Análisis de las propiedades inmunogénicas de las glicoproteínas de envoltura del virus de Distemper Canino expresadas en Pichia Pastoris

El virus del distemper canino o CDV es un patógeno que afecta a los miembros de la familia Canidae, causando una enfermedad aguda, sistémica y frecuentemente mortal. Predispone al hospedador a las infecciones bacterianas secundarias y a posibles secuelas de tipo neurológico. La protección contra el CDV se logra a través de la vacunación. La mayoría de las vacunas se elaboran a partir de virus atenuado por pasaje en huevos embrionados o cultivos celulares. Sin embargo, estas vacunas han demostrado no proteger completamente contra la enfermedad y en muchos casos, han generado reacciones adversas que sugieren la necesidad del desarrollo de nuevas metodologías para su producción. Teniendo en consideración los avances en biología molecular en relación con la producción de proteínas obtenidas de forma recombinante, se propuso como objetivo expresar y evaluar algunas de las proteínas virales utilizando un sistema heterólogo. Con esta metodología se eliminarían las desventajas de los métodos tradicionales. Además, ayudaría a disminuir notablemente los costos de producción. Se trabajó sobre dos proteínas virales descriptas como el blanco principal de los anticuerpos neutralizantes producidos luego de la infección: la hemaglutinina y la proteína de fusión. Ambas proteínas se expresaron en la levadura metilotrófica Pichia pastoris, obteniéndose las mismas de forma recombinante y en un alto grado de pureza. Luego, estas proteínas se emplearon para inocular ratones con el fin de comprobar su capacidad de estimular la respuesta inmune y analizar su capacidad neutralizante. Los resultados obtenidos sugieren que ambos polipétidos han conservado los determinantes antigénicos presentes en la partícula viral y generaron una buena respuesta inmune. Por lo tanto podrían ser utilizados para el desarrollo de una vacuna a subunidades.Facultad de Ciencias Veterinaria

Complete genome amplification of Equine influenza virus subtype 2

This work reports a method for rapid amplification of the complete genome of equine influenza virus subtype 2 (H3N8). A ThermoScriptTM reverse transcriptase instead of the avian myeloblastosis virus reverse transcriptase or Moloney murine leukemia virus reverse transcriptase was used. This enzyme has demonstrated higher thermal stability and is described as suitable to make long cDNA with a complex secondary structure. The product obtained by this method can be cloned, used in later sequencing reactions or nested-PCR with the purpose of achieving a rapid diagnosis and characterization of the equine influenza virus type A. This detection assay might be a valuable tool for diagnosis and screening of field samples as well as for conducting molecular studies.En este trabajo comunicamos un método rápido que permite la amplificación del genoma completo del subtipo 2 (H3N8) del virus de la influenza equina. Se utilizó la enzima transcriptasa reversa ThermoScriptTM en lugar de la transcriptasa reversa del virus de la mieloblastosis aviar o la transcriptasa reversa del virus de la leucemia murina de Moloney. Esta enzima ha demostrado tener una alta estabilidad térmica y la capacidad de hacer largas copias de ADN con una estructura secundaria compleja. El producto obtenido por esta técnica puede ser clonado y utilizado posteriormente en reacciones de secuenciación o de PCR anidada con la finalidad de lograr un diagnóstico rápido y la caracterización del virus de la influenza equina tipo A. Este ensayo de detección puede llegar a ser una valiosa herramienta para el diagnóstico y el análisis de muestras de campo, así como para la realización de estudios moleculares

The cloning of the virus envelope glycoprotein F of canine distemper virus expressed in Pichia pastoris

Canine distemper virus (CDV) is a pathogen which affects members of the Canidae family, causing an acute, often fatal, systemic disease. CDV is an RNA virus of the family Paramyxoviridae that contains two envelope glycoproteins: F and HA. In this study, we focused on the envelope glycoprotein F as the main target for neutralizing antibodies produced after infection or vaccination. The complete coding region of the protein (60 kDa) was expressed in the methylotrophic yeast Pichia pastoris, obtained in a recombinant form and secreted to the culture medium. Later, to analyze its immunogenicity, the protein was combined with an oily adjuvant and used to inoculate mice. The results provide evidence supporting a potential application of this recombinant protein as a subunit vaccine.Fil: Tizzano, Marco Antonio. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Sguazza, Guillermo Hernán. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Picotto, Leandro Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Echeverria, Maria Gabriela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Pecoraro, Marcelo Ricardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentin

Primera comunciación del virus israelí de la parálisis aguda en colmenas asintomáticas de la República Argentina

Honey bee mortality has recently been associated with Israeli acute paralysis virus (IAPV), a proposed etiological agent for a new syndrome known as Colony Collapse Disorder. Bees infected with this virus show shivering wings, progress into paralysis, and finally die outside the hive. During the last years, honey bee mortality became a serious problem for Argentinean beekeepers. We herein report the preliminary results of a survey carried out to detect IAPV in samples taken from several Argentine provinces, by using a reverse transcription Polymerase Chain Reaction assay. Our data indicate the existence of high frequency of IAPV in asymptomatic hives of Argentina.Recientemente la mortalidad de las abejas melíferas ha sido asociada al virus israelí de la parálisis aguda (IAPV), propuesto como agente etiológico del denominado síndrome de despoblamiento de las colmenas. Las abejas infectadas con este virus presentan temblores en las alas que progresan hasta convertirse en parálisis, y finalmente mueren fuera de la colmena. Durante los últimos años, la mortalidad de las abejas melíferas se ha transformado en un serio problema para los productores de miel de la Argentina. Nosotros informamos aquí los resultados preliminares de un estudio realizado para detectar IAPV en muestras de colmenas provenientes de varias provincias argentinas utilizando la técnica de transcripción reversa-reacción en cadena de la polimerasa. Nuestros datos indican la presencia de IAPV en un alto porcentaje de las colonias estudiadas.Fil: Reynaldi, Francisco José. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales. Departamento de Ciencias Biológicas. Centro de Investigaciones de Fitopatología. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigaciones de Fitopatología; ArgentinaFil: Sguazza, Guillermo Hernán. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Microbiología. Cátedra de Virología; ArgentinaFil: Tizzano, Marco Antonio. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Microbiología. Cátedra de Virología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas; ArgentinaFil: Fuentealba, Nadia Analia. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Microbiología. Cátedra de Virología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Galosi, Cecilia Monica. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Microbiología. Cátedra de Virología; ArgentinaFil: Pecoraro, Marcelo Ricardo. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Microbiología. Cátedra de Virología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Rinosporidiosis en equinos de Buenos Aires, Argentina

La rinosporidiosis es una enfermedad causada por Rhinosporidium seeberi, un organismo parasitario clasificado en la familia Rhinosporideacea, clase Micomycetozoa. Es una enfermedad endémica de la India, pero se notificaron algunos casos en Europa, África, América del Norte y América del Sur. El objetivo del presente estudio fue describir tres casos de rinosporidiosis en caballos de vida libre en diferentes ciudades de la provincia de Buenos Ares, Argentina. Confirmamos la presencia de R. seeberi en las muestras analizadas utilizando técnicas histopatológicas, PCR y secuenciación.Rhinosporidiosis is caused by Rhinosporidium seeberi, a parasitic organism of the family Rhinosporideacea family, class Micomycetozoa. The disease is endemic in India; however, some cases were reported in Europe, Africa, North America, and South America. The aim of the present study is to report three cases of rhinosporidiosis in wild horses in different cities of Buenos Aires province, Argentina. We confirm the presence of R. seeberi in the analyzed samples using histopathological and PCR sequencing techniques.Fil: Tizzano, Marco Antonio. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Della Vedova, Romina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Lopez, Ramon Andres. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Amor, Veronica Andrea. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Zubia, Candelaria. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Córdoba, Susana Beatríz. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud "Dr. C. G. Malbrán"; ArgentinaFil: Reynaldi, Francisco José. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata; Argentin

Fibropapillomatosis Associated with Chelonid alphaherpesvirus 5 (ChHV5) in a Green Turtle Chelonia mydas in Argentine Waters

Fibropapillomatosis is a debilitating neoplastic disease associated with Chelonid alphaherpesvirus 5 (ChHV5) infection. We detected the Atlantic variant of ChHV5 associated with a fibropapilloma in a green turtle (Chelonia mydas) found stranded on the western coast of Rio de la Plata, Argentina. This is the southernmost registered case for the southwestern Atlantic.Fil: Origlia, Javier Anibal. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Cátedra de Patología de Aves y Pilíferos; ArgentinaFil: Loureiro, Juan Pablo. Fundación Mundo Marino (fmm);Fil: Tizzano, Marco Antonio. Centro de Microbiologia Basica y Aplicada (cemiba) ; Facultad de Cs.veterinarias ; Universidad Nacional de la Plata;Fil: Maydup, Fernando. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Cátedra de Patología de Aves y Pilíferos; ArgentinaFil: Alvarez, Karina. Fundación Mundo Marino (fmm);Fil: Heredia, Sergio Rodríguez. Fundación Mundo Marino (fmm);Fil: Echeverria, Maria Gabriela. Centro de Microbiologia Basica y Aplicada (cemiba) ; Facultad de Cs.veterinarias ; Universidad Nacional de la Plata; . Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata; ArgentinaFil: Sguazza, Guillermo Hernán. Centro de Microbiologia Basica y Aplicada (cemiba) ; Facultad de Cs.veterinarias ; Universidad Nacional de la Plata

The cloning of the virus envelope glycoprotein F of canine distemper virus expressed in Pichia pastoris

Canine distemper virus (CDV) is a pathogen which affects members of the Canidae family, causing an acute, often fatal, systemic disease. CDV is an RNA virus of the family Paramyxoviridae that contains two envelope glycoproteins: F and HA. In this study, we focused on the envelope glycoprotein F as the main target for neutralizing antibodies produced after infection or vaccination. The complete coding region of the protein (60 kDa) was expressed in the methylotrophic yeast Pichia pastoris, obtained in a recombinant form and secreted to the culture medium. Later, to analyze its immunogenicity, the protein was combined with an oily adjuvant and used to inoculate mice. The results provide evidence supporting a potential application of this recombinant protein as a subunit vaccine.Facultad de Ciencias Veterinaria

Amplificación del genoma completo del subtipo 2 del virus de la influenza equina

This work reports a method for rapid amplification of the complete genome of equine influenza virus subtype 2 (H3N8). A ThermoScriptTM reverse transcriptase instead of the avian myeloblastosis virus reverse transcriptase or Moloney murine leukemia virus reverse transcriptase was used. This enzyme has demonstrated higher thermal stability and is described as suitable to make long cDNA with a complex secondary structure. The product obtained by this method can be cloned, used in later sequencing reactions or nested-PCR with the purpose of achieving a rapid diagnosis and characterization of the equine influenza virus type A. This detection assay might be a valuable tool for diagnosis and screening of field samples as well as for conducting molecular studies.En este trabajo comunicamos un método rápido que permite la amplificación del genoma completo del subtipo 2 (H3N8) del virus de la influenza equina. Se utilizó la enzima transcriptasa reversa ThermoScriptTM en lugar de la transcriptasa reversa del virus de la mieloblastosis aviar o la transcriptasa reversa del virus de la leucemia murina de Moloney. Esta enzima ha demostrado tener una alta estabilidad térmica y la capacidad de hacer largas copias de ADN con una estructura secundaria compleja. El producto obtenido por esta técnica puede ser clonado y utilizado posteriormente en reacciones de secuenciación o de PCR anidada con la finalidad de lograr un diagnóstico rápido y la caracterización del virus de la influenza equina tipo A. Este ensayo de detección puede llegar a ser una valiosa herramienta para el diagnóstico y el análisis de muestras de campo, así como para la realización de estudios moleculares.Facultad de Ciencias Veterinaria

First report of viral infections that affect Argentine honeybees

Honey is one of the most important agricultural products for export in Argentina. In fact, more than 3.5 million beehives and 50 000 beekeepers are related with this production, mainly located in Buenos Aires province. Honeybee mortality is a serious problem that beekeepers in Argentina have had to face during the last 3 years. It is known that the consequence of the complex interactions between environmental and beekeeping parameters added to the effect of different disease agents such as viruses, bacteria, fungi and parasitic mites may result in a sudden collapse of the colony. In addition, multiple viral infections are frequently detected concomitantly in bee colonies. We describe here the preliminary results of a survey of three honeybee-pathogenic viruses, acute bee paralysis viruses (ABPV), chronic bee paralysis viruses (CBPV) and Sacbrood viruses (SBV) detected during a screening of 61 apiaries located in the main honey producer province using a RT-PCR assay. This is the first molecular report of the presence of these viruses in Argentine apiaries.Facultad de Ciencias VeterinariasCentro de Investigaciones en FitopatologíaComisión de Investigaciones Científicas de la provincia de Buenos Aire

Primera comunciación del virus israelí de la parálisis aguda en colmenas asintomáticas de la República Argentina

Honey bee mortality has recently been associated with Israeli acute paralysis virus (IAPV), a proposed etiological agent for a new syndrome known as Colony Collapse Disorder. Bees infected with this virus show shivering wings, progress into paralysis, and finally die outside the hive. During the last years, honey bee mortality became a serious problem for Argentinean beekeepers. We herein report the preliminary results of a survey carried out to detect IAPV in samples taken from several Argentine provinces, by using a reverse transcription Polymerase Chain Reaction assay. Our data indicate the existence of high frequency of IAPV in asymptomatic hives of Argentina.Recientemente la mortalidad de las abejas melíferas ha sido asociada al virus israelí de la parálisis aguda (IAPV), propuesto como agente etiológico del denominado síndrome de despoblamiento de las colmenas. Las abejas infectadas con este virus presentan temblores en las alas que progresan hasta convertirse en parálisis, y finalmente mueren fuera de la colmena. Durante los últimos años, la mortalidad de las abejas melíferas se ha transformado en un serio problema para los productores de miel de la Argentina. Nosotros informamos aquí los resultados preliminares de un estudio realizado para detectar IAPV en muestras de colmenas provenientes de varias provincias argentinas utilizando la técnica de transcripción reversa-reacción en cadena de la polimerasa. Nuestros datos indican la presencia de IAPV en un alto porcentaje de las colonias estudiadas.Centro de Investigaciones en FitopatologíaFacultad de Ciencias Veterinaria