Spatial distribution of Phlebotominae in Puerto Iguazú-Misiones, Argentina-Brazil- Paraguay border area

The first Argentinian autochthonous human case of visceral leishmaniasis (VL) was confirmed in Posadas (Misiones) in 2006. Since then, the disease has increased its incidence and geographical distribution. In the 2006-2012 period, 107 human cases were detected (11 deaths). The presence of Lutzomyia longipalpis was detected in peridomiciles in Puerto Iguazú urban area in 2010; some of these findings were associated with households where cases of canine VL had already been reported. The objective of this study was to ascertain the abundance and spatial distribution of Lu. longipalpis in Puerto Iguazú City, on the Argentina-Brazil-Paraguay border. Lu. longipalpis proved to be exclusively urban and was found in 31% of the households sampled (n = 53), 67% of which belonged to areas of low abundance, 20% to areas of moderate abundance and 13% to areas of high abundance. Nyssomyia whitmani was the only species found both in urban and peri-urban environments, and Migonemyia migonei was registered only on the outskirts of the city. Due to the fact that Puerto Iguazú is considered to be at moderate risk at the moment, it is necessary to intensify human and canine case controls, as well as take integrated prevention and control measures regarding the environment, vectors and reservoirs on the Argentina-Brazil-Paraguay border area.Fil: Santini, Maria Soledad. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud. Centro Nacional de Diagnóstico e Investigaciones Endemo-epidémicas; Argentina; Red de Investigación de Leishmaniasis Argentina; Argentina;Fil: Gould, Ignacio Tomás. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud. Centro Nacional de Diagnóstico e Investigaciones Endemo-epidémicas; Argentina; Red de Investigación de Leishmaniasis Argentina; Argentina;Fil: Manteca Acosta, Mariana. Ministerio de Salud. Instituto Nacional de Medicina Tropical; Argentina; Red de Investigación de Leishmaniasis Argentina; Argentina;Fil: Berrozpe, Pablo Eduardo. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud. Centro Nacional de Diagnóstico e Investigaciones Endemo-epidémicas; Argentina; Red de Investigación de Leishmaniasis Argentina; Argentina;Fil: Acardi, Soraya Alejandra. Universidad Nacional de Misiones. Facultad de Ciencias Exactas, Químicas y Naturales. Laboratorio de Biología Molecular Aplicada; Argentina; Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico - CONICET - Nordeste; Argentina;Fil: Fernández, María Soledad. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud. Centro Nacional de Diagnóstico e Investigaciones Endemo-epidémicas; Argentina; Red de Investigación de Leishmaniasis Argentina; Argentina; Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico - CONICET - Nordeste; Argentina;Fil: Gómez, Andrea. Fundación Mundo Sano; Argentina;Fil: Salomon, Raul Armando. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico - CONICET - Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas; Argentina; Red de Investigación de Leishmaniasis Argentina; Argentina; Ministerio de Salud. Instituto Nacional de Medicina Tropical; Argentina

Distribuicao espacial de Phlebotominae em Puerto Iguazu, Misiones, area de fronteira da Argentina-Brasil-Paraguai

RESUMO O primeiro caso humano autóctone de leishmaniose visceral (LV) na Argentina ocorreu na cidade de Posadas (Misiones) em 2006, desde então, tem ocorrido um aumento na incidência e distribuição geográfica da doença. No período entre 2006 e 2012 foram detectados 107 casos humanos com 11 mortes. Em 2010 se constatou a presença de Lutzomyia longipalpis no município de Puerto Iguazú, localizado na fronteira entre Argentina-Brasil-Paraguai. O presente estudo teve como objetivo investigar a abundância e distribuição de Lu. longipalpis no município de Puerto Iguazú. Lu. longipalpis foi encontrada exclusivamente na área urbana, em 31% das amostras coletadas dos domicílios de referência (n = 53), 67% das quais pertenciam às áreas de baixa abundância, 20% às de moderada e 13% às de alta abundância da espécie. Nyssomyia whitmani foi coletado em ambientes urbanos e periurbanos e Migonemyia migonei, somente nas periferias da cidade. Na atualidade, a cidade de Puerto Iguazú é considerada como de risco moderado; por isso, é necessário intensificar o controle tanto de casos humanos como de caninos e levar em conta as medidas de prevenção e controle do ambiente, dos vetores e dos reservatórios na zona de fronteira Argentina-Brasil-Paraguai.SUMMARY The first Argentinian autochthonous human case of visceral leishmaniasis (VL) was confirmed in Posadas (Misiones) in 2006. Since then, the disease has increased its incidence and geographical distribution. In the 2006-2012 period, 107 human cases were detected (11 deaths). The presence of Lutzomyia longipalpis was detected in peridomiciles in Puerto Iguazú urban area in 2010; some of these findings were associated with households where cases of canine VL had already been reported. The objective of this study was to ascertain the abundance and spatial distribution of Lu. longipalpis in Puerto Iguazú City, on the Argentina-Brazil-Paraguay border. Lu. longipalpis proved to be exclusively urban and was found in 31% of the households sampled (n = 53), 67% of which belonged to areas of low abundance, 20% to areas of moderate abundance and 13% to areas of high abundance. Nyssomyia whitmani was the only species found both in urban and peri-urban environments, and Migonemyia migonei was registered only on the outskirts of the city. Due to the fact that Puerto Iguazú is considered to be at moderate risk at the moment, it is necessary to intensify human and canine case controls, as well as take integrated prevention and control measures regarding the environment, vectors and reservoirs on the Argentina-Brazil-Paraguay border area

Caracterización molecular de Leishmania (Viannia) braziliensis y Leishmania (Leishmania) infantum y estudios ecológicos de Lutzomyia longipalpis en Misiones.

Tesis (Grado Doctor en Ciencias Biológicas)--Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales. Lugar de Trabajo: Laboratorio de Biología Molecular Aplicada - LaBiMAp-Facultad de Ciencias Exactas, Químicas y Naturales FCEQyN-CONICET- Universidad Nacional de Misiones / Universidad Nacional de Córdoba. 2016. 156 h. con Anexos + CD. tabls.; ils.; grafs; Contiene Referencia Bibliográfica y Publicaciones Derivadas de la Tesis.La leishmaniasis es una enfermedad parasítico-infecciosa causada por protozoos del género Leishmania que se transmiten a través de la picadura de dípteros hembras pertenecientes a la subfamilia Phlebotominae; en Argentina la Leishmaniasis Cutánea es endémica en el norte del país mientras que el escenario de transmisión de Leishmaniasis Visceral se encuentra en expansión. Este trabajo tiene por objeto optimizar metodologías de biología molecular para la caracterización de las especies de parásitos intervinientes en la LC y LV en la provincia de Misiones, demostrar su factibilidad operacional e integración con estudios eco-epidemiológicos en terreno, y generar a su vez resultados preliminares que contribuyan al conocimiento y desarrollo de medidas de control locales. Se adaptaron protocolos de extracción de ADN a partir de diferentes muestras biológicas (sangre, tejidos, fluidos, vectores) y se optimizaron protocolos de amplificación de diferentes blancos genómicos (ITS-1 y Mini-exón), para detección/tipificación de especies de Leishmania por 2 protocolos de PCR-RFLP y secuenciación. Se llevaron a cabo capturas de Phlebotominae con trampas de luz y adaptador multi-muestreo para actividad horaria. Se establecieron pretratamientos, concentraciones/tiempo de digestión por proteinasa k y volúmenes de diluciones post-extracción para las diferentes muestras; el protocolo con mayor sensibilidad teórica de detección fue el de ITS1. En muestras clínicas de LC se tipificó la especie L.(V.) braziliensis mientras que en lotes de Lutzomyia longipalpis y casos de Leishmaniasis Visceral Canina se tipificó L.(L.) infantum con una concordancia entre protocolos de PCR muy buena en muestras clínicas y buena en vectores y casos LVC. Los análisis de infección por Leishmania en Lu. longipalpis provenientes de áreas de Alta Abundancia del Vector y Áreas Sin Vector resultaron negativos; a partir de los canes de dichas áreas se tipificó L. (L.) infantum con concordancia muy buena de protocolos con blanco en ITS-1 y Mini-exón para muestras de ganglio y pobre en hisopados de conjuntiva (ITS-1 detectó más positivos), no encontrándose diferencias entre porcentajes de canes positivos de dichas áreas. El protocolo de ITS-1 sobre muestras de hisopados de conjuntiva detectó más porcentaje de positivos que el análisis serológico por rk39 y que el de Mini-exón. La probabilidad de que una muestra sea positiva por rk39 aumenta con la edad no observándose asociación entre edad canina e infección detectados por PCR. En relación con los datos eco-epidemiológicos la dinámica de Lu. longipalpis mostró un patrón bi-modal anual y una asociación entre su abundancia en ámbito urbano con la temperatura máxima promedio mensual correspondiente al mes de captura como así también a 30 y 60 días previos a la captura. Las hembras se presentan de 17:00 hs a 23:00 hs disminuyendo su abundancia hasta casi desaparecer después de las 3:00 hs; los machos mostraron actividad hasta el último periodo horario; no se observó diferencia significativa entre el número de machos y hembras registrados después de las 03:00. Sin embargo, se observó diferencia significativa entre la abundancia promedio de machos y hembras que ingresaron a la trampa por periodos en febrero y abril. La abundancia de hembras se correlacionó positivamente con la temperatura y negativamente con humedad relativa en febrero y marzo. La capacidad de tipificación de Leishmania sp. en las especies de Phlebotominae incriminadas como vectores y asociadas a la transmisión en la provincia, como así también su abundancia estacional y actividad horaria, ofrecen una línea de base para el diseño de protocolos de prevención-investigación de estrategias de control. Estos resultados obtenidos a partir de un esfuerzo de captura limitado por razones éticas en el momento de aparición del primer brote urbano de LV en el país, siendo una patología sin estrategia de control efectiva comprobada, necesitarán confirmación posterior mediante capturas con mayores réplicas de sitios/días. Sin embargo, la descripción preliminar de estas tendencias se consideró necesaria, ya que no se contaba con datos previos, y el escenario epidemiológico requirió generar protocolos de investigación operativa para tener antecedentes que permitiesen analizar indicadores y factores de riesgo, como herramientas para estimar tasa de infección, y las variables climáticas y horarias asociadas a la abundancia peridoméstica del vector.Fil: Acardi, Soraya Alejandra. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales. Escuela de Biología; Argentina

Assessment of the role of small mammals in the transmission cycle of tegumentary leishmaniasis and first report of natural infection with Leishmania braziliensis in two sigmodontines in northeastern Argentina

To contribute to the knowledge of the role of small mammals in the transmission cycle of tegumentary leishmaniasis caused by Leishmania braziliensis, we studied the small mammal community and its temporal and spatial association with phlebotominae, as well as small mammal infection by Leishmania spp. by PCR-RFLP analyses in an endemic area of northeastern Argentina. Ten small mammal samplings were conducted (2007–2009, 7506 Sherman trap nights and 422 cage trap nights). In two of these samplings, 16 capture stations each one consisting of a CDC light trap to capture phlebotominae, two to four Sherman traps and two cage traps were placed. We found co-occurrence of phlebotominae and small mammal captures in four stations, which were all the stations with small mammal captures and yielded 97% (2295 specimens, including 21 gravid females) of the total phlebotominae captures, suggesting that small mammals may provide a potential source of blood for phlebotominae females. One Didelphis albiventris and two Rattus rattus were associated with high captures of Nyssomyia whitmani, vector of L. braziliensis in the study area. The PCR-RFLP analyses confirm the presence of L. braziliensis in two sigmodontine small mammals (Akodon sp. and Euryoryzomys russatus) for the first time in Argentina, to our knowledge.Fil: Fernández, María Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Ecología, Genética y Evolución de Buenos Aires. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Ecología, Genética y Evolución de Buenos Aires; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Ecología, Genética y Evolución; Argentina. La Red de Investigación de la Leishmaniasis en Argentina; ArgentinaFil: Fraschina, Jimena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Ecología, Genética y Evolución de Buenos Aires. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Ecología, Genética y Evolución de Buenos Aires; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Ecología, Genética y Evolución; ArgentinaFil: Acardi, Soraya Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. La Red de Investigación de la Leishmaniasis en Argentina; ArgentinaFil: Liotta, Domingo Javier. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. La Red de Investigación de la Leishmaniasis en Argentina; Argentina. Universidad Nacional de Misiones. Facultad de Ciencias Exactas, Químicas y Naturales. Laboratorio de Biología Molecular Aplicada; Argentina. Ministerio de Salud de la Nación; ArgentinaFil: Lestani, Eduardo Ariel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Ministerio de Salud de la Nación; ArgentinaFil: Giuliani, Magalí Gabriela. Ministerio de Salud de la Nación; ArgentinaFil: Busch, Maria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Ecología, Genética y Evolución de Buenos Aires. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Ecología, Genética y Evolución de Buenos Aires; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Ecología, Genética y Evolución; ArgentinaFil: Salomón, Oscar Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. La Red de Investigación de la Leishmaniasis en Argentina; Argentina. Ministerio de Salud de la Nación; Argentin

Lutzomyia longipalpis behavior and control at an urban visceral leishmaniasis focus in Argentina

During the earlier stages of visceral leishmaniasis transmission in Posadas City, Misiones, both the night activity and attraction to humans of Lutzomyia longipalpis were assessed, in order to provide preliminary recommendations. The impact of peridomestic deltamethrin spraying performed by local officials was also evaluated. Although Lu. longipalpis were found in traps located over a dog the entire night, 90% of the females were captured from 20.30h to 1.30h, and only landed on a human when he was at a distance of 1.5 m from the dog. Peridomestic spraying of deltamethrin (25 mg/m²) reduced the sand fly capture up to seven days post-intervention without dispersion in the border of the sprayed areas. These results support the recommendations about time-space focus of the protection measures: first half of the night, in the backyard, with pets and domestic animals kept at least 5 m from humans. The deltamethrin as it was used did not seem very effective in this scenario; neither did the eventual use of bed nets, at least in adults, due to the place/hour of sand fly higher activity. This study strengthens the need for a multidisciplinary approach to develop prevention strategies based both on biological and anthropological studies

Detection of Leishmania infantum in naturally infected Lutzomyia longipalpis (Diptera: Psychodidae: Phlebotominae) and Canis familiaris in Misiones, Argentina: the first report of a PCR-RFLP and sequencing-based confirmation assay

In this study, a genotypification of Leishmaniawas performed using polimerase chain reaction-restriction fragment length polymorfism (PCR-RFLP) and sequencing techniques to identify species of Leishmaniaparasites in phlebotomine sand flies and dogs naturally infected. Between January-February of 2009, CDC light traps were used to collect insect samples from 13 capture sites in the municipality of Posadas, which is located in the province of Misiones of Argentina. Sand flies identified as Lutzomyia longipalpiswere grouped into 28 separate pools for molecular biological analysis. Canine samples were taken from lymph node aspirates of two symptomatic stray animals that had been positively diagnosed with canine visceral leishmaniasis. One vector pool of 10 sand flies (1 out of the 28 pools tested) and both of the canine samples tested positively for Leishmania infantumby PCR and RFLP analysis. PCR products were confirmed by sequencing and showed a maximum identity with L. infantum. Given that infection was detected in one out of the 28 pools and that at least one infected insect was infected, it was possible to infer an infection rate at least of 0.47% for Lu. longipalpisamong the analyzed samples. These results contribute to incriminate Lu. longipalpis as the vector of L. infantumin the municipality of Posadas, where cases of the disease in humans and dogs have been reported since 2005

Leishmania (Viannia) DNA detection by PCR-RFLP and sequencing in free-ranging owl monkeys (Aotus azarai azarai) from Formosa, Argentina

American Cutaneous Leishmaniasis (ACL) is caused by protozoan parasites of the Leishmania genus, and transmitted by females of the Phlebotominae family. The role of wild and domestic hosts in the cycle of Leishmania is still unknown. ACL is endemic in the province of Formosa where Nyssomyia neivai was the most abundant species in several captures and 31 cumulative ACL human cases were reported between 2005 and 2011 in the province. The present report describes the detection, by PCR-RFLP and confirmed by sequencing, of subgenus Leishmania (Viannia) DNA in four free-ranging owl monkeys (Aotus azarai azarai) from Formosa Province. The sequence amplified was the mini-exon gene present in tandem repeats in all species of the Leishmania genus from buffy coat samples. The absence of inhibitors in the samples was checked by a β-globin protocol originally designed to amplify the human β-globin gene. However, other free-ranging primates were found with natural infections of L. (V) braziliensis complex and Leishmania (Viannia) subgenus by parasitological means in America. To the best of our knowledge, there are no published reports on detection of subgenus Leishmania (Viannia) DNA by PCR-RFLP in argentinean free-ranging primates. Additional eco-epidemiological and parasitological studies are necessary to confirm owl monkeys, or any other natural infected mammal species detected by PCR, as a reservoir, incidental host or to propose it as an animal model for research on this topic.Fil: Acardi, Soraya Alejandra. Universidad Nacional de Misiones. Facultad de Ciencias Exactas, Químicas y Naturales. Laboratorio de Biología Molecular Aplicada; Argentina. Ministerio de Salud. Instituto Nacional de Medicina Tropical; ArgentinaFil: Rago, María Virginia. Wildlife Conservation Society; Estados UnidosFil: Liotta, Domingo Javier. Universidad Nacional de Misiones. Facultad de Ciencias Exactas, Químicas y Naturales. Laboratorio de Biología Molecular Aplicada; Argentina. Ministerio de Salud. Instituto Nacional de Medicina Tropical; ArgentinaFil: Fernandez Duque, Eduardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Nordeste. Centro de Ecologia Aplicada del Litoral (i); Argentina. University of Pennsylvania; Estados UnidosFil: Salomon, Oscar Daniel. Instituto Nacional de Medicina Tropical, Misiones; Argentin

Polymerase chain reaction-based assay for the detection and identification of sand fly gregarines in Lutzomyia longipalpis, vector of visceral leishmaniasis

Gregarines that parasitise phlebotomine sand flies belong to the genus Psychodiella and, even though they are highly host-specific, only five species have been described to date. Their most outstanding features include the unique localisation of the oocysts in the accessory glands of the female host, which ensures contamination of the egg surface during oviposition, and the fact that they naturally parasitise the vectors of Leishmania, causal agent of leishmaniasis. The type species, Ps. chagasi, was first described in Lutzomyia longipalpis, vector of visceral leishmaniasis (VL), from Brazil. We recently reported Ps. chagasi sequences in Lu. longipalpis from Posadas (Misiones, Argentina), an endemic VL location where this gregarine had not been previously recorded. In order to analyse the incidence of Ps. chagasi infections in Lu. longipalpis from this location, the aim of this study was to develop a diagnostic assay for sand fly gregarine parasites in Lu. longipalpis. For this, we designed primers using the Ps. chagasi sequences we previously identified and performed an in vitro validation by PCR amplification of the original sand fly samples. Their specificity and sensitivity as diagnostic primers were subsequently confirmed by PCR reactions using total DNA extracted from naturally infected Lu. longipalpis from the same location (Posadas, Argentina).Fil: Caligiuri, Lorena Gisel. Universidad Nacional de La Plata. Centro Regional de Estudios Genómicos; Argentina. Universidad Nacional del Noroeste de la Provincia de Buenos Aires; ArgentinaFil: Acardi, Soraya Alejandra. Universidad Nacional de Misiones. Facultad de Ciencias Exactas, Químicas y Naturales. Laboratorio de Biología Molecular Aplicada; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Santini, Maria Soledad. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud. Centro Nacional de Diagnóstico e Investigaciones Endemo-epidémicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Salomón, Oscar Daniel. Ministerio de Salud. Instituto Nacional de Medicina Tropical; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Mccarthy, Cristina Beryl. Universidad Nacional de La Plata. Centro Regional de Estudios Genómicos; Argentina. Universidad Nacional del Noroeste de la Provincia de Buenos Aires; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin