ACTIVATED CHARCOAL APPLICATION FOR THE MICROPROPAGATION OF Cattleya crispata (Thunb.) Van den Berg

 Micropropagation is an alternative for the genetic conservation and propagation of endemic species from “Campo Rupestre Ferruginoso”, such as the orchid Cattleya crispata. The aim of the present study is to assess the influence of activated charcoal on the in vitro germination, multiplication and elongation phases of C. crispata. Seeds extracted from mature capsules were used for inoculation in the culture medium that was adopted to assess the effect of supplementation, or not, with activated charcoal. Data about germination speed, seedling number, length, vigor, oxidation and contamination (bacterial and/or fungal) were assessed through these phases. Based on the results obtained, the use of activated charcoal was efficient in the in vitro germination and multiplication phases of C. crispata, providing greater speed and percentage of germination, less contamination and oxidation of the tissues, greater number, length and vigor of shoots, being effective for the genetic conservation and production of seedlings of the species. Culture medium without the supplementation of activated charcoal provided the best results for the in vitro elongation, with greater length, vigor and less oxidation of shoots.Aplicação de carvão ativado para micropropagação de Cattleya crispata (Thunb.) Van den Berg  RESUMO: A micropropagação é uma alternativa para a conservação genética e propagação de espécies endêmicas do “Campo Rupestre Ferruginoso”, como a orquídea Cattleya crispata. O objetivo do presente estudo é avaliar a influência do carvão ativado nas fases de germinação, multiplicação e alongamento in vitro de C. crispata. Sementes extraídas de cápsulas maduras foram utilizadas para inoculação no meio de cultura adotado para avaliar o efeito da suplementação, ou não, com carvão ativado. Dados sobre velocidade de germinação, número de brotos por explante, comprimento, vigor, oxidação e contaminação (bacteriana e / ou fúngica) foram avaliados por meio dessas fases. Com base nos resultados obtidos, o uso do carvão ativado foi eficiente nas fases de germinação e multiplicação in vitro de C. crispata, proporcionando maior velocidade e porcentagem de germinação, menor contaminação e oxidação dos tecidos, maior número, comprimento e vigor dos brotos, sendo eficaz para a conservação genética e produção de mudas da espécie. O meio de cultura sem a suplementação de carvão ativado proporcionou os melhores resultados para o alongamento in vitro, com maior comprimento, vigor e menor oxidação dos brotos. Palavras-chave: antioxidante; campos rupestres; orquídea; propagação in vitro.   ABSTRACT: Micropropagation is an alternative for the genetic conservation and propagation of endemic species from rupestrian grasslands, such as the orchid Cattleya crispata. The aim of the present study is to assess the influence of activated charcoal on the in vitro germination, multiplication and elongation phases of C. crispata. Seeds extracted from mature capsules were used for inoculation in the culture medium that was adopted to assess the effect of supplementation, or not, with activated charcoal. Data about germination speed, number of shoots per explant, length, vigor, oxidation and contamination (bacterial and/or fungal) were assessed through these phases. Based on the results obtained, the use of activated charcoal was efficient in the in vitro germination and multiplication phases of C. crispata, providing greater speed and percentage of germination, less contamination and oxidation of the tissues, greater number, length and vigor of shoots, being effective for the genetic conservation and production of plants of the species. Culture medium without the supplementation of activated charcoal provided the best results for the in vitro elongation, with greater length, vigor and less oxidation of shoots. Keywords: antioxidant; orchid; propagation in vitro; rupestrian grasslands

CLONAL MICROPLANT PRODUCTION, MORPHOLOGICAL EVALUATION AND GENETIC STABILITY OF Dendrocalamus asper (Schult. & Schult.) Backer ex. K. Heyneke

ABSTRACT: Bamboo species have many commercial applications, considering that homogeneous plantations (formed from clonal plants) are essential to high sustainable biomass production. The cloning of selected plants on an industrial scale through in vitro cultivation has many advantages, being important for the supply of plants in sufficient quantity and quality to meet commercial demand. The control of the cloning is the basis for an industrial scale, and its knowledge can optimize the process. This work aimed to evaluate the cloning of Dendrocalamus asper selected plant through micropropagation. Morphological features by scanning electron microscopy and genetic stability with ISSR molecular markers were evaluated. Four times of immersion in sodium hypochlorite (NaOCl) on in vitro establishment of nodal segments were evaluated. The established explants were transferred to a culture medium that was supplemented with three concentrations of 6-benzylaminopurine (BAP). Three concentrations of indole-3-butyric acid (IBA) to the in vitro adventitious rooting were evaluated. NaOCl application for 10 min resulted in 71.4 % of establishment in 30 d. Supplementation of the culture medium with 2.0 and 3.0 mg L-1 BAP de resulted in the highest averages for multiplication and elongation stages. The formation of adventitious roots occurred with 4.0 mg L-1 IBA of supplementation. Micropropagated plants showed normal morphological features and genetic stability, confirming the cloning of selected plant. Keywords: bamboo; micropropagation; vegetative propagation; In vitro culture; ISSR; plant growth regulator.   Produção de microplantas clonais, avaliação morfofisiológica e estabilidade genética de Dendrocalamus asper (Schult. & Schult.) Backer ex. K. Heyneke   RESUMO: Espécies de bambus apresentam diversas aplicações comerciais, visto que os plantios homogêneos (formados a partir de plantas clonais) são essenciais para a alta produção de biomassa sustentável. A clonagem de plantas selecionadas em escala industrial por meio do cultivo in vitro apresenta muitas vantagens, sendo uma importante ferramenta para o fornecimento de plantas em quantidade e qualidade suficientes para atender a demanda comercial. O controle da clonagem é a base para escala industrial, e seu conhecimento pode otimizar os processos. O trabalho teve como objetivo avaliar a clonagem de planta selecionada de Dendrocalamus asper por meio da técnica de micropropagação. Foram avaliadas as características morfológicas por microscopia eletrônica de varredura e estabilidade genética por meio de marcadores moleculares ISSR. Além disso, foram avaliados quatro tempos de imersão em hipoclorito de sódio (NaOCl) no estabelecimento in vitro de segmentos nodais. Os explantes estabelecidos foram transferidos para um meio de cultura que foi suplementado com três concentrações de benzilaminopurina (BAP). Por fim, foram avaliadas três concentrações de ácido indolbutírico (AIB) durante o enraizamento adventício in vitro. A adição de NaOCl por 10 min resultou em 71,4 % de estabelecimento em 30 d. A suplementação do meio de cultura com 2,0 e 3,0 mg L-1 BAP resultou nas maiores médias para as fases de multiplicação e alongamento. A formação de raízes adventícias ocorreu com a suplementação de 4,0 mg L-1 de AIB. Plantas micropropagadas apresentaram características morfológicas normais e estabilidade genética, confirmando a clonagem da planta selecionada. Palavras-chave: bambu; micropropagação; propagação vegetativa; cultivo in vitro; ISSR; regulador de crescimento vegetal.ABSTRACT: Bamboo species have many commercial applications, considering that homogeneous plantations (formed from clonal plants) are essential to high sustainable biomass production. The cloning of selected plants on an industrial scale through in vitro cultivation has many advantages, being important for the supply of plants in sufficient quantity and quality to meet commercial demand. The control of the cloning is the basis for an industrial scale, and its knowledge can optimize the process. This work aimed to evaluate the cloning of Dendrocalamus asper selected plant through micropropagation. Morphological features by scanning electron microscopy and genetic stability with ISSR molecular markers were evaluated. Four times of immersion in sodium hypochlorite (NaOCl) on in vitro establishment of nodal segments were evaluated. The established explants were transferred to a culture medium that was supplemented with three concentrations of 6-benzylaminopurine (BAP). Three concentrations of indole-3-butyric acid (IBA) to the in vitro adventitious rooting were evaluated. NaOCl application for 10 min resulted in 71.4 % of establishment in 30 d. Supplementation of the culture medium with 2.0 and 3.0 mg L-1 BAP de resulted in the highest averages for multiplication and elongation stages. The formation of adventitious roots occurred with 4.0 mg L-1 IBA of supplementation. Micropropagated plants showed normal morphological features and genetic stability, confirming the cloning of selected plant. Keywords: bamboo; micropropagation; vegetative propagation; In vitro culture; ISSR; plant growth regulator.   Produção de microplantas clonais, avaliação morfofisiológica e estabilidade genética de Dendrocalamus asper (Schult. & Schult.) Backer ex. K. Heyneke   RESUMO: Espécies de bambus apresentam diversas aplicações comerciais, visto que os plantios homogêneos (formados a partir de plantas clonais) são essenciais para a alta produção de biomassa sustentável. A clonagem de plantas selecionadas em escala industrial por meio do cultivo in vitro apresenta muitas vantagens, sendo uma importante ferramenta para o fornecimento de plantas em quantidade e qualidade suficientes para atender a demanda comercial. O controle da clonagem é a base para escala industrial, e seu conhecimento pode otimizar os processos. O trabalho teve como objetivo avaliar a clonagem de planta selecionada de Dendrocalamus asper por meio da técnica de micropropagação. Foram avaliadas as características morfológicas por microscopia eletrônica de varredura e estabilidade genética por meio de marcadores moleculares ISSR. Além disso, foram avaliados quatro tempos de imersão em hipoclorito de sódio (NaOCl) no estabelecimento in vitro de segmentos nodais. Os explantes estabelecidos foram transferidos para um meio de cultura que foi suplementado com três concentrações de benzilaminopurina (BAP). Por fim, foram avaliadas três concentrações de ácido indolbutírico (AIB) durante o enraizamento adventício in vitro. A adição de NaOCl por 10 min resultou em 71,4 % de estabelecimento em 30 d. A suplementação do meio de cultura com 2,0 e 3,0 mg L-1 BAP resultou nas maiores médias para as fases de multiplicação e alongamento. A formação de raízes adventícias ocorreu com a suplementação de 4,0 mg L-1 de AIB. Plantas micropropagadas apresentaram características morfológicas normais e estabilidade genética, confirmando a clonagem da planta selecionada. Palavras-chave: bambu; micropropagação; propagação vegetativa; cultivo in vitro; ISSR; regulador de crescimento vegetal

A COMPOSTAGEM DA CASCA DE CAFÉ CARBONIZADA FAVORECE A PRODUÇÃO DE MUDAS DE INGÁ

O presente estudo teve como objetivo avaliar a casca de café carbonizada e decomposta como componente do substrato para a produção de mudas de Inga vera Willd subsp. affinis (DC). T.D. Penn. por meio da avaliação da sobrevivência e das características morfológicas de crescimento. O experimento foi conduzido em tubetes de 110 cm³, sendo instalado em um delineamento inteiramente casualizado, constituindo sete tratamentos, com cinco repetições de oito mudas por parcela. Após 180 dias da semeadura, avaliaram-se a sobrevivência e a altura das mudas, diâmetro do coleto, relação altura/diâmetro do coleto, matéria seca da parte aérea, matéria seca do sistema radicular, matéria seca total, relação matéria seca da parte aérea/raiz, e o Índice de Qualidade de Dickson (IQD). Por meio dos resultados obtidos, constatou-se que a compostagem da casca de café carbonizada melhorou significativamente a qualidade das mudas de Inga vera subsp. affinis, sendo que o substrato contendo este componente resultou nas melhores respostas para a sobrevivência e para a maioria dos parâmetros de qualidade avaliados. Novos estudos são recomendados para se conhecer melhor os efeitos deste componente renovável para a produção de mudas.Palavras-chave: Inga vera subsp. affinis; substrato renovável; compostagem; qualidade de mudas; mudas florestais. CARBONIZED AND DECOMPOSED COFFEE HUSK AS SUBSTRATE COMPONENT FOR INGÁ SEEDLING PRODUCTION ABSTRACT: The aim of this study was to evaluate the carbonized and decomposed coffee husk in the seedling production of Inga vera Willd subsp. affinis (DC). T. D. Penn by assessing the survival and growth. The experiment was conducted in recipient of 110 cm³, being installed in a completely randomized design consisting of seven treatments with five replications of eight seedlings per plot. After 180 days, the survival rate, plant height, stem diameter, ratio between plant height and stem diameter, shoot dry mass, dry mass of root system, total dry mass, dry mass ratio of shoot/root dry mass and Dickson Quality Index (IQD) were evaluated. The composting of the carbonized coffee husk improved the quality of Inga vera subsp. affinis seedlings; and the substrate with proportions of this component resulted in the best responses for survival and most of the quality parameters evaluated. Further studies are recommended to better understand the effects of this component for the seedling production.Keywords: Inga vera subsp. affinis; renewable substrate; composting; seedling quality; forest seedlings

Sources of light in micropropagation of Corymbia hybrid clones

A importância das espécies do gênero Corymbia e de seus híbridos interespecíficos tem sido evidenciada nos programas de silvicultura, principalmente devido à sua qualidade da madeira e capacidade de adaptações as condições ambientais. Essas considerações têm estimulado o desenvolvimento de protocolos mais eficientes na propagação vegetativa necessária para a clonagem destas plantas. O presente estudo teve como objetivo geral a micropropagação de clones híbridos de Corymbia torelliana x C. citriodora e Corymbia citriodora x C. torelliana, e especificamente avaliar: i) o efeito da fonte de luz na introdução in vitro de clones híbridos de Corymbia torelliana x C. citriodora e Corymbia citriodora x C. torelliana; ii) o efeito da fonte de luz, regulador de crescimento BA e o número de subcultivos na fase de multiplicação in vitro de clones híbridos de Corymbia torelliana x C. citriodora e Corymbia citriodora x C. torelliana, e; iii) o efeito da fonte de luz, trocas gasosas e concentração de sacarose no alongamento in vitro e porcentagem de enraizamento e sobrevivência in vitro e ex vitro de microestacasde clones híbridos de Corymbia torelliana x C. citriodora e Corymbia citriodora x C. torelliana. O material experimental utilizado para obtenção dos explantes foi proveniente de minicepas de três clones híbridos de Corymbia torelliana x C. citriodora (TC01, TC02, TC03) e um de Corymbia citriodora x C. torelliana (CT01). Os experimentos in vitro foram conduzidos no Laboratório de Cultura de Tecidos II do Instituto de Biotecnologia Aplicada à Agropecuária (BIOAGRO), da Universidade Federal de Viçosa (UFV), localizado no município de Viçosa/MG, e o experimentos ex vitro foram conduzidos no Viveiro de Pesquisas do Departamento de Engenharia Florestal da UFV. Com base nos resultados obtidos, pode-se concluir que: i) o uso da fonte de luz LEDs correspondeu aos melhores resultados, para as características avaliadas na introdução in vitro; ii) o uso de LEDs vermelho azul obteve os melhores resultados, para os clones analisados na multiplicação in vitro; os explantes apresentaram resposta eficiente ao estimulo do regulador de crescimento BA, na concentração de 0,5 mg L- 1 para os clones Corymbia torelliana x C. Citriodora (TC01, TC02 e TC03) e 1,0 mg L- 1 para o clone Corymbia citriodora x C. torelliana (CT01), promovendo maior número de brotações; quanto ao número de subcultivos os melhores resultados foi diante do nono subcultivo, no qual conseguiu atingir maiores valores para o número de brotos por explante e vigor; iii) o uso de LEDs vermelho azul proporcionou a melhor resposta, para os clones analisados no alongamento e enraizamento in vitro; a concentração de 15g L -1 de sacarose apresentou os melhores resultados diante das variáveis analisadas, concentração essa que apresenta redução desse componente no meio nessas condições de cultivo; os explantes alongados (microestacas) apresentaram melhor resposta ao enraizamento e sobrevivência das plantas obtidas na condição in vitro.The importance of the species belonging to the genus Corymbia and its interspecific hybrids has been highlighted in the silviculture programs, mainly due to its wood quality and adaptability to the environmental conditions. These considerations have stimulated the development of an efficient protocol for the vegetative propagation necessary for the cloning of these plants. The present study had the general objective of micropropagating hybrid clones of Corymbia torelliana x C. citriodora and Corymbia citriodora x C. torelliana, and specifically to evaluate: i) the effect of the light source on the in vitro introduction of hybrid clones of Corymbia torelliana x C. citriodora and Corymbia citriodora x C. torelliana; ii) the effect of the light source, growth regulator BA and the number of subcultures on the in vitro multiplication phase of hybrid clones of Corymbia torelliana x C. citriodora and Corymbia citriodora x C. torelliana, and; iii) the effect of light source, gas exchange and sucrose concentration on in vitro elongation and percentage of rooting and in vitro and ex vitro survival of micro-cuttings of hybrid clones of Corymbia torelliana x C. citriodora and Corymbia citriodora x C. torelliana. The experimental material used to obtain the explants was from mini-stumps of three hybrid clones of Corymbia torelliana x C. citriodora (TC01, TC02, TC03) and one of Corymbia citriodora x C. torelliana (CT01). The in vitro experiments were conducted at the Tissue Culture Laboratory II of the Institute of Applied Biotechnology for Agriculture, Federal University of Viçosa (UFV), Viçosa/MG, and the ex vitro experiments were conducted at the Research Nursery of the Forest Engineering Department of UFV. Based on the results, it can be concluded that: i) the use of the LED light source corresponded to the best results, for the characteristics evaluated in the in vitro introduction; ii) the use of red blue LEDs generated the best results for the clones analyzed in the in vitro multiplication; the explants presented efficient response to BA growth regulator at 0.5 mg L-1 concentration for Corymbia torelliana x C. Citriodora clones (TC01, TC02 and TC03) and 1.0 mg L-1 for the clone Corymbia citriodora x C. torelliana (CT01), promoting greater number of shoots; as to the number of subcultures the best results were in the ninth subculture, in which it was able to reach higher values for the number of shoots per explant and vigor; iii) the use of red blue LEDs provided the best response, for the clones analyzed in the in vitro elongation and rooting; the concentration of 15 g L-1 of sucrose presented the best results in relation to the analyzed variables, a concentration that shows a reduction of this component in the medium under these conditions of cultivation; the elongated explants (micro- shoots) showed a better response to the rooting and survival of the plants obtained in the in vitro condition.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superio

LIGHT QUALITY IN THE IN VITRO INTRODUCTION OF Corymbia HYBRID CLONES

ABSTRACT Micropropagation via axillary bud proliferation is recommended for rejuvenation or reinvigoration of selected clones, as well as for improving clonal seedlings rooting. The success of a micropropagation protocol depends on the in vitro introduction, since following phases, multiplication, elongation, and rooting can only take place once the aseptic crop with vegetative vigor has been established. This study aims to assess the effect of light on the in vitro introduction of hybrid clones of Corymbia torelliana x C. citriodora e Corymbia citriodora x C. torelliana by the micropropagation technique through proliferation by axillary buds. The mini-stumps, suppliers of explants for in vitro introduction, were conducted in semi-hydroclonal mini-clonal hedge. Nodal segments from three Corymbia torelliana x C. citriodora (TC01, TC02 e TC03) clones and one Corymbia citriodora x C. torelliana (CT01) clone were collected, disinfested and inoculated in JADS culture medium, in order to compare the effects of light quality from a dark/fluorescent lamp, a fluorescent lamp, and white and red/blue LEDs. At 30 days after inoculation, the following characteristics were evaluated: average contamination percentage, oxidation, non-reactive explants, shoot length and average number of shoots per explant greater than 0.5 cm. Gathered data showed that the use of red/blue LED light source obtained the best results in all assessed characteristics in the in vitro introduction

ACTIVATED CHARCOAL APPLICATION FOR THE MICROPROPAGATION OF Cattleya crispata (Thunb.) Van den Berg

 Micropropagation is an alternative for the genetic conservation and propagation of endemic species from “Campo Rupestre Ferruginoso”, such as the orchid Cattleya crispata. The aim of the present study is to assess the influence of activated charcoal on the in vitro germination, multiplication and elongation phases of C. crispata. Seeds extracted from mature capsules were used for inoculation in the culture medium that was adopted to assess the effect of supplementation, or not, with activated charcoal. Data about germination speed, seedling number, length, vigor, oxidation and contamination (bacterial and/or fungal) were assessed through these phases. Based on the results obtained, the use of activated charcoal was efficient in the in vitro germination and multiplication phases of C. crispata, providing greater speed and percentage of germination, less contamination and oxidation of the tissues, greater number, length and vigor of shoots, being effective for the genetic conservation and production of seedlings of the species. Culture medium without the supplementation of activated charcoal provided the best results for the in vitro elongation, with greater length, vigor and less oxidation of shoots.Aplicação de carvão ativado para micropropagação de Cattleya crispata (Thunb.) Van den Berg  RESUMO: A micropropagação é uma alternativa para a conservação genética e propagação de espécies endêmicas do “Campo Rupestre Ferruginoso”, como a orquídea Cattleya crispata. O objetivo do presente estudo é avaliar a influência do carvão ativado nas fases de germinação, multiplicação e alongamento in vitro de C. crispata. Sementes extraídas de cápsulas maduras foram utilizadas para inoculação no meio de cultura adotado para avaliar o efeito da suplementação, ou não, com carvão ativado. Dados sobre velocidade de germinação, número de brotos por explante, comprimento, vigor, oxidação e contaminação (bacteriana e / ou fúngica) foram avaliados por meio dessas fases. Com base nos resultados obtidos, o uso do carvão ativado foi eficiente nas fases de germinação e multiplicação in vitro de C. crispata, proporcionando maior velocidade e porcentagem de germinação, menor contaminação e oxidação dos tecidos, maior número, comprimento e vigor dos brotos, sendo eficaz para a conservação genética e produção de mudas da espécie. O meio de cultura sem a suplementação de carvão ativado proporcionou os melhores resultados para o alongamento in vitro, com maior comprimento, vigor e menor oxidação dos brotos. Palavras-chave: antioxidante; campos rupestres; orquídea; propagação in vitro.   ABSTRACT: Micropropagation is an alternative for the genetic conservation and propagation of endemic species from rupestrian grasslands, such as the orchid Cattleya crispata. The aim of the present study is to assess the influence of activated charcoal on the in vitro germination, multiplication and elongation phases of C. crispata. Seeds extracted from mature capsules were used for inoculation in the culture medium that was adopted to assess the effect of supplementation, or not, with activated charcoal. Data about germination speed, number of shoots per explant, length, vigor, oxidation and contamination (bacterial and/or fungal) were assessed through these phases. Based on the results obtained, the use of activated charcoal was efficient in the in vitro germination and multiplication phases of C. crispata, providing greater speed and percentage of germination, less contamination and oxidation of the tissues, greater number, length and vigor of shoots, being effective for the genetic conservation and production of plants of the species. Culture medium without the supplementation of activated charcoal provided the best results for the in vitro elongation, with greater length, vigor and less oxidation of shoots. Keywords: antioxidant; orchid; propagation in vitro; rupestrian grasslands

SEEDLING PRODUCTION OF Mimosa calodendron Mart. ex Benth. IN A TEMPORARY IMMERSION BIOREACTOR

ABSTRACT: Micropropagation is one technology to propagate endemic species of the Ferruginous Rupestrian Grasslands when in vitro genetic conservation is sought. The present study aimed to assess the breaking of dormancy, in vitro establishment, multiplication, elongation, rooting, and acclimatization of Mimosa calodendron from culture in a temporary immersion bioreactor system. The seeds used for the experiments were from plants originating from the Ferruginous Rupestrian Grasslands. The percentage of contamination, oxidation, unresponsive seeds, germination, number of buds per explant, shoot length, senescence, percentage of adventitious rooting, and acclimatization were assessed. The breaking of dormancy was most successful by mechanical scarification (80% germination). Immersion in sodium hypochlorite for 5 minutes was the most efficient treatment for in vitro establishment (90%). For the in vitro multiplication and elongation phase, the use of liquid culture medium from cultivation in a temporary immersion bioreactor was the most suitable for the characteristics number of buds per explant (2.55 buds), vigor (1.1), oxidation (1.3) and senescence (1.3) according to the score’s scale. Regardless of the in vitro cultivation method, the percentages of rooting and acclimatization were satisfactory, and it was possible to obtain complete plants in 190 days. Palavras-chave: in vitro propagation; Ferruginous Rupestrian Grasslands; endemic species.   Produção de mudas de Mimosa calodendron Mart. ex Benth. em biorreator de imersão temporária   RESUMO: A micropropagação é uma alternativa para a propagação de espécies endêmicas do Campo Rupestre Ferruginoso, quando se busca a conservação genética in vitro. O trabalho teve como objetivo avaliar a superação de dormência, estabelecimento in vitro, multiplicação, alongamento, enraizamento e aclimatização de Mimosa calodendron a partir do cultivo em sistema de biorreator de imersão temporária (BIT). As sementes utilizadas para os experimentos foram provenientes de plantas oriundas do Campo Rupestre Ferruginoso. A porcentagem de contaminação, oxidação, sementes não responsivas, germinação, número de gemas por explante, comprimento de brotos, senescência, porcentagem de enraizamento e aclimatização foram avaliados. A superação de dormência por escarificação mecânica (80% de germinação) foi a mais adequada para a superação de dormência. A imersão em hipoclorito de sódio por 5 minutos foi o tratamento mais eficiente para o estabelecimento in vitro (90%). Para a fase de multiplicação e alongamento in vitro, o uso do meio de cultivo líquido a partir do cultivo em biorreator de imersão temporária foi o mais adequado para as características número de gemas por explante (2,55 gemas), vigor (1,1), oxidação (1,3) e senescência (1,3) de acordo à escala de notas. Independentemente do método de cultivo in vitro, a porcentagem de enraizamento e aclimatização foram satisfatórios, sendo possível obter plantas completas em 190 dias. Keywords: propagação in vitro; Campo Rupestre Ferruginoso; espécie endêmica.ABSTRACT: Micropropagation is one technology to propagate endemic species of the Ferruginous Rupestrian Grasslands when in vitro genetic conservation is sought. The present study aimed to assess the breaking of dormancy, in vitro establishment, multiplication, elongation, rooting, and acclimatization of Mimosa calodendron from culture in a temporary immersion bioreactor system. The seeds used for the experiments were from plants originating from the Ferruginous Rupestrian Grasslands. The percentage of contamination, oxidation, unresponsive seeds, germination, number of buds per explant, shoot length, senescence, percentage of adventitious rooting, and acclimatization were assessed. The breaking of dormancy was most successful by mechanical scarification (80% germination). Immersion in sodium hypochlorite for 5 minutes was the most efficient treatment for in vitro establishment (90%). For the in vitro multiplication and elongation phase, the use of liquid culture medium from cultivation in a temporary immersion bioreactor was the most suitable for the characteristics number of buds per explant (2.55 buds), vigor (1.1), oxidation (1.3) and senescence (1.3) according to the score’s scale. Regardless of the in vitro cultivation method, the percentages of rooting and acclimatization were satisfactory, and it was possible to obtain complete plants in 190 days. Palavras-chave: in vitro propagation; Ferruginous Rupestrian Grasslands; endemic species.   Produção de mudas de Mimosa calodendron Mart. ex Benth. em biorreator de imersão temporária   RESUMO: A micropropagação é uma alternativa para a propagação de espécies endêmicas do Campo Rupestre Ferruginoso, quando se busca a conservação genética in vitro. O trabalho teve como objetivo avaliar a superação de dormência, estabelecimento in vitro, multiplicação, alongamento, enraizamento e aclimatização de Mimosa calodendron a partir do cultivo em sistema de biorreator de imersão temporária (BIT). As sementes utilizadas para os experimentos foram provenientes de plantas oriundas do Campo Rupestre Ferruginoso. A porcentagem de contaminação, oxidação, sementes não responsivas, germinação, número de gemas por explante, comprimento de brotos, senescência, porcentagem de enraizamento e aclimatização foram avaliados. A superação de dormência por escarificação mecânica (80% de germinação) foi a mais adequada para a superação de dormência. A imersão em hipoclorito de sódio por 5 minutos foi o tratamento mais eficiente para o estabelecimento in vitro (90%). Para a fase de multiplicação e alongamento in vitro, o uso do meio de cultivo líquido a partir do cultivo em biorreator de imersão temporária foi o mais adequado para as características número de gemas por explante (2,55 gemas), vigor (1,1), oxidação (1,3) e senescência (1,3) de acordo à escala de notas. Independentemente do método de cultivo in vitro, a porcentagem de enraizamento e aclimatização foram satisfatórios, sendo possível obter plantas completas em 190 dias. Keywords: propagação in vitro; Campo Rupestre Ferruginoso; espécie endêmica

In vitro cloning of Bambusa vulgaris Schrad. ex J. C. Wendl.: Effect of culture systems, sucrose and activated charcoal supplementation

Fast-growing forest species with multiple uses, like bamboo, have aroused interest for their silvicultural applications. Bamboo species are a valuable source of renewable raw material, and Bambusa vulgaris is an economically important species. However, there are limitations to large-scale cloning of adult-selected genotypes. This study aimed to evaluate the in vitro cloning of Bambusa vulgaris in different culture systems, sucrose and activated charcoal supplementation by the inter-simple-sequence repeat (ISSR) molecular markers. In vitro bud multiplication and shoot elongation were evaluated in three cultivation systems: semi-solid and liquid culture media, and temporary immersion bioreactor (TIB). The sucrose concentrations, 0 and 30 g L−1 were evaluated in the stages. Both the culture media were supplemented with 2.0 mg L−1 benzylaminopurine (BAP) and 0.5 mg L−1 α-naphthalene acetic acid (NAA). The absence and presence of activated charcoal (100 mg L−1) were evaluated in the in vitro rooting. MS culture medium was supplemented with 2 mg L−1 indole-3-butyric acid (IBA), 1.0 mg L−1 NAA, and 0.5 mg L−1 BAP. Semi-solid culture medium supplemented with 30 g L−1 of sucrose presented superior emission of bud per explant. Liquid culture medium supplemented with 30 g L−1 of sucrose presented the most elongated shoots. Activated charcoal in the culture medium did not influence the adventitious rooting. Micropropagated plants showed genetic fidelity and were clones of the adult selected plant

ONTOGENETIC AGE AND INOCULATION METHODS FOR THE IN VITRO ESTABLISHMENT OF Eucalyptus pilularis Smith

We aimed to evaluate the in vitro establishment of nodal segments of Eucalyptus pilularis Smith considering two origins of tissues (Or1 - epicormic shoots collected from pruned branches of selected adult trees; Or2 - shoots collected from seminal mini-stumps) and four inoculation methods (Me1 - culture medium supplemented with 0.5 g L-1 activated charcoal; Me2 - culture medium supplemented with 800 mg L-1 PVP30; Me3 - exposure to light for 30 days; Me4 - exposure to dark for 7 days). At 30 days after the in vitro inoculation of tissues, there was no establishment of tissues from epicormic shoots (Or1). Or2 resulted in lower percentages of tissue oxidation and contamination by microorganisms, in addition to having presented establishment and formation of shoots. Me1 resulted in a lower mean tissue oxidation, although it differed statistically only from Me4. An origin of the tissues of ontogenetic age was a determining factor for the successful in vitro establishment of E. pilularis. The use of the Or2 origin and the Me1, Me2, and Me3 methods are recommended to reduce phenolic oxidation of tissues in the in vitro establishment. Keywords: antioxidant agents; exposure to light; epicormic shoots; tissue oxidation.   Idade ontogenética e métodos de inoculação para o estabelecimento in vitro de Eucalyptus pilularis Smith   RESUMO: Objetivou-se avaliar o estabelecimento in vitro de segmentos nodais de Eucalyptus pilularis considerando duas origens de tecidos (Or1 - brotos epicórmicos coletados em galhos podados de matrizes adultas e Or2 - brotos coletados de minicepas seminais) e quatro métodos de inoculação (Me1 - meio de cultura suplementado com 0,5 g L-1 de carvão ativado, Me2 - meio de cultura suplementado com 800 mg L-1 de PVP30, Me3 - exposição à luminosidade por trinta dias e Me4 - exposição em ambiente com ausência de luminosidade por sete dias). Aos 30 dias após a inoculação in vitro dos tecidos, constatou-se que não houve estabelecimento de tecidos oriundos da Or1. A utilização de segmentos nodais provenientes da Or2 resultou em menores percentuais de oxidação e de contaminação por microrganismos, além de ter apresentado estabelecimento e emissão de brotos. O uso do Me1 resultou em menor média de oxidação, embora tenha diferido estatisticamente somente do Me4. A origem dos tecidos associada à idade ontogenética foi um fator determinante para o sucesso do estabelecimento in vitro de E. pilularis. Recomenda-se a utilização da Or2 e dos métodos Me1, Me2 e Me3 a fim de reduzir a oxidação fenólica dos tecidos durante o estabelecimento in vitro. Palavras-chave: agentes antioxidantes; exposição à luminosidade; brotos epicórmicos; oxidação de tecidos.We aimed to evaluate the in vitro establishment of nodal segments of Eucalyptus pilularis Smith considering two origins of tissues (Or1 - epicormic shoots collected from pruned branches of selected adult trees; Or2 - shoots collected from seminal mini-stumps) and four inoculation methods (Me1 - culture medium supplemented with 0.5 g L-1 activated charcoal; Me2 - culture medium supplemented with 800 mg L-1 PVP30; Me3 - exposure to light for 30 days; Me4 - exposure to dark for 7 days). At 30 days after the in vitro inoculation of tissues, there was no establishment of tissues from epicormic shoots (Or1). Or2 resulted in lower percentages of tissue oxidation and contamination by microorganisms, in addition to having presented establishment and formation of shoots. Me1 resulted in a lower mean tissue oxidation, although it differed statistically only from Me4. An origin of the tissues of ontogenetic age was a determining factor for the successful in vitro establishment of E. pilularis. The use of the Or2 origin and the Me1, Me2, and Me3 methods are recommended to reduce phenolic oxidation of tissues in the in vitro establishment. Keywords: antioxidant agents; exposure to light; epicormic shoots; tissue oxidation.   Idade ontogenética e métodos de inoculação para o estabelecimento in vitro de Eucalyptus pilularis Smith   RESUMO: Objetivou-se avaliar o estabelecimento in vitro de segmentos nodais de Eucalyptus pilularis considerando duas origens de tecidos (Or1 - brotos epicórmicos coletados em galhos podados de matrizes adultas e Or2 - brotos coletados de minicepas seminais) e quatro métodos de inoculação (Me1 - meio de cultura suplementado com 0,5 g L-1 de carvão ativado, Me2 - meio de cultura suplementado com 800 mg L-1 de PVP30, Me3 - exposição à luminosidade por trinta dias e Me4 - exposição em ambiente com ausência de luminosidade por sete dias). Aos 30 dias após a inoculação in vitro dos tecidos, constatou-se que não houve estabelecimento de tecidos oriundos da Or1. A utilização de segmentos nodais provenientes da Or2 resultou em menores percentuais de oxidação e de contaminação por microrganismos, além de ter apresentado estabelecimento e emissão de brotos. O uso do Me1 resultou em menor média de oxidação, embora tenha diferido estatisticamente somente do Me4. A origem dos tecidos associada à idade ontogenética foi um fator determinante para o sucesso do estabelecimento in vitro de E. pilularis. Recomenda-se a utilização da Or2 e dos métodos Me1, Me2 e Me3 a fim de reduzir a oxidação fenólica dos tecidos durante o estabelecimento in vitro. Palavras-chave: agentes antioxidantes; exposição à luminosidade; brotos epicórmicos; oxidação de tecidos

Effect of light spectra on in vitro multiplication, elongation and adventitious rooting stages of Bambusa vulgaris Schrad. ex J. C. Wendl.

Bamboos occur throughout much of the temperate and tropical world, have rapid growth, and have various commercial and environmental applications. Clonal production of selected plants on a industrial scale is an important strategy for the bamboo sector. This study aimed to evaluate the effects of the light spectrum on in vitro multiplication, elongation, adventitious rooting, and anatomical features of the leaf surface of Bambusa vulgaris. In the multiplication and elongation stages, in vitro–established explants were transferred to a culture medium supplemented with 8.88 µmol of 6-benzylaminopurine (BAP) and 2.69 µmol of α-naphthalene acetic acid (NAA), and subjected to four light spectra (i.e., white, blue, green, and red). At the adventitious rooting stage, the culture medium was supplemented with 9.84 µmol of indole-3-butyric acid (IBA), 5.37 µmol NAA, and 2.22 µmol BAP under identical light spectra. Explant survival was not influenced by light spectra in the multiplication and elongation stages. White (2.2 shoots) and blue (1.8 shoots) light spectra were the most suitable for the number of shoots per explant. The white spectrum was associated with the highest average length of shoots (7.4 cm) and number of leaves per explant (3.0 leaves). The white light spectrum resulted in the highest average chlorophyll a contents (12.60 µg mg−1), total chlorophyll (16.60 µg mg−1), and carotenoids (10.10 µg mg−1). White and blue light spectra resulted in the best responses for vigor, and least senescence and tissue oxidation. White and blue light spectra favored the chlorophyll b content, resulting in 4.60 and 3.60 µg mg−1, respectively. Survival (80.0 %), adventitious rooting (50.0 %), vigor, senescence, and tissue oxidation were favored in the white light spectrum in the adventitious rooting stage. Scanning electron microscopy of leaves exposed to the white light spectrum revealed microtrichomes and spines on the adaxial surface of the leaf blade, papillae and stomata; on the abaxial surface, there were many unicellular trichomes arranged in rows, denoting normal growth and development. These results may help the production of micropropagated plants of Bambusa vulgaris on an industrial scale