Effect of ipriflavone on Wistar rats and their litters

PURPOSE: Evaluate the effects of ipriflavone during fetogenesis, since no studies have been conducted to assess its effect during this period. METHODS: 60 pregnant rats were divided randomly into four groups (n=15). G-control (1 mL of distilled water) and three groups treated intragastrically with ipriflavone from the 16th to the 20th post coitus (PC) day: G-300 (300 mg/kg), G-1,500 (1,500 mg/kg) and G-3,000 (3,000 mg/kg). The animals were weighed, anaesthetized intraperitoneally with xylazine and ketamine at doses of 180 mg/kg and 10 mg/kg, respectively, and sacrificed by total exsanguination on the 21st day. A complete blood count was performed and serum cholesterol, triglycerides, AST, ALT, urea, creatinine, and glucose were determined in pregnant rats. After laparotomy, the liver, kidneys, adrenals, spleen and ovaries were removed and weighed; fetuses and placentas were also weighed to obtain the average weight of the litters. Four fetuses (two males and two females) were chosen at random for the determination of the length and weight of brain, liver, kidneys and lungs. Statistical analysis: ANOVA followed by Dunnett's test. For raw data without normal distribution and homoscedasticity, we used the Kruskal-Wallis test followed by the Mann-Whitney test. Proportions were analyzed by the χ2 test (p<0.05). RESULTS: Triglyceride levels (mg/dL) were: Control-G (138.8±21.8), G-300 (211.2±63.9) G-1,500 (251.5±65.2) G-3,000 (217.7±49.6); p<0.05. The body weight of fetuses (g) was: G-Control (male 3.3±0.3; female 3.1±0.3), G-300 (male 3.4±0.2; female 3.1±0.4), G-1,500 (male 3.5±0.3; female 3.2±0.3), G-3,000 (male 3.4±0.5; female 3.1±0.4). CONCLUSION: Ipriflavone did not cause maternal toxicity, but increased triglyceride levels and reduced hematocrit at higher doses. The body and organ weights of the fetuses did not change with dam treatment. There were no external malformations or fetal deaths.OBJETIVO: Avaliar os efeitos da ipriflavona durante a fetogênese, já que não foram encontrados estudos visando avaliar seu efeito durante este período. MÉTODOS: Foram utilizadas 60 ratas prenhes, distribuídas aleatoriamente em quatro grupos (n=15). G-controle (1 mL de água destilada) e três grupos tratados com ipriflavona, via intragástrica, do 16º ao 20º dia pós-coito (PC): G-300 (300 mg/kg), G-1500 (1.500 mg/kg) e G-3000 (3.000 mg/kg). Os animais foram pesados e sacrificados no 21º dia por exsanguinação total sob anestesia (xilazina (10 mg/kg) e quetamina (90 mg/kg) via intraperitoneal. Foi realizado hemograma completo e dosagens séricas de colesterol, triglicérides, AST, ALT, ureia, creatinina e glicose das ratas prenhes. Após laparotomia foram removidos e pesados fígado, rim, suprarrenais, baço e ovários; os fetos e placentas foram pesados obtendo-se o peso médio das ninhadas. Quatro fetos (dois machos e duas fêmeas) por mãe foram aleatoriamente designados para obter-se o comprimento e peso de cérebro, fígado, rins e pulmões. Para a análise estatística utilizou-se o teste ANOVA seguido do teste de Dunnet; para dados não homocedásticos e sem distribuição normal, foi usado o teste de Kruskal-Wallis, seguido de Mann-Whitney; as proporções foram analisadas pelo teste do χ2 (p<0,05) RESULTADOS: Níveis de triglicérides (mg/dL): G-Controle (138,8±21,8); G-300 (211,2±63,9); G-1500 (251,5±65,2); G-3000 (217,7±49,6); p<0.05. Peso corporal dos fetos (g): G-Controle (machos 3,3±0,3; fêmeas 3,1±0,3); G-300 (machos 3,4±0,2; fêmeas 3,1±0,4); G-1500 (machos 3,5±0,3; fêmeas 3,2±0,3); G-3000 (machos 3,4±0,5; fêmeas 3,1±0,4). CONCLUSÃO: A ipriflavona não causou toxicidade materna, mas elevou níveis de triglicérides e reduziu o hematócrito em doses elevadas, o tamanho, peso corporal e de órgãos fetais não foram alterados. Não foram observadas malformações externas nem mortes fetais

Dissociation of antihypertensive and metabolic response to losartan and spironolactone in experimental rats with metabolic sindrome

INTRODUCTION: The treatment of arterial hypertension (AH) in patients with metabolic syndrome (MS) is a challenge, since non drug therapies are difficult to implement and optimal pharmacological treatment is not fully established. OBJECTIVE: To assess the blockade of the rennin angiotensin aldosterone system (RAAS) in blood pressure (BP) in renal function and morphology in an experimental model of MS induced by high fat diet. METHODS: Wistar rats were fed on high fat diet from the fourth week of life, for 20 weeks. The groups received Losartan or Spironolactone from the eighth week of life. We weekly evaluated the body weight and BP by tail plethysmography. At the end of the experiment oral glucose tolerance, lipid profile, creatinine clearance tests, and the direct measurement of BP were performed. A morphometric kidney analysis was performed. RESULTS: The administration of high-fat diet was associated with the development of MS, characterized by central fat accumulation, hypertension, hyperglycemia and hypertriglyceridemia. In this model there were no changes in renal histomorphometry. The blockade of angiotensin II (Ang II) receptor AT1 prevented the development of hypertension. The mineralocorticoid blockage did not have antihypertensive efficacy but was associated with reduction of abdominal fat. CONCLUSION: The dissociation of the antihypertensive response to the blockades of Ang II receptors and mineralocorticoid indicates the involvement of Ang II in the pathogenesis of hypertension associated with obesity. Reduction of central obesity with Spironolactone suggests the presence of mineralocorticoid adipogenic effect.INTRODUÇÃO: O tratamento da hipertensão arterial (HA) em indivíduos com síndrome metabólica (SM) é um desafio, uma vez que terapias não medicamentosas são de difícil implementação e o tratamento farmacológico ideal não está totalmente estabelecido. OBJETIVO: Avaliar o bloqueio do sistema renina angiotensina aldosterona (SRAA) na pressão arterial (PA), na função e na morfologia renais em modelo experimental de SM induzida por dieta hiperlipídica. MÉTODOS: Ratos Wistar receberam ração hiperlipídica a partir da quarta semana de vida, por 20 semanas. Os grupos tratados receberam Losartana ou Espironolactona a partir da oitava semana de vida. Avaliou-se semanalmente o peso corporal e a PA de cauda por pletismografia. Ao final do experimento, foram realizados testes de tolerância oral à glicose, perfil lipídico, clearance de creatinina, medida direta da PA, análise morfométrica renal. RESULTADOS: A administração de dieta hiperlipídica se associou ao desenvolvimento de SM, caracterizada por acúmulo central de gordura, hipertensão arterial, hiperglicemia e hipertrigliceridemia. Nesse modelo não foram observadas alterações da histomorfometria renal. O bloqueio do receptor AT1 da angiotensina II (Ang II) preveniu o desenvolvimento da HA. O bloqueio mineralocorticoide não apresentou eficácia anti-hipertensiva, porém, associou-se à redução da gordura abdominal. CONCLUSÃO: A dissociação da resposta anti-hipertensiva aos bloqueios dos receptores da Ang II e mineralocorticoide indica a participação da Ang II na gênese da HA associada à obesidade. A redução da obesidade central com a Espironolactona sugere a presença de efeito adipogênico mineralocorticoide

Avaliação do efeito da quercetina sobre o fígado e rim de ratos Wistar com síndrome metabólica induzida

Metabolic syndrome (MS) is characterized by increased visceral fat, hypertriglyceridemia and hypertension. Epidemiological and clinical studies have confirmed that MS is associated with increased morbidity and mortality due to its association with inflammation and diseases such as cardiovascular disease , diabetes mellitus, dyslipidemia, chronic kidney disease and hepatic steatosis. Based on the diversity of factors causing or contributing to MS the ideal pharmacological treatment is not well defined. Due to quercetin antioxidant, anti-inflammatory and vasodilatory properties, it could be an alternative for treatment of MS comorbidities. This study aimed to evaluate the effect of quercetin in the liver and kidney of rats with MS dietinduced. Male Wistar rats were divided into three groups (n = 10): C-standard diet; MShigh-fat diet and MSQ-high-fat diet + 10mg/kg / day of quercetin solution orally administered in two months old rats. Water and food was received ad libitum. Body weight and tail blood pressure was assessed weekly. At the end of the experiment, at six months, tests were performed to evaluate oral glucose tolerance. The animals were anesthetized (xylazine: ketamine and 10mg/kg: 90mg/kg, ip) for direct measurement of blood pressure. Then, they were exsanguinated and euthanized by cervical dislocation, kidney, liver, epididymal and retroperitoneal fat left were removed and weighed. Serum glucose, triglycerides, cholesterol , AST, ALT and γ-GT; urinary creatinine was measured; Clearance and morphometry of the area and volume glomerular hematoxylin- Cromotrope stain. The presence of renal fibrosis was evaluated by picrosirius stain under polarized light. For immunohistochemical analyzes were quantified the expression of pro-fibrotic factor (TGF-β1) and myofibroblasts (α-SMA) makers in kidney tissue cells. The procedures were approved by CEUA-UFJF (Protocol No.010/2011). We observed that high fat diet promoted MS, characterized by central fat accumulation, hypertension, hyperglycemia and hypertriglyceridemia. In addition an increase in the levels of AST as well as the expression of TGF-β1 and percentage of fibrosis by picrosirius was observed. Chronic daily administration of quercetin in an experimental model of SM induced by high fat diet did not reduce blood pressure, did not affect the nutritional and metabolic and histomorphological profile of the animals, despite of attenuate the expression of markers of fibrosis.A Síndrome Metabólica (SM) caracteriza-se por acúmulo central de gordura, hipertensão arterial e hipertrigliceridemia. Estudos epidemiológicos e clínicos têm confirmado que a SM está relacionada ao aumento da morbidade e mortalidade em virtude de sua associação ao processo inflamatório e a patologias como a doença cardiovascular, diabete mellitus, dislipidemias, doença renal crônica e esteatose hepática. Pela diversidade de fatores causadores ou contribuintes da SM o tratamento farmacológico ideal não está bem definido. A quercetina por apresentar ação antioxidante, antiinflamatória e vasodilatadora, poderia ser uma alternativa no tratamento das comorbidades que compõem a SM. O presente trabalho objetivou avaliar o efeito da quercetina no fígado e rim de ratos Wistar com SM induzida por dieta hiperlipídica. Ratos Wistar machos foram distribuídos, em três grupos (n=10) que receberam respectivamente: C-dieta padrão; SM-ração hiperlipídica e SMQ-ração hiperlipídica + 10mg/kg/ dia de solução de quercetina, via oral, a partir dos dois meses de idade. Receberam água e ração ad libitum. Avaliaram-se, semanalmente, peso corporal e pressão arterial da cauda. Ao final do experimento, aos seis meses, foram realizados teste oral de tolerância a glicose. Os animais foram anestesiados (xilazina: 10mg/kg e quetamina: 90mg/kg, i.p.) para medida direta da PA. Em seguida, foram exsanguinados e eutanasiados por deslocamento cervical, removeram-se e pesaram-se os rins, fígado, gordura retroperitoneal e epididimária esquerda. Foi feita dosagem sérica de Glicose, Triglicérides, Colesterol, AST, ALT e γ-GT ; Creatinina urinaria, Clearence e morfometria da área e volume glomerular por Hematoxilina-Cromotrope. A presença de fibrose renal foi avaliada pela coloração picrosirius sob luz polarizada. Por análises imuno-histoquímica quantificaram-se as células dos tecidos renais que expressavam marcadores de fator pró-fibrótico (TGF-β1) e miofibroblastos (α-SMA). Os procedimentos foram aprovados pelo CEUA-UFJF (Protocolo nº010/2011). A dieta hiperlipídica promoveu a SM, caracterizada por acúmulo central de gordura, hipertensão arterial, hiperglicemia e hipertrigliceridemia. Houve aumento nos níveis de AST, bem como na expressão de TGF-β1 e porcentagem de fibrose por picrosirius. A administração crônica diária da quercetina em modelo experimental de SM induzida por dieta hiperlipídica não reduziu a pressão arterial, não alterou o perfil nutricional, metabólico e histomorfológico renal dos animais, apesar de atenuar a expressão dos marcadores de fibrose.FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerai

Treinamento físico em fêmeas alimentadas com dieta hipercalórica reverte à adiposidade e alterações metabólicas na prole?

Pregnant individuals who overfeed are more likely to expose the fetus to the development of metabolic disorders in their adulthood. Physical training is a mechanism for the prevention and treatment of these disorders, since it improves metabolism and body composition. This study evaluated the protective effect of physical exercise against possible metabolic changes in generations F1 and F2, whose mothers were submitted to a high sugar/high fat (HS/HF) diet. Wistar rats from generation F0 were distributed in four groups (n=10): CSed and CExe; DHSed and DHExe. From 21 days of age until the end of the lactation period, CSed/CExe animals received standard feed, and DHSed/DHExe animals received HS/HF diet. Animals from groups CExe/DExe underwent physical training from 21 to 120 days of age. Males and females in generations F1 and F2 received normocaloric feed and did not perform physical training, being distributed into four groups (n=10) according to the maternal generation to which they belonged. In generation F0, there was an increase in body weight, adiposity, glucose and lipidic profile; the exercise reduced the biochemical parameters between groups DHSed/DHExe. Maternal exercise had an effect on future generations, being more evident in males, reducing adiposity as well as plasma glucose and triglyceride concentrations, and prevented prejudicial effects of glucose intolerance. Maternal overfeeding with Hypercaloric diet increased health risks both for mother and offspring, showing that HS/HF diet consumption promotes metabolic alterations in offspring, likely via epigenetic mechanisms. However, physical training performed by generation F0 proved to be protective against such effects.Gestantes com acesso à superalimentação estão mais propensas a expor o feto ao desenvolvimento de distúrbios metabólicos quando adultos. O treinamento físico é um mecanismo de prevenção e tratamento desses distúrbios, pois promove melhoria no metabolismo e composição corporal. Este estudo avaliou o efeito protetor do exercício físico contra possíveis alterações metabólicas na geração F1 e F2, cujas mães foram submetidas à dieta high sugar/high fat (HS/HF). Ratas Wistar da geração F0 foram distribuídas em quatro grupos (n=10): CSed e CExe; DHSed e DHExe. Dos 21 dias de vida até o fim da lactação, os animais CSed/CExe receberam dieta padrão e animais DHSed/DHExe receberam dieta HS/HF. Animais dos grupos CExe/DExe realizaram treinamento físico, dos 21 aos 120 dias. Machos e fêmeas da geração F1 e F2 consumiram ração normocalórica e não realizaram treinamento físico sendo distribuídos em grupos (n=10) de acordo com a geração materna ao qual pertenciam. Na geração F0 houve aumento do peso corporal, adiposidade, glicose e perfil lipídico; o exercício reduziu os parâmetros bioquímicos entre os grupos DHSed/DHExe. O exercício materno teve efeito nas gerações futuras, sendo mais evidente em machos, reduzindo a adiposidade bem como as concentrações plasmáticas de glicose, triglicérides e preveniu efeitos prejudiciais da intolerância à glicose. O consumo materno de dieta rica em carboidratos simples e lipideos, aumentou os riscos para a saúde tanto na mãe quanto na prole, mostrando que o consumo de dieta HS/HF promove alterações metabólicas na prole, provavelmente por mecanismos epigenéticos. Porém o treinamento físico realizado pela geração F0 apresentou efeito protetor quanto a tais efeitos.FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerai

Avaliação do efeito da quercetina em ratos Wistar com Síndrome Metabólica

Introdução: O tratamento da síndrome metabólica (SM) é um desafio, uma vez que terapias não medicamentosas são de difícil implementação e o tratamento farmacológico ideal não está totalmente estabelecido. Objetivo: Avaliar o efeito da quercetina na pressão arterial (PA), dislipidemia e acúmulo de gordura visceral em modelo experimental de SM induzida por dieta hiperlipídica. Métodos: Ratos Wistar receberam ração hiperlipídica a partir da quarta semana de vida, por 20 semanas. O grupo tratado recebeu quercetina a partir da oitava semana de vida. Avaliou-se semanalmente o peso corporal e a PA de cauda por pletismografia. Ao final do experimento foram realizados testes de perfil glicêmico e lipídico. Resultados: A administração de dieta hiperlipídica se associou ao desenvolvimento de SM, caracterizada por acúmulo central de gordura, hipertensão arterial, hiperglicemia e hipertrigliceridemia. A quercetina não apresentou eficácia no tratamento das comorbidades que compõem a SM. Conclusão: A administração crônica diária da quercetina em modelo experimental de SM induzida por dieta hiperlipídica não alterou de forma significante o perfil nutricional, metabólico e pressórico dos animais

Dissociação da resposta anti-hipertensiva e metabólica à losartana e espironolactona em ratos com síndrome metabólica experimental

INTRODUÇÃO: O tratamento da hipertensão arterial (HA) em indivíduos com síndrome metabólica (SM) é um desafio, uma vez que terapias não medicamentosas são de difícil implementação e o tratamento farmacológico ideal não está totalmente estabelecido. OBJETIVO: Avaliar o bloqueio do sistema renina angiotensina aldosterona (SRAA) na pressão arterial (PA), na função e na morfologia renais em modelo experimental de SM induzida por dieta hiperlipídica. MÉTODOS: Ratos Wistar receberam ração hiperlipídica a partir da quarta semana de vida, por 20 semanas. Os grupos tratados receberam Losartana ou Espironolactona a partir da oitava semana de vida. Avaliou-se semanalmente o peso corporal e a PA de cauda por pletismografia. Ao final do experimento, foram realizados testes de tolerância oral à glicose, perfil lipídico, clearance de creatinina, medida direta da PA, análise morfométrica renal. RESULTADOS: A administração de dieta hiperlipídica se associou ao desenvolvimento de SM, caracterizada por acúmulo central de gordura, hipertensão arterial, hiperglicemia e hipertrigliceridemia. Nesse modelo não foram observadas alterações da histomorfometria renal. O bloqueio do receptor AT1 da angiotensina II (Ang II) preveniu o desenvolvimento da HA. O bloqueio mineralocorticoide não apresentou eficácia anti-hipertensiva, porém, associou-se à redução da gordura abdominal. CONCLUSÃO: A dissociação da resposta anti-hipertensiva aos bloqueios dos receptores da Ang II e mineralocorticoide indica a participação da Ang II na gênese da HA associada à obesidade. A redução da obesidade central com a Espironolactona sugere a presença de efeito adipogênico mineralocorticoide

Selection strategy of phage-displayed immunogens based on an in vitro evaluation of the Th1 response of PBMCs and their potential use as a vaccine against Leishmania infantum infection

Abstract Background The development of a vaccine for the prevention of visceral leishmaniasis (VL) still represents a significant unmet medical need. A human vaccine can be found if one takes into consideration that many people living in endemic areas of disease are infected but do not develop active VL, including those subjects with subclinical or asymptomatic infection. Methods In this study, a phage display was used to select phage-exposed peptides that were specific to immunoglobulin G (IgG) antibodies from asymptomatic and symptomatic VL patients, separating them from non-infected subjects. Phage clones presenting valid peptide sequences were selected and used as stimuli of peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) obtained from both patients’ groups and controls. Those with higher interferon-gamma (IFN-γ)/interleukin (IL)-10 ratios were further selected for vaccination tests. Results Among 17 evaluated clones, two were selected, B1 and D11, and used to immunize BALB/c mice in an attempt to further validate their in vivo protective efficacy against Leishmania infantum infection. Both clones induced partial protection against the parasite challenge, which was evidenced by the reduction of parasitism in the evaluated organs, a process mediated by a specific T helper (Th)1 immune response. Conclusions To the best of our knowledge, this study is the first to use a rational strategy based on in vitro stimulation of human PBMCs with selected phage-displayed clones to obtain new immunogens against VL