Studies of combine types of grain sorghums

Typescript, etc.Digitized by Kansas State University Librarie

Oral History of Legendary Tre Blahnik AKA Trebra Taylor

Legendary DMV Father Tre Blahnik talks about his introduction to ballroom at Baltimore’s Club Bunns, the ways ballroom helped him embrace his gay identity, and the ways it helped him become an outgoing and confident leader in the scene. He describes Baltimore and Maryland, the personalities of different houses, and the bold fashion that attracted him to the runway category. He discusses his experiences as a ball commentator and the father of a house, and about his job as a sexual health outreach worker and its connection to the ballroom scene. This oral history was recorded as part of the Peabody Ballroom Experience, a public humanities collaboration between Johns Hopkins University and the performance-based culture known as ballroom

Oral History of Legendary Tre Blahnik AKA Trebra Taylor

Legendary DMV Father Tre Blahnik talks about his introduction to ballroom at Baltimore’s Club Bunns, the ways ballroom helped him embrace his gay identity, and the ways it helped him become an outgoing and confident leader in the scene. He describes Baltimore and Maryland, the personalities of different houses, and the bold fashion that attracted him to the runway category. He discusses his experiences as a ball commentator and the father of a house, and about his job as a sexual health outreach worker and its connection to the ballroom scene. This oral history was recorded as part of the Peabody Ballroom Experience, a public humanities collaboration between Johns Hopkins University and the performance-based culture known as ballroom

Identification of a new, essential operator for the regulation of capsule biosynthesis in enterobacteria

Titelblatt und Inhaltsverzeichnis Zusammenfassung 5 Abstract 6 1\. Einleitung 7 1.1. Bakterielle Polysaccharide 7 1.2. Funktionen bakterieller Kapseln 8 1.3. Die industrielle Nutzung bakterieller Exopolysaccharide 9 1.4. Typisierung von Kapselpolysacchariden 10 > 1.5. Die Kapseln von Ew. amylovora, P. stewartii subsp. stewartii und E. coli 12 1.6. Aufgabenstellung 21 2\. Materialien 22 2.1. Benutzte Geräte 22 2.2. Bakterienstämme und Plasmide 23 2.3. Medien, Puffer und Lösungen 24 2.4. Primer für die PCR bzw. zur Rekonstitution von Promotorfragmenten 29 3\. Methoden 33 3.1. Herstellung elektrokompetenter Bakterienzellen 33 3.2. Herstellung Calcium-kompetenter E. coli Zellen 33 3.3. Transformation elektrokompetenter Bakterienzellen (Elektroporation) 33 3.4. Transformation Calcium-kompetenter Bakterienzellen 34 3.5. Analytische Präparation bakterieller Plasmid-DNA durch alkalische Lyse 34 3.6. Plasmid-DNA-Gewinnung im präparativen Maßstab 35 3.7. DNA-Amplifikation duch die Polymerase-Kettenreaktion (polymerase chain reaction, PCR) 35 3.8. Sequenzspezifische DNA-Spaltung durch Restriktionsendonukleasen 36 3.9. Ligation von DNA-Fragmenten 37 3.10. Agarose Gelelektrophorese zur Größentrennung von DNA-Fragmenten 37 3.11. DNA Elution aus Agarose-Gelen 38 3.12. Photometrische DNA-Konzentrationsbestimmung 39 3.13. Beta-Galaktosidase-Reportergen-Assay (ONPG-Test) 39 3.14. Digoxigenin-Markierung von Oligonukleotid-Sonden für den Southern-Blot 41 3.15. Southern Blot 41 3.16. Überexpression von Proteinen in E. coli 43 3.17. Zellaufschluß durch Druck in der French Press 45 3.18. Gelperfusionschromatographie 46 3.20. Dialyse 47 3.21. Proteinkonzentrationsbestimmung nach Bradford 48 3.22. Diskontinuierliche SDS-Polyacrylamidgelelektrophorese (SDS-PAGE) 48 3.23. Färbung von SDS-Polyacrylamid-Gelen mit Coomassie Brilliant Blue 49 3.24. In-vitro-Phosphorylierung von Proteinen 50 3.25. EPS-Präparation 50 3.26. Anthron-Test zur Bestimmung der Glucose-Konzentration 51 3.27. Hybridisierung von Oligonukleotiden 51 3.28. Radioaktive Markierung von Oligonukleotiden mittels Fill-in 51 3.29. Elektrophoretischer Mobilitäts Shift Assay (EMSA) 52 3.30. Szintillationsmessung 53 3.31. In-vitro-Selektion (SELEX) 54 3.32. DNA-Elution aus Polyacrylamidgelen 54 3.33. DNA-Sequenzierung nach Sanger 55 3.34. Biomolekül-Interaktions-Studien mit der Oberflächen Plasmon Resonanz (surface plasmon resonance, SPR) 56 3.35. In-vivo-Mutagenese der bakteriellen chromosomalen DNA durch homologe Rekombination 60 3.36. Isolation bakterieller chromosomaler DNA 63 4\. Ergebnisse 64 4.1. Charakterisierung des RcsAB-DNA-Komplexes am Ew. amylovora amsG-Promotor 64 4.2. Bestimmung eines RcsA/RcsB Bindungsmotivs im amsG-Promotor 67 4.3. Identifikation einer RcsA/RcsB-Bindungsstelle im P. stewartii cpsA- Promotor 70 4.4. Lokalisierung einer RcsA/RcsB-Bindungsstelle im E. coli wza-Promotor 73 4.5. RcsA und RcsB binden an die rcsA-Promotoren von E. coli, K. pneumoniae, S. typhi und Ew. amylovora 82 4.6. Identifikation einer RcsAB-Box in den Gen-Clustern für die K2-Antigen- Expression in K. pneumoniae und für die Vi-Anitgen-Expression in S. typhi 88 4.7. Das RcsAB-Heterodimer und BvgA, ein transkriptioneller Regulator aus Bordetella pertussis, erkennen gleiche DNA-Sequenzen. 89 4.8. Identifikation von RcsAB-Bindungsstellen an intergenische Regionen innerhalb des wza-Operons zur Colansäure-Biosynthese von E. coli 91 4.9. Identifikation von RcsAB-Bindungsstellen in intergenischen Regionen innerhalb des ams-Operons zur Amylovoran-Biosynthese von Ew. amylovora 95 4.10. Konstruktion dreier Mutanten-RcsB-Proteine im Phosphorylierungsmotiv 99 5\. Diskussion 111 6\. Literatur 120 7\. Anhang 130 Lebenslauf 130 Veröffentlichungen 131 Danksagung 133Die Fähigkeit zur Ausbildung von Kapseln ist unter Bakterien sehr weit verbreitet. Diese Kapseln bestehen aus langkettigen, modular aufgebauten Polysacchariden und stellen die Schnittstelle für die Interaktion des Bakteriums mit seiner Umwelt dar. Bei pathogenen Organismen dient das EPS (Exopolysaccharid) dem Schutz vor Wirts-Abwehrmechnismen und ist gleichzeitig ein zentraler Virulenzfaktor. Die Enterobakterien Escherichia coli, Erwinia amylovora und Pantoea stewartii subsp. stewartii bilden die EPS Colansäure, Amylovoran und Stewartan. Alle diese Kapseln gehören zur Gruppe IA der bakteriellen Polyasccharide. Die Kapsel-Biosynthesegene sind in Operon-artigen Genclustern organisiert (den wza- ams- und cps-Clustern) und werden vom Rcs- System (regulation of capsule synthesis), mit den drei Kernproteinen RcsA, dem durch Phosphorylierung in seiner Aktivität modulierbaren RcsB und RcsC, einem membranständigen Sensorprotein mit Kinaseaktivität, reguliert. Zur Aktivierung der Transkription bindet ein RcsA/RcsB-Heterodimer (RcsAB) an die jeweiligen Promotorsequenzen und initiiert so die mRNA-Synthese. Im Rahmen dieser Arbeit ist es gelungen, die RcsAB/DNA-Interaktion näher zu charakterisieren. Die apparente Gleichgewichtskonstante KD des RcsAB/ams-Promotor-Komplexes konnte mit Hilfe von Bandshift-Experimenten zu 100 nM, die des RcsAB/wca-Promotors durch Einsatz der Surface Plasmon Resonance (SPR) Technik zu 77 nM bestimmt werden. Durch eine in-vitro-Selektion des ams-Promotors konnte eine erste Konsensussequenz der RcsAB-Bindung formuliert werden (Wehland et al., 1999), die es ermöglichte, durch Datenbankrecherche und EMSA-Bindungsstudien insgesamt 13 RcsAB-Bindungsstellen sowohl in den EPS- und rcsA-Promotoren von E. coli, E. amylovora, P. stewartii, Salmonella typhi und Klebsiella pneumoniae K2, also auch in den bvgA\- und fha-Promotoren von Bordetella pertussis und B. parapertussis zu identifizieren. Durch die Zusammenstellung aller Sequenzen war es möglich, ein allgemeines RcsAB-Bindungsmotiv, TaAGaatatTCctA, die in dieser Arbeit so benannte RcsAB-Box zu formulieren (Wehland et al., 2000). Die essentielle Rolle der RcsAB-Box bei der EPS- Regulation konnte durch in-vivo-Experimente bestätigt werden. Neben den RcsAB- Bindungsstellen in den jeweiligen Hauptpromotoren wurden außerdem in den ams\- und wca-Operons interne, schwächere Bindungsstellen gefunden, deren biologische Bedeutung aber noch nicht geklärt ist. Die RcsAB-Bindung an rcsA- Promotoren wurde erstmals gezeigt. In-vitro Bindungsassays und in-vivo- Experimente bekräftigten übereinstimmend die zentrale Rolle der RcsAB-Box. Eine Mutation des RcsB-Proteins (RcsB(11D-A)) in seinem Phosphorylierungsmotiv führte zu konstitutiver, RcsA-unabhängiger EPS-Synthese in E. coli. SPR- Analysen ergaben, daß RcsB(11D-A) gegenüber dem Wildtyp-Protein eine zehnfach erhöhte DNA-Affinität besitzt und durch Phosphorylierung nicht deaktiviert werden kann. SPR- und in-vivo-Studien zeigten auch hier, daß die Abwesenheit einer RcsAB-Box die RcsB/DNA-Interaktion komplett beseitigte. Im Rahmen dieser Untersuchungen gelang außerdem mittels SPR-Messungen erstmals der Nachweis einer RcsA/RcsB-Interaktion in Lösung.The ability to form capsules is a widespread feature between various bacterial species. The capsules consist of long, modular polysaccharides and represent the interface for the interaction of the bacteria with their environment. Furthermore, the exopolysaccharide (EPS) of pathogenic organisms serves as a protection against host-defense mechanisms and is also an important virulence determinant. The enterobacteria Escherichia coli, Erwinia amylovora, and Pantoea stewartii subsp. stewartii synthesize the EPS colanic acid, amylovoran, and stewartan, respectively. All these capsules belong to the group IA of bacterial polysaccharides. Their biosynthetic genes are organized in operon-like clusters (the wca-, ams-, and cps-cluster) and are regulated by the Rcs (regulation of capsule synthesis) system, consisting of the three proteins RcsA, RcsB, whose activity can be modulated by phosphorylation, and RcsC, a membrane located sensor kinase. Activation of transcription is achieved by binding of an RcsA/RcsB heterodimer (RcsAB) to suitable promoter sequences. In this work, the RcsAB/DNA interaction was further characterized. The apparent equilibrium constant KD = 100 nM of the RcsAB/ams-promoter complex has been determined using the bandshift technique, while the KD = 77 nM of the RcsAB/wza-promoter complex was calculated using the surface plasmon resonance (SPR) technique. An in vitro selection of the ams-promoter made it possible to formulate a first consensus motif for RcsAB binding (Wehland et al., .1999), which allowed to find 13 more RcsAB binding sites in the EPS- and rcsA\- promoters from E. coli, Ew. amylovora, P. stewartii, Salmonella typhi, and Klebsiella pneumoniae as well as in the bvgA\- and fha-promoters from Bordetella pertussis and B. parapertussis by data bank search. A compilation of these sequences resulted in the finding of a common RcsAB binding motif, the RcsAB box : TaAGaatatTCctA (Wehland et al., 2000). The essential role of the RcsAB box in EPS regulation was additionally confirmed by in vivo experiments Besides the RcsAB binding sites in the EPS main promoters, internal, weaker binding sites inside the ams\- and wca-operons were identified, but their biological function remained unclear. The RcsAB binding to various rcsA promoters has been shown for the first time. In vitro and in vivo experiments confirmed the central role of the RcsAB box for RcsAB/DNA interaction. Expression of an RcsB protein bearing a mutation in its phophorylation motif (RcsB(11D-A)) led to constitutive, RcsA independent EPS synthesis in E. coli. SPR analyses showed a tenfold increased DNA affinity of RcsB(11D-A) compared to the wildtype protein, which cannot be suppressed by phosphorylation. Furthermore, SPR and in vivo studies provided evidence for the involvement of the RcsAB box in RcsB/DNA interaction as a deletion of the RcsAB box abolished RcsB binding completely. Additionally, the first experimental proof together with the kinetic data for an RcsA/RcsB interaction in solution is presented

Relationship of small mammal populations to uniform even-aged shelterwood systems

This study was designed to test the hypothesis that a shelterwood silvicultural system would reduce small mammal population levels in 30% and 50% basal area removal stands. The benefit of an overstory canopy, or shelterwood, may help reduce the frequent frost problems observed in interior Douglas-fir (Pseudotsuga menziesii (Mirb.) Franco var. glauca) plantations, and improve the success of natural regeneration, if seed predation does not threaten the survival of the seed supply. Small mammal population levels, seed fall, seed germination, and seed predation were monitored in order to determine the small mammal population dynamics associated with seed predation in the central interior of British Columbia, Canada. Deer mice (Peromyscus maniculatus) and red-backed voles (Clethrionomys gapperi) were the most common small mammal species sampled prior to harvesting, and both species continued to be dominant in the first and second year post-harvest. There was no negative effect on small mammal populations due to the different intensities of basal area removal. Seed fall crops were recorded the first and second year post-harvest; the seed crop in the second year post-harvest was substantially larger than the first year post-harvest on treatments and controls. Seed predation varied between l5.4x10 and 35.0x10 seeds/ha/month, and seemed to fluctuate with the seasonal small mammal population levels (lower in spring and higher in fall) but not with the amount of seed crop available. Germination occurred in 62% to 63 % of the seeds that survived overwinter, on the seedbeds created during harvesting. Thus, the regeneration success of the stands, with regard to seed survival and establishment, in 30% and 50% basal area removal stands did not seem to be inhibited by the small mammal communities observed on the sites.Forestry, Faculty ofGraduat

Erfahrvngen Vom Innern Der Gebirge

nach Beobachtungen gesammlet und herausgegeben von Friedrich Wilhelm Heinrich von Trebra, Königl. Großbritt. und Churfürstl. Braunschweig-Lüneburgschen Vice-Berghauptmanne ..

Verzeichniß von dem Mineralien-Cabinette des Königl. Großbritt. und Churfürstl. Braunschw. Lüneburg. Berghauptmanns von Trebra, welches derselbe zu Clausthal am 21sten Aug. d. J. und folgenden Tagen Morgens um 9 Uhr und Nachmittags um 2 Uhr durch öffentliche Auction will vereinzeln lassen

Auktionskatalog, Clausthal, 1797von TrebraAutopsie nach Ex. der ULB Sachsen-AnhaltVorlageform des Erscheinungsvermerks: Clausthal gedruckt bey J. C. Wendeborn. 179

Entwürfe für Polizey am Harze

[erm. Verf.: Friedrich Wilhelm Heinrich von Trebra]Fingerprint nach Ex. der ULB Sachsen-Anhalt und SUB GöttingenErscheinungsjahr dem handschriftl Vermerk des Verf. und dem Text entn

Erfahrvngen Vom Innern Der Gebirge

nach Beobachtungen gesammlet und herausgegeben von Friedrich Wilhelm Heinrich von Trebra, Königl. Großbritt. und Churfürstl. Braunschweig-Lüneburgschen Vice-Berghauptmanne ...Auf dem Titelblatt handschriftlicher Besitzvermerk von Johann Conrad Esche