Estudio de tolerancia local de un candidato vacunal proteoliposómico contra Leptospira SPP en el biomodelo Mesocricetus Auratus (Study of local tolerance of a proteoliposome vaccine candidate against Leptospira SPP in Mesocricetus Auratus as biomodel)

La leptospirosis es una de las zoonosis bacterianas más difundidas en el mundo. En la actualidad existen registradas varias vacunas de células enteras contra Leptospira. Estos productos biofarmacéuticos cuentan entre sus desventajas las reacciones de hipersensibilidad a los componentes de las formulaciones y la alta frecuencia de toxicidad en el sitio de inoculación. En el presente trabajo fue evaluada la tolerancia local en el punto de inoculación generada por una nueva formulación vacunal proteoliposómica contra Leptospira spp. en el biomodelo el Mesocricetus auratus. Para ello los animales (ambos sexos) fueron inoculados dos veces por vía intramuscular, con 21 días entre la primera y la segunda inoculación. Seguidamente se realizaron eutanasias seriadas a los 3 días y luego semanalmente hasta 49 días de la primera inoculación. Los resultados demostraron la ausencia de muertes y de diferencias estadísticas en las variables: peso corporal, consumo de agua y alimentos entre animales inmunizados y controles negativos. Tampoco se detectaron lesiones macroscópicas en órganos y tejidos de importancia toxicológica en los animales inmunizados con el candidato vacunal. Las lesiones locales encontradas obedecen a la respuesta inmunológica generada por esta nueva formulación vacunal. La relevancia inmunológica del biomodelo se comprobó mediante la determinación de anticuerpos IgG en el grupo de animales vacunados. En función de los resultados obtenidos se concluye que el candidato vacunal evaluado no fue potencialmente tóxico al sitio de inoculación al ser administrado por vía intramuscular en el biomodelo Mesocricetus auratus. AbstractLeptospirosis is the bacterial zoonosis more overspread in the world. As a control measure some whole cell vaccines has been developed and registered. These biopharmaceutical products have as principal disadvantages the absence of cross-protection against serovars not included on formulations and reactogenicity at inoculation site. In this paper it is discussed the local toxicity at inoculation site elicited by a proteoliposome vaccine candidate obtained form outer membrane cell wall of Leptospira spp using the Mesocricetus auratus as biomodel. The experimental animals (both sexes) were inoculated with two doses of vaccine candidate (21 days between them) via intramuscular. The results obtained did not show statistical differences among immunized and animal controls for the variables: corporal weight, water and food intake. Neither macroscopic lesions of toxicological importance were observed. The histopathological findings describes are part of immunological response consequence against vaccine candidate. Besides the immunological relevance of the biomodel was check by means of IgG quantification. Agreement with these results, it can conclude that a single dose of the vaccine candidate immunized via intramuscular in Mesocricetus auratus did not show toxic potential at inoculation site

Instrumento de evaluación del trabajo de curso en la asignatura Sangre y Sistema Inmune

Objetivo: describir el instrumento utilizado para evaluar el trabajo de curso, en la Escuela Latinoamericana de Medicina durante el período correspondiente al curso académico 2017-2018 y valorar los resultados de la aplicación del mismo. Materiales y métodos: el instrumento se confeccionó considerando las características de la asignatura y el contexto de la Escuela Latinoamericana de Medicina, a partir de la modificación de otros instrumentos utilizados para igual fin. Los resultados se analizaron teniendo en cuenta las calificaciones de obtenidas por los estudiantes. Resultados: debido al elevado número de profesores que participó en el proceso de evaluación del trabajo de curso, fue indispensable establecer un criterio que garantizó la homogeneidad y justeza del mismo. Por ello, se diseñó y aplicó el instrumento con los indicadores a evaluar en el informe escrito, la exposición oral por equipo y la defensa individual del trabajo. Conclusiones: se logra diseñar un instrumento, que incluye criterios de evaluación a nivel grupal e individual. El mismo permite unificar dichos criterios para ser aplicados por todos los profesores y tribunales participantes en el proceso. Los resultados docentes logrados en la evaluación final son satisfactorios, tanto en promoción como en calida

Estabilidad de las tabletas de clorodiazepóxido 10 mg

Se estudió la estabilidad de las tabletas de clorodiazepóxido 10 mg que fueron elaboradas con un almidón modificado (GECLYN-ER2) de bajo costo en sustitución de la gelatina, aglutinante tradicional. Se emplearon como métodos analíticos para la cuantificación e identificación de clorodiazepóxido: cromatografía líquida de alta resolución, cromatografía en capa delgada y espectrofotometría. Los resultados obtenidos para las tabletas expuestas en condiciones variables de temperatura, humedad y de vida en estante confirman la factibilidad del empleo de este almidón, modificado para la fabricación de las tabletas de clorodiazepóxido 10 mg.<br>The stability of chlordiazepoxide 10 mg tablets, which were made with low cost modified starch (GECLYN-ER2) to substitute gelatine, the traditional agglutinant, was studied. The following analytical methods were used for the quantification and identification of chlordiazipoxide: high pressure liquid chromatography thin layer chromatography, and spectrophotometry. The results attained for the tablets exposed to different conditions of temperature, humidity and shelf life confirmed the feasibility of this starch that was modified to make chlordiazepoxide 10 mg tablets

Evaluación de formulaciones inmunoterapéuticas experimentales en el modelo hibrido murino de Reaccion del Injerto contra el Hospedador

Introduction: Graft-versus-host disease is the most frequent complication of Hematopoietic Stem Cell Transplants and all transplants containing allogeneic immunocompetent cells; 100% of patients suffer from this complication and about 30% die for this particular cause. A high proportion of cases are steroid-refractory; likewise, other modern immunosuppressive measures fail. In the fields of Immunotherapy and Vaccinology, there is also a worrying shortage of powerful, effective, safe and broad spectrum immunomodulators of biological origin. There is a hybrid murine model of great methodological utility for experimental studies.Objective: To evaluate two novel formulations of biotechnological origin: an immunopotentiator formulation and an immunosuppressive one, which were developed as cochleates.Material and Methods: The formulations assayed by Electron Microscopy and RT-PCR were characterized as nanoparticles and for their capacity to regulate lymphokine mRNA expression profile, respectively.  The immunomodulatory character was evaluated in vivo using Graft-versus-host disease in (CBAxC57BL) F1 hybrid mice.Results: Starting from the proteoliposomes derived from Neisseria meningitides, two cochleate formulations were obtained, both with particle diameters below 100 nm. Formulation 1 showed a proinflammatory profile with potent capacity to increase IFNγ and TNFα, and potentiated the Spleen Index up to 2.05 in the GVDH model with p = 0.0002. Formulation 2 showed a suppressor/regulatory profile with potent capacity to increase IL-10 and TGFβ and suppress the production of TNFα. In the model used, this formulation suppressed the Spleen Index in a dose-dependent manner with high statistical significance. The known safety profile and absence of reactogenicity of both formulations was corroborated.Conclusions: Both formulations have potential application in the fields of GVHD therapy and other pathologies as well as in Vaccinology.  The results obtained in the present work suggest the usefulness to continue with the pharmaceutical development and complete the preclinical studies of both formulations.Introducción: La Enfermedad del Injerto Contra el Hospedador es la complicación más frecuente de los Trasplantes de Células Madre Hematopoyéticas y de todos los trasplantes que contengan células inmunocompetentes alogénicas, el 100 % la padecen y cerca del 30 % mueren por su causa; una proporción alta de casos son esteroide-refractarios, asimismo otras medidas inmunosupresoras modernas fracasan. En los campos de la Inmunoterapia y la Vaccinología también existe una escasez preocupante de inmunomoduladores de origen biológico potentes, efectivos, seguros y de amplio espectro. Existe un modelo híbrido murino de gran utilidad metodológica para estudios experimentales.Objetivo: Evaluar dos formulaciones novedosas de origen biotecnológico, una de ellas inmunopotenciadora y otra inmunosupresora, desarrolladas como cocleatos.Material y Métodos: Mediante Microscopia Electrónica y RT-PCR se caracterizaron las formulaciones como nanopartículas y su capacidad de regular la expresión del ARNm de linfoquinas definitorias de sus perfiles, respectivamente. Empleando el modelo de Enfermedad del Injerto Contra el Hospedador en ratón híbrido F1 (CBAxC57BL), se evaluó su carácter inmunomodulador in vivo.Resultados: Partiendo de los proteoliposomas de Neisseria meningitidis, se obtuvieron dos formulaciones en forma de cocleatos, ambas con diámetros de partícula inferior a 100nm. La Formulación 1mostró un perfil proinflamatorio con potente capacidad de aumentar el IFNγ y el TNFα y potenció el Índice de Bazo hasta 2,05 en el modelo EICH con p=0,0002. La Formulación 2 mostró un perfil supresor-regulatorio con potente capacidad de aumentar la IL-10 y el TGFβ y además de suprimir la producción de TNFα. En el modelo usado, esta formulación, suprimió el Índice de Bazo de manera dosis dependiente y con alta significación estadística. Se corroboró el conocido perfil de seguridad y ausencia de reactogenicidad de ambas formulaciones.Conclusiones: Ambas formulaciones tienen potencial aplicación en los campos de la terapia de Enfermedad del Injerto Contra el Hospedador en otras patologías y en Vaccinología. Los resultados obtenidos en el presente trabajo fundamentan la conveniencia de continuar el desarrollo farmacéutico y completar la preclínica de ambas formulaciones

Safety assessment of a traditionally used extract from leaves of Boldoa purpurascens.

ETHNOPHARMACOLOGICAL RELEVANCE: Boldoa purpurascens Cav. (Nyctaginaceae) is a plant species used in traditional medicine in Cuba as a diuretic. AIM OF THE STUDY: The aim of the present investigation was to evaluate the safety profile of a hydroalcoholic extract from leaves of Boldoa purpurascens. MATERIALS AND METHODS: First, an experimental study to assess the oral acute toxicity at a dose of 2000mg/kg body weight of the extract was carried out. Potential genotoxicity of the extract was evaluated using the Ames test and the micronucleus induction assay in mouse bone marrow. In the Ames test a concentration range of 50, 100, 150, 300 and 500µg/plate was tested. In the micronucleus induction assay, doses of 500, 1000 and 2000mg/kg of body weight were tested. For completeness, since the extract contains saponins, the evaluation of the hemolytic activity, ocular and skin irritation were included. RESULTS: No signs or symptoms of toxicity were observed in the oral acute toxicity test (body weight at baseline, seven days and end of the experiment of 236.41±20.07, 256.81±30.44 and 240.02±26.16 respectively for the treated group). The hydroalcoholic extract from the leaves was not mutagenic in the Ames test, and no genotoxicity was observed in the micronucleus assay. A hemolysis test at concentration of 1mg/mL confirmed hemolytic activity, which is not a safety concern since saponins are not absorbed after oral administration. In order to evaluate the percentage of protein denaturation, the ocular irritability index was calculated. The extract was found to be irritating. Finally, skin irritability was evaluated and the irritation index was equal to zero. CONCLUSIONS: Based on the toxicological evaluation of a traditionally used hydroalcoholic extract from the leaves of Boldoa purpurascens we can confirm the safety of its oral use

Immuno-toxicological Evaluation of the Adjuvant Formulations for Experimental Anti-meningococcal Vaccines without Aluminium Hydroxide

International audienceThe proteoliposomes and cochleates are used as adjuvants for vaccines since they are potent immune stimulators. However, the hyper stimulation of the immune system provoked by adjuvants can cause immunetoxicological side effects. The present study was carried out to evaluate the toxic and immuno-toxicological effects of new adjuvants for anti-meningococci vaccines based on neo-proteoliposomes (nPL) and neocochleates (nCh), in Balb/c mice that were administered doses of 15 µg each, over periods of 14 days through intramuscular route and three inoculations with the same doses through intranasal route, every 7 days. The Scanning and Transmission Electron Microscopy showed that the nPL and nCh had nanometric dimensions and their normal peculiar forms. The experimental formulations did not provoke general toxiceffects in the tested animals, which tended to the progressive normal growing of this species, that did not statistically differ from the control ones. The studies of pathologic anatomy in inoculation organs and sites did not reveal modifications that can indicate toxicity and there was no sign of hepatic damage. The structural observations found in the spleen and lymphatic nodes showed the physiological development ofthe immune response, which was normal in all cases showing the restitution of the stimulation signs. The relative weight values of the spleen were within the standard range. These results showed that the nPL and nCh elaborated as adjuvants for vaccines did not show any evident induction of general toxic or particular immune-toxicologicl effects

Remote induction of cellular immune response in mice by anti-meningococcal nanocochleates - nanoproteoliposomes

International audienceNew adjuvant formulations, based on proteoliposomes b40 nm and cochleates b100 nm, without Al(OH)3 adjuvant, were evaluated regarding their ability to generate Th1 immune response through a Delayed -Type Hypersensitivity Test, at the mouse model, by using a Neisseria meningitidis B protein complex as antigen. The formulations were administered by intramuscular (IM) (2 inoculations - at baseline and after 14 days) and intranasal (IN) (3 inoculations at 7 days) immunization pathways. All IM immunized groups were able to induce similar response to these formulations as well as to VA-MENGOC-BC® vaccine - containing Al(OH)3 adjuvant (used as positive control of the trial). In all groups, the induced inflammation (IP) rate was statistically higher than in the negative control group (CN) (p b 0.05). Immunogenicity, measured by HSR and CD4+ lymphocyte increase was equivalent to the control vaccine and most important, granuloma reactogenicity at the site of injection was eliminated, fact demonstrated by histological study. All groups of animals immunized by IN route showed HSR reactions and statistically significant differences with respect to the CN group. However, IP values were lower, with statistical differences (p b 0.05) for the same adjuvant formulation IM administered, except the AIF2-nCh formulation that generated statistically similar induction (p N 0.05) by both immunization pathways, suggesting it to be the best candidate for the next IN trial. Proteoliposome and cochleate formulations tested were able to mount potent Th-1 immune response, equivalent to the original vaccine formulation, with the advantage of less reactogenicity in the site of the injection, caused by the toxicity of Al(OH)3 adjuvant gel

Influencia del medio de cultivo sobre la cinética de crecimiento y expresión de la proteína recombinante Rv2626c de Mycobacterium tuberculosis H37Rv expresada en Streptomyces lividans TK24

Streptomyces lividans, ha ganado gran atención en los últimos tiempos, como vector de expresión y producción de proteínas de Mycobacterium tuberculosis de interés biomédico, como alternativa a su obtención tradicional en E. coli. La proteína Rv2626c, Proteína de Respuesta Hipóxica 1, es codificada por el gen Rv2626c (hrp1) de M. tuberculosis, perteneciente al regulón de la fase de latencia DosR. Esta proteína se sobre-expresa en la fase de latencia de la tuberculosis bajo condiciones de estrés como hipoxia y bajos niveles, de óxido nítrico. Se ha demostrado la inmunogenicidad y capacidad de esta proteína, de inducir citocinas características del patrón Th-1, tales como el interferón gamma. Por ello, nuestro grupo logró la obtención de Rv2626c por la tecnología del ADN recombinante usando como cepa hospedera Streptomyces lividans TK24. Con el objetivo de aumentar el nivel de expresión de la proteína recombinante, rRv2626c en este trabajo se ensayaron diferentes medios de cultivo, evaluando el crecimiento de la cepa transformada en condiciones de zaranda. Se determinó la cinética de crecimiento en el medio definido, formulado industrialmente en el Centro Nacional de Biopreparados: caldo Triptona Soya (TSB-BioCen) y en medio de cultivo equivalente preparado en el laboratorio. Para establecer la cinética de crecimiento, se utilizó el cálculo del peso seco y la determinación de la concentración de proteínas totales por la técnica de ácido bicinconinico (BCA) a diferentes tiempos del cultivo. Posteriormente, se identificó la proteína clonada mediante SDS-PAGE y Western Blotting, así como los niveles de expresión mediante análisis densitométrico. Los resultados indican que se alcanzaron los máximos niveles de densidad celular a las 36 h de cultivo y los más altos niveles de expresión proteica total y específica entre las 42 y 54 h. Con el medio químicamente definido TSB-Biocen preformulado en lugar del preparado en el laboratorio partiendo de los componentes, se logró reducir el tiempo óptimo para la expresión-secreción de la proteína rv2626c de 96 a 54 h. Los mejores resultados en la promoción de la expresión de la proteína recombinante se lograron con el medio definido TSB-BioCen, a las 48 h con 8,5% de rendimiento específico, superando en más de 10 veces los niveles de crecimiento celular obtenidos con el medio elaborado en el laboratorio y más de dos veces los niveles de secreción de la proteína recombinante