Aislamiento, identificación y selección de microorganismos con potencial capacidad para ejercer un control biológico contra el hongo thecaphora frezii (agente causante del carbón del maní)

La provincia de Córdoba es la principal productora y exportadora de maní del país. Este cultivo presenta frecuentemente una infección causada por el hongo Thecaphora frezii, lo cual genera pérdidas económicas importantes, tanto por el cierre de exportaciones como por una disminución en el rinde de la cosecha. Esta infección, hasta ahora, no ha podido ser controlada exitosamente a pesar de haberse implementado diferentes estrategias.De acuerdo a lo señalado anteriormente, el propósito del presente proyecto es poder identificar microorganismos o agentes biológicos por éstos sintetizados, para poder llevar a cabo el control de Thecaphora frezii, agente causante de la enfermedad conocida como carbón del maní.Para ello, se procederá al cultivo del hongo proveniente de plantaciones de diversas regiones de la provincia de Córdoba. Luego, se lo expondrá a la presencia de diversos microorganismos, entre ellos bacterias y hongos, a los fines de evaluar si alguno de ellos puede interferir en el crecimiento del mismo. A partir de allí, nos proponemos identificar principios activos que puedan ejercer este control, para ello, se aplicarán técnicas de biología molecular regularmente utilizadas en procesos biotecnológicos. Si logramos poder producir principios activos con las propiedades indicadas, los mismos podrían ser usados en el tratamiento de la enfermedad causada Thecaphora frezii, la cual afecta a numerosas plantaciones de maní.Fil: Soria, Néstor Walter. Universidad Católica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentin

Factores de riesgo asociados a la presentación de complicaciones y factores predictivos de respuesta al tratamiento farmacológico en pacientes con síndrome metabólico y diabetes mellitus tipo 2. Interacción clínica, bioquímica y molecular

El Síndrome Metabólico y la Diabetes Mellitus Tipo 2 (DM2) son patologías crónicas que afectan a millones de personas en el mundo. En nuestro país la cifra de individuos que padecen DM2 incrementa de manera importante día a día. Como se trata de una enfermedad crónica, los pacientes reciben en algún momento de su vida uno o más tratamientos farmacológicos. La efectividad de los mismos depende de numerosos factores, entre ellos el estado general del paciente, la presencia de otras enfermedades y el componente genético. Nuestro estudio pretende analizar la contribución que tienen ciertos marcadores genéticos en el desarrollo de complicaciones en estos pacientes por un lado, y por otro, tratar de correlacionar la presencia de ciertas variantes genéticas con la efectividad terapéutica de los medicamentos prescriptos medidos en función de la respuesta clínica y bioquímica de los pacientes.Fil: Soria, Néstor Walter. Universidad Católica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentin

Rol de variantes genéticas en el desarrollo de Enfermedad Renal Crónica en pacientes con Diabetes Mellitus Tipo 2

La Enfermedad Renal Crónica (ERC) es una afección que perjudica a un gran número de pacientes. Una de las causas es la Nefropatía en pacientes con Diabetes Mellitus Tipo 2 (DM2).Objetivo: Indagar si la presencia de variantes genéticas contribuyen al desarrollo de ERC en pacientes con DM2.Materiales y métodos: se evaluaron criterios clínicos, bioquímicos y moleculares en 25 pacientes con DM2. Los polimorfismos se analizaron mediante PCR-RFLP para ECA (rs4646994); CDKAL1 (rs7756992); e-NOS (rs1799983) y SLC12A3 (rs11643718).Resultados: El análisis estadístico mediante modelo dominante arrojaron para: ECA (rs4646994) (OR=1,33 (IC 95%) 0,25-7,01; p=0,73); CDKAL1 (rs7756992) (OR= 1 (IC 95%) 0,14-7,39; p=NA); e-NOS (rs1799983) (OR= 0,29 (IC 95%) 0,05-1,57; p=0,14) y SLC12A3 (rs11643718 (OR= 1,62 (IC 95%) 0,19-13,93; p=0,66).Conclusiones: ninguna de las variantes evaluadas en los genes ECA, CDKAL1, e-NOS y SLC12A3 mostraron asociaciones positivas o negativas con el riesgo a desarrollar ERC en pacientes con DM2.Fil: Yang, Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; Argentina. Area de Ciencias Agrarias, Ingeniería, Ciencias Biológicas y de la Salud de la Universidad Católica de Córdoba; ArgentinaFil: Ojeda, Verónica. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Hospital Nacional de Clínicas; ArgentinaFil: Ruiz Pecchio, Adriana. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Hospital Nacional de Clínicas; ArgentinaFil: Soria, Néstor Walter. Area de Ciencias Agrarias, Ingeniería, Ciencias Biológicas y de la Salud de la Universidad Católica de Córdoba; Argentin

Development of a method to control the RNA extraction and reverse transcription steps for the detection of dengue virus present in human blood samples

AIMS: Molecular biology techniques based on the detection of genomic sequences by reverse transcription combined with polymerase chain reaction (PCR) have enabled the detection of different RNA viruses in serum or plasma samples. Since the dengue epidemic outbreak declared in Argentina in 2009, numerous patients´ samples were analyzed for the acute phase of infection. One of the main methodological drawbacks is the lack of internal control to measure the effectiveness of the viral extraction and reverse transcription process. In this article, we propose to standardize a molecular method to detect beta actin (â-Act) and glucose 6 phosphate dehydrogenase (G6PDH) complementary DNAs (cDNAs) present in patient´s plasma/serum, as a control process. RESULTS: RNA extraction, reverse transcription, and PCRs for human G6PDH, â-Act, and the dengue virus genome were performed. cDNA fragments for â-Act and G6PDH were amplified for all samples, regardless of the presence or absence of viral RNA. CONCLUSIONS: Amplification of â-Act and G6PDH cDNAs can be used as a control for the extraction and reverse transcription processes during dengue virus detection. This could also be a useful method for controlling the above steps when infections caused by other RNA viruses are studied, even if another methodology is employed, such as real-time PCR.Fil: Galván, Cristian Ariel. Universidad Católica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; ArgentinaFil: Elbarcha, Osvaldo C.. No especifíca;Fil: Fernández, Eduardo J.. No especifíca;Fil: Beltramo, Dante Miguel. Universidad Católica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina. Provincia de Córdoba. Ministerio de Ciencia y Técnica. Centro de Excelencia en Productos y Procesos de Córdoba; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; ArgentinaFil: Soria, Néstor Walter. Universidad Católica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentin

Identification and Expression of Some Plant Cell Wall-Degrading Enzymes Present in Three Ontogenetics Stages of Thecaphora frezii, a Peanut (Arachis hypogaea L.) Pathogenic Fungus

Peanuts can be affected by the presence of pathogenic microorganisms. The fungus Thecaphora frezii (T. frezii), which belongs to the taxonomic class Ustilaginomycetes, is the causal agent of the disease known as “peanut smut”. The life cycle of this fungus includes three stages, namely teliospores, basidiospores and hyphae. In the hyphae stage, infection occurs in the peanut plant, which requires the involvement of some enzymes secreted by the fungus. These include the Plant Cell Wall-Degrading Enzymes (PCWDEs), which degrade various polysaccharides. This study aimed to identify the presence of transcript for enzymes belonging to the PCWDEs from three stages of T. frezii. For this, total RNA was extracted from the three ontogenetic stages of T. frezii. These samples were analyzed using an RNA-Seq approach and some transcripts were quantified using Real Time PCR. The analysis of the data provided by the RNA-Seq of the three T. frezii stages, it was possible to identify some transcripts that could encode enzymes compatible with polysaccharides degradation that are part of the plant cell wall. In T. frezii transcriptome, 40 deduced proteins would be enzymes with functions of PCWDEs were identified. They were divided into 27 glycoside hydrolases; two polysaccharide lyases; three carbohydrate esterases and eight enzymes with auxiliary activities. In addition, the fungal SNF1 gene was identified whose activity could be affected by high glucose level, and indirectly influence the levels of some PCWDEs. The analysis of the PCWDEs could help to understand part of the fungal infection process and possibly find substances that can control its development.Fil: Soria, Néstor Walter. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; Argentina. Area de Ciencias Agrarias, Ingeniería, Ciencias Biológicas y de la Salud de la Universidad Católica de Córdoba; ArgentinaFil: Figueroa, Ana Cristina. Provincia de Córdoba. Ministerio de Ciencia y Técnica. Centro de Excelencia en Productos y Procesos de Córdoba; ArgentinaFil: Díaz, María Soledad. Provincia de Córdoba. Ministerio de Ciencia y Técnica. Centro de Excelencia en Productos y Procesos de Córdoba; ArgentinaFil: Alasino, Roxana Valeria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; Argentina. Provincia de Córdoba. Ministerio de Ciencia y Técnica. Centro de Excelencia en Productos y Procesos de Córdoba; ArgentinaFil: Yang, Pablo. Area de Ciencias Agrarias, Ingeniería, Ciencias Biológicas y de la Salud de la Universidad Católica de Córdoba; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; ArgentinaFil: Beltramo, Dante Miguel. Area de Ciencias Agrarias, Ingeniería, Ciencias Biológicas y de la Salud de la Universidad Católica de Córdoba; Argentina. Provincia de Córdoba. Ministerio de Ciencia y Técnica. Centro de Excelencia en Productos y Procesos de Córdoba; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; Argentin

Modificaciones sitio dirigidas en la albúmina sérica humana para mejorar su afinidad en el transporte de medicamentos

La albúmina sérica humana es una proteína globular de importancia biológica. Se destacan su capacidad para mantener la presión oncótica del plasma y como transportadora de muchos compuestos, entre ellos fármacos. Muchos de estos fármacos, antimicóticos y oncológicos son altamente hidrofóbicos y son vehiculizados en medios acuosos formando complejos con la albúmina. Esta interacción ocurre por la presencia de tres dominios hidrofóbicos presentes en el interior de su estructura proteica. Esto permite deducir que la incorporación de drogas hidrofóbicas se encuentra limitado por el número de dominios hidrofóbicos. Este proyecto plantea como objetivo el desarrollo de nuevas variantes de albúmina, que presenten dominios hidrofóbicos más extendidos para mejorar su capacidad transportadora. Se procederá en primera instancia a realizar el clonado del cADN de la albúmina en un vector de expresión. Se realizarán modificaciones puntuales e inserciones de nucleótidos en el gen de la albúmina que permitan incrementar la cantidad de secuencias hidrofóbicas presentes. Se expresarán y purificarán las diferentes variantes de albúmina. De lograrse los objetivos, se caracterizarán las propiedades biológicas y fisico-químicas de estas variantes mediante análisis farmacológicos, inmunológicos y de biocompatibilidad. En una segunda etapa podremos analizar y evaluar la posibilidad de usar algunas de estas variantes como nuevos vehículos para el transporte de diversos fármacos.Fil: Soria, Néstor Walter. Universidad Católica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; ArgentinaFil: Beltramo, Dante Miguel. Universidad Católica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentin

Modificaciones sitio dirigidas en la albúmina sérica humana para mejorar su afinidad en el transporte de medicamentos

La albúmina sérica humana es una proteína globular de importancia biológica. Se destacan su capacidad para mantener la presión oncótica del plasma y como transportadora de muchos compuestos, entre ellos fármacos. Muchos de estos fármacos, antimicóticos y oncológicos son altamente hidrofóbicos y son vehiculizados en medios acuosos formando complejos con la albúmina. Esta interacción ocurre por la presencia de tres dominios hidrofóbicos presentes en el interior de su estructura proteica. Esto permite deducir que la incorporación de drogas hidrofóbicas se encuentra limitado por el número de dominios hidrofóbicos. Este proyecto plantea como objetivo el desarrollo de nuevas variantes de albúmina, que presenten dominios hidrofóbicos más extendidos para mejorar su capacidad transportadora. Se procederá en primera instancia a realizar el clonado del cADN de la albúmina en un vector de expresión. Se realizarán modificaciones puntuales e inserciones de nucleótidos en el gen de la albúmina que permitan incrementar la cantidad de secuencias hidrofóbicas presentes. Se expresarán y purificarán las diferentes variantes de albúmina. De lograrse los objetivos, se caracterizarán las propiedades biológicas y fisico-químicas de estas variantes mediante análisis farmacológicos, inmunológicos y de biocompatibilidad. En una segunda etapa podremos analizar y evaluar la posibilidad de usar algunas de estas variantes como nuevos vehículos para el transporte de diversos fármacos.Fil: Soria, Néstor Walter. Universidad Católica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; ArgentinaFil: Beltramo, Dante Miguel. Universidad Católica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentin

Eficácia de Metformina em doentes com diabetes tipo II, relacionado com variantes do gene SLC22A1

La diabetes mellitus tipo II (DM II) es una enfermedad que afecta una gran cantidad de individuos. Un medicamento empleado en el tratamiento de los pacientes es la metformina. Este medicamento es transportado al interior de los hepatocitos por un transportador codificado por el gen SLC22A1. Variantes en el gen con actividad reducida pueden disminuir la cantidad de metformina disponible en el hígado y reducir la respuesta terapéutica. Se propuso evaluar diferentes parámetros bioquímicos en relación a la dosis de metformina y la presencia de variantes en el transportador. Se estudiaron 103 pacientes mayores de 18 años con diagnóstico de DM II, tratados con 1700 mg/ día de metformina por más de 6 meses. Se analizaron 5 polimorfismos en el gen SLC22A1, glucemia, HbA1c, función hepática, perfil lipídico y renal. Los niveles de HbA1c y de glucemia fueron más elevados en los pacientes que presentaban los polimorfismos R61C, G401S, M420del y G465R aunque la diferencia fue estadísticamente significativa sólo para la HbA1c en los pacientes que presentaban las variantes M420del y G465R (p=0,0273 y 0,0018, respectivamente). La presencia de polimorfismos con actividad reducida en el gen SLC22A1 afecta los niveles de glucemia y de HbA1c en pacientes con DM II cuando son tratados con metformina.Diabetes mellitus type II (DM II) is a disease that affects a large number of individuals. One of the drugs used for the treatment is metformin. Metformin is delivered into hepatocytes by a transporter encoded by the SLC22A1 gene. Gene variants with reduced activity may decrease the amount of metformin available in the liver and reduce the therapeutic response. Various biochemical parameters were evaluated in relation to the metformin dose and the presence of transporter variants. A total of 103 patients older than 18 diagnosed with DM II who were treated with 1700 mg/day of metformin for more than six months were studied. Five polymorphisms in the SLC22A1 gene were analyzed as well as glycemia, HbA1c level, liver function, and lipid and kidney profiles. HbA1c and glycemia levels were higher in patients with the R61C, G401S, M420del and G465R polymorphisms; although the difference was statistically significant only for HbA1c in patients with the M420del and G465R variants (p=0.0273 and 0.0018, respectively). Polymorphisms with reduced activity in the SLC22A1 gene affect blood glucose levels and HbA1c in patients with DM II when they are treated with metformin.O diabetes mellitus tipo II (DM II) é uma doença que afeta uma grande quantidade de indivíduos. Um medicamento utilizado no tratamento dos doentes é a metformina. Esse medicamento é transportado no interior dos hepatócitos por um transportador codificado pelo gene SLC22A1. Variantes no gene com atividade reduzida podem diminuir a quantidade de Metformina disponível no fígado e reduzir a resposta terapêutica. Propôs-se avaliar diferentes parâmetros bioquímicos em relação à dose da metformina e à presença de variantes no transportador. Foram estudados 103 pacientes maiores de 18 anos com diagnóstico de DM II tratados com 1700 mg/dia de metformina por mais de 6 meses. Foram analisados 5 polimorfismos no gene SLC22A1; glicemia, HbA1c, função hepática, perfil lipídico e renal. Os níveis de HbA1c e de glicemia foram superiores em doentes que apresentavam os polimorfismos R61C, G401S, M420del e G465R; embora a diferença seja estatisticamente significativa apenas para o HbA1c nos doentes que apresentavam as variantes M420del e G465R (p=0,0273 e 0,0018; respectivamente). A presença de polimorfismos com atividade reduzida no gene SLC22A1 afeta os níveis da glicemia e do HbA1c em doentes com DM II quando são tratados com metformina.Fil: Yang, Pablo. Universidad Catolica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Nicolás, Juan Carlos. Universidad Catolica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; ArgentinaFil: Galván, Cristian Ariel. Universidad Catolica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; ArgentinaFil: Vélez, Pablo. Provincia de Córdoba. Ministerio de Ciencia y Técnica. Centro de Excelencia En Productos y Procesos de Córdoba; ArgentinaFil: Da Ronco, Luciano. Laboratorio de Análisis Clínicos Especializados ; ArgentinaFil: Díaz, Gustavo Tomas. Centro Médico San Ricardo Pampurri; ArgentinaFil: Beltramo, Dante Miguel. Universidad Catolica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina. Provincia de Córdoba. Ministerio de Ciencia y Técnica. Centro de Excelencia En Productos y Procesos de Córdoba; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Soria, Néstor Walter. Universidad Catolica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentin

Búsqueda de nuevos compuestos obtenidos a partir de plantas nativas y naturalizadas del centro de Argentina con acción inhibidora de bacterias, enzimas asociadas a patologías y bombas de resistencia a multidrogas (MDR)

Las infecciones bacterianas están en franco aumento por diversas razones, en especial por la aparición de resistencia a los antibióticos comerciales. Por otro lado los inhibidores de acetilcolinesterasa (AChE) y tirosinasa, ambas enzimas relacionadas con diversas patologías como por ejemplo la enfermedades de Alzheimer o Parkinson, presentan ciertos inconvenientes en especial asociados a su toxicidad. Es por esto que el descubrimiento de moléculas obtenidas de plantas con acción inhibidora de bacterias y de las mencionadas enzimas es un desafío de muchos investigadores. En otro aspecto relacionado a la salud humana, muchas drogas antitumorales convencionales corren el riesgo de perder protagonismo debido a su deteriorada eficacia, fundamentalmente atribuida al hecho de que las células cancerígenas han desarrollado resistencia contra ellas. Este fenómeno se debe a la sobre-expresión de proteínas de membrana que actúan como bombas de resistencia a multidrogas (MDR). La inhibición de estas bombas se traduce en un aumento de la eficacia de las quimioterapias. Las plantas son capaces de sintetizar compuestos que utilizan como sus propias armas de defensa contra el ataque de agentes externos negativos. Esta propiedad puede ser aprovechada por el hombre para la obtención de nuevos medicamentos fitoterápicos. Continuando con la búsqueda de compuestos naturales bioactivos que realiza nuestro grupo de investigación, es nuestro objetivo encontrar nuevos compuestos obtenidos a partir de plantas nativas y naturalizadas de la región Central de Argentina efectivos para inhibir bacterias, enzimas asociadas a enfermedades y MDR. Estos productos pueden llevar a nuevos medicamentos fitoterápicos o a novedosos líderes para la síntesis de análogos. De esta manera podremos contribuir a mejorar la calidad de vida de los pacientes afectados.Fil: Carpinella, María Cecilia. Universidad Católica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; ArgentinaFil: Palacios, Sara María. Universidad Católica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentin

Búsqueda e identificación de polimorfismos en genes asociados con una efectividad farmacológica disminuida. Caracterización molecular, hallazgos bioquímicos y clínicos y su respectiva correlación con la respuesta farmacológica en el tratamiento de enfermedades crónicas e infecciosas

En medicina, es frecuente encontrar diferencias en la respuesta de una misma droga en distintos individuos. Algunos factores que contribuyen con esta respuesta diferencial incluyen variables como edad, biodisponilidad y absorción gastro-intestinal de los medicamentos, interacción entre fármacos, hábitos alimentarios y factores genéticos. Dentro de los factores genéticos, encontramos polimorfismos genéticos que afectan la absorción, el metabolismo y el transporte de fármacos, como así también receptores de los mismos y/o, la interacción con otros genes. Algunos polimorfismos genéticos que contribuyen a una respuesta farmacológica disminuida han sido descriptos en patologías como, la hipercolesterolemia, artritis reumatoidea, cáncer, diabetes, hipertensión arterial, esquizofrenia, asma, hepatitis C y SIDA, entre otras. Nuestro estudio pretende: I) Identificar polimorfismos en genes que codifican para enzimas metabolizadoras de fármacos, para canales iónicos y, para receptores de fármacos (como por ejemplo polimorfismos en el receptor beta 2 adrenérgico en pacientes tratados con salbutamol que presentan bronquiolitis). II) Identificar la presencia de un polimorfismo en el gen CES 1 que codifica para la enzima carboxilesterasa 1 (en una población hospitalaria), que participa en la activación de la prodroga oseltamivir utilizada en el tratamiento de la Gripe A (H1N1). Los resultados obtenidos podrán ser de gran utilidad en el tratamiento médico, ya que permitirá optimizar el uso de fármacos, disminuir los efectos secundarios causados por los mismos, y proponer el empleo de otros fármacos.Fil: Soria, Néstor Walter. Universidad Católica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; ArgentinaFil: Beltramo, Dante Miguel. Universidad Católica de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentin