos nos isolados de E. coli. O potencial risco patogênico pelo consumo de águas provenientes de fontes alternativas em áreas urbanas revelou-se pelo fato de estarem sendo consumidas sem desinfecção prévia e onde somente 30,8% das amostras apresentaram-se livres de indicadores de contaminação fecal, e também pela presença de linhagens resistentes a antibióticos e/ou Enterococcus spp carreando fatores de virulência e/ou gene de virulência. Ao recuperar Enterococcus spp em 25,6% dos pontos onde E. coli não foi detectada, a inclusão deste indicador contaminação fecal torna-se necessária, potencializado pelo fato de que linhagens avirulentas podem tornar-se virulentas através da transferência de genes de resistência e/ou de virulência e pela seleção positiva de linhagens resistentes, principalmente pela habilidade de colonizar o trato gastrointestinal em paciente sob antibioticoterapia prolongada

PESQUISA DE CAMPYLOBACTER SPP. EM CARNES DE FRANGO COMERCIALIZADAS NA CIDADE DE CAMPO MOURÃO-PR

A campilobacteriose causa um grande impacto na saúde pública em todo o mundo, sendo em muitos pa- íses a causa mais frequente de gastroenterite em humanos causada por alimentos. A principal fonte de Campylobacter são as aves, dessa forma, pode haver infecção pelo consumo de carne crua, mal cozida, contaminação cruzada no preparo dos alimentos ou por outros alimentos, como água e leite. O despreparo de muitos manipuladores de alimentos em relação a cuidados higiênicos é um dos fatores que favorece a contaminação dos alimentos, afetando principalmente ambientes como restaurantes, hospitais e indústrias de alimentos. Como o congelamento e a refrigeração têm o papel de conservar a carne em bom estado para o consumo, à detecção de bactérias viáveis nesta etapa é muito importante. Diante do exposto acima, o presente estudo teve como objetivo avaliar a ocorrência de Campylobacter spp. em frangos refrigerados comercializados na cidade de Campo Mourão-PR por meio do teste imunoenzimático pelo método ELFA (Enzime Linked Fluorescent Assay) com o sistema automatizado VIDAS® campy. Dessa maneira, foi possível detectar uma contaminação de 79,16% em 24 frangos, confirmando a grande incidência de Campylobacter em carnes de aves destinadas ao consumo humano