The tRNA methyltransferase Dnmt2 is required for accurate polypeptide synthesis during haematopoiesis

The Dnmt2 enzyme utilizes the catalytic mechanism of eukaryotic DNA methyltransferases to methylate several tRNAs at cytosine 38. Dnmt2 mutant mice, flies, and plants were reported to be viable and fertile, and the biological function of Dnmt2 has remained elusive. Here, we show that endochondral ossification is delayed in newborn Dnmt2-deficient mice, which is accompanied by a reduction of the haematopoietic stem and progenitor cell population and a cell-autonomous defect in their differentiation. RNA bisulfite sequencing revealed that Dnmt2 methylates C38 of tRNA Asp(GTC), Gly(GCC), and Val(AAC), thus preventing tRNA fragmentation. Proteomic analyses from primary bone marrow cells uncovered systematic differences in protein expression that are due to specific codon mistranslation by tRNAs lacking Dnmt2-dependent methylation. Our observations demonstrate that Dnmt2 plays an important role in haematopoiesis and define a novel function of C38 tRNA methylation in the discrimination of near-cognate codons, thereby ensuring accurate polypeptide synthesis

Stem cell function and stress response are controlled by protein synthesis.

Whether protein synthesis and cellular stress response pathways interact to control stem cell function is currently unknown. Here we show that mouse skin stem cells synthesize less protein than their immediate progenitors in vivo, even when forced to proliferate. Our analyses reveal that activation of stress response pathways drives both a global reduction of protein synthesis and altered translational programmes that together promote stem cell functions and tumorigenesis. Mechanistically, we show that inhibition of post-transcriptional cytosine-5 methylation locks tumour-initiating cells in this distinct translational inhibition programme. Paradoxically, this inhibition renders stem cells hypersensitive to cytotoxic stress, as tumour regeneration after treatment with 5-fluorouracil is blocked. Thus, stem cells must revoke translation inhibition pathways to regenerate a tissue or tumour.This work was funded by Cancer Research UK (CR-UK), Worldwide Cancer Research, the Medical Research Council (MRC), the European Research Council (ERC), and EMBO. Research in Michaela Frye's laboratory is supported by a core support grant from the Wellcome Trust and MRC to the Wellcome Trust-Medical Research Cambridge Stem Cell Institute.This is the author accepted manuscript. The final version is available from Nature Publishing Group via http://dx.doi.org/10.1038/nature1828

La partecipazione in caduta libera e i diversi volti dell'astensione

Il capitolo esplora le motivazioni dell'eccezionale livello di astensionismo nelle elezioni italiane del 2022, attraverso un'analisi del questionario pre-post elettorale di Itanes. Le ragioni del marcato declino di partecipazione sono da ricondurre sia a fattori socio-economici che a fattori politici. Nel 2022 si è uleriormente allargato il divario socio-economico fra votanti e astensionisti (con questi ultimi collocati nei settori più marginali della scoietà); d'altra parte l'astensionismo è aumentato in misura significativa anche in settori di elettorato che in precedenza si era rivolto ai partiti "di protesta" (in primis in Movimento Cinque Stelle)

Dentro il Movimento: organizzazione, attivisti e programmi

Attraverso una ricerca sul campo realizzata fra maggio e settembre 2012 con interviste in profondit\ue0 ad attivisti e rappresentanti eletti del Movimento 5 stelle, questo contributo fotografa il M5s in una fase particolare della sua storia politica, successiva al primo periodo di insediamento territoriale, ma precedente alla decisione di presentarsi all\u2019appuntamento cruciale delle elezioni politiche. La nostra ricognizione dall\u2019interno consente di ricostruire i diversi aspetti, organizzativi e programmatici, che caratterizzano il partito. Sul piano organizzativo,diamo conto della capacit\ue0 di costruire \u2013 a livello locale \u2013 forme decisionali pi\uf9 orizzontali e inclusive rispetto a quelle dei partiti tradizionali e di utilizzare la rete internet in modo innovativo ed efficace, soprattutto come strumento di reclutamento. Le stesse caratteristiche dell\u2019attivista tipico del Movimento, istruito, politicamente consapevole ma anche assai insoddisfatto del funzionamento della democrazia, hanno contribuito ad alimentare questa domanda di \uabaltra politica\ubb. Dal punto di vista programmatico, la mobilitazione \ue8 avvenuta su una piattaforma che rimanda a tematiche post-materialiste (neo-ambientalismo, qualit\ue0 della vita e della politica, partecipazione diretta dei cittadini) che in Italia non hanno trovato un partito in grado di recepirle appieno. Questi aspetti hanno permesso al M5s di accreditarsi come formazione post-ideologica e di accogliere persone provenienti da percorsi politici molto diversi fra loro. D\u2019altra parte, sono emersi anche alcuni nodi problematici su cui \ue8 opportuno soffermarsi. L\u2019espansione del partito ha portato inevitabilmente a una maggiore diversificazione degli aderenti, sia attivisti che semplici simpatizzanti. Al momento di elaborare una piattaforma elettorale nazionale, tale eterogeneit\ue0 sociale, politica e ideologica potr\ue0 essere fonte di divisioni e malcontento, essendo il M5s obbligato, a quel punto, a prendere posizione su una serie di temi \uabscomodi\ubb (dalle ricette per uscire dalla crisi economica all\u2019immigrazione, al welfare) che potevano essere ignorati nei programmi locali. Ancora pi\uf9 complesse risultano essere, per\uf2, le questioni organizzative e, nello specifico, il problema della rappresentanza del Movimento e della strutturazione a livello nazionale del partito. Il M5s nasce dalla decisione dei Meetup pre-esistenti in rete di passare dalla discussione al terreno pi\uf9 concreto della mobilitazione offline, trasformandosi in gruppi locali che accettano di concorrere alle elezioni amministrative. Ma \ue8 solo quando il partito mostra le sue potenzialit\ue0 di crescita, vincendo le prime sfide, e quando tali potenzialit\ue0 finiscono per essere proiettate sul terreno delle elezioni, e quindi del governo, che si palesano tutte le difficolt\ue0 del passaggio al livello nazionale. L\u2019espulsione di Valentino Tavolazzi e successivamente il \uabcaso Favia\ubb sono solo le due emersioni pi\uf9 clamorose di queste insidie che da tempo serpeggiano fra i militanti: come strutturare il partito a livello nazionale? come trasferire oltre l\u2019ambito locale le pratiche che hanno avuto successo nelle citt\ue0, che sono rese possibili dai piccoli numeri delle realt\ue0 comunali? Il processo di istituzionalizzazione, inevitabile per tutte le formazioni che si proiettano su uno scenario politico pi\uf9 ampio, ha posto all\u2019ordine del giorno problemi quali la creazione di una struttura centralizzata e di un gruppo dirigente deputato a decidere (o decidere come e chi far decidere) rispetto alle candidature e al programma. Nel caso del M5s tale processo si scontra per\uf2 con l\u2019immagine, fortemente radicata tra i militanti e da essi sponsorizzata come elemento di originalit\ue0 e diversit\ue0 nelle manifestazioni pubbliche, di partito fatto da gruppi locali, che decidono autonomamente e senza ingerenze esterne. Gli stessi attivisti intervistati sembrano coscienti delle difficolt\ue0 della sfida, ed oscillano fra la preoccupazione (\uabprobabilmente falliremo quando comincerem..

Genomic organization and chromosomal localization of the mouse Connexin36 (mCx36) gene

Connexin36 (Cx36) is a new connexin that was recently cloned in mouse, rat and human. It is highly expressed in neurons of the CNS. To gain insight into the transcriptional regulation of this gene, we have cloned the genomic region containing the entire mCx36 gene and sequenced about 7.6 kb around the coding region. The computer analysis of this sequence was helpful in defining putative regulative sequences. Using both 5'-RACE and RNAse protection assay, we have mapped the transcription starting site commonly used in both adult olfactory bulb and brain, in position −479 from the ATG. By 3'-RACE, we defined the polyadenylation site used that is located 1436 nt downstream the stop codon. The expected transcript is 2875 nt long and is consistent with the 2.9 kb transcript found in the same tissues by Northern blot. Finally, we have mapped mCx36 on chromosome 2 in the position F3 in a region that is synthenic to human chromosome 15q14, where the human Cx36 gene has been recently mapped

Otx2 controls identity and fate of glutamatergic progenitors of the thalamus by repressing GABAergic differentiation

GABAergic and glutamatergic neurons modulate inhibitory and excitatory networks in the CNS, and their impairment may cause neurological and psychiatric disorders. Thus, understanding the molecular mechanisms that control neurotransmitter phenotype and identity of excitatory and inhibitory progenitors has considerable relevance. Here we investigated the consequence of Otx2 (orthodenticle homolog) ablation in glutamatergic progenitors of the dorsal thalamus (referred to as thalamus). We report that Otx2 is cell-autonomously required in these progenitors to repress GABAergic differentiation. Our data indicate that Otx2 may prevent GABAergic fate switch by repressing the basic helix-loop-helix gene Mash1 (mammalian achaete-schute homolog) in progenitors expressing Ngn2 (neurogenin homolog). The lack of Otx2 also resulted in the activation of Pax3 (paired box gene), Pax7, and Lim1 (Lin-11/Isl-1/Mec-3), three genes normally coexpressed with Mash1 and GABAergic markers in the pretectum, thus suggesting that thalamic progenitors lacking Otx2 exhibit marker similarities with those of the pretectum. Furthermore, Otx2 ablation gave rise to a marked increase in proliferating activity of thalamic progenitors and the formation of hyperplastic cell masses. Thus, this study provides evidence for a novel and crucial role of Otx2 in the molecular mechanism by which identity and fate of glutamatergic precursors are established in the thalamus. Our data also support the concept that proper assignment of identity and fate of neuronal precursors occurs through the suppression of alternative differentiation programs.This work was supported by Medical Research Council (MRC) Grant G9900955, Wellcome Trust Grant 062642/Z100, Italian Association for Cancer Research, Eubiotech Grant QLG3-CT-2000-023109, Fondo per gli Investimenti della Ricerca di Base (FIRB) Genotopo, FIRB Neuroscienze, Ministero dell'Istruzione, dell'Università, e della Ricerca (DM 8/10/96, number 623), and the Fondation Bettencourt Schueller (all to A.S.), by MRC Grant G117/978 (to D.A.), and by grants from the European Community Biotech Programme, Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale, Centre National de la Recherche Scientifique, Hôpital Universitaire de Strasbourg, and MRC (all to S.-L.A.).Peer reviewe