Effects of differential pulse frequencies of chicken gonadotrophin-releasing hormone-I (cGnRH-I) on laying hen gonadotrope responses in vitro

The aim of this work was to determine the effects of cGnRH I pulse frequencies on FSH and LH release and the changes in features and number of cultured laying hen FSH-cells and LH-cells in vitro. Primary adenohypophyseal cell cultures taken from laying hens were stimulated by four 5 min pulses using 1 or 10 nM cGnRH, administered with interpulses between pulses at 15, 30 or 60 min. Pulse frequencies and dose dependent effects were examined in six separate experiments including two controls. After the last interpulse time, the supernatants were collected and stored at –70º C until the performance of an indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using chicken LH and chicken FSH antisera at 1:1000 and 1:2000 dilutions, respectively. Supernatants were coated in duplicate on the inner surface of Immulon 2 plates and later blocked with the optimal solutions. They were incubated with each antiserum and subsequently with isotype-specific peroxidase-labeled anti-rabbit antibodies. Hydrogen peroxide/o-phenylenediamine was added as substrate/chromogen and the optical density (OD) was determined at 492 nm. The ABC immunocytochemical method was performed to characterize and re-count the gonadotropes employing anti-chicken FSH and anti-chicken LH as primary antibodies. The number of FSH-LH cells was obtained using stereological analysis and the data were statistically processed. The ODs obtained for each anti-hormone were compared with the control groups and with each other. Significant differences were found in number of aggregated-positive LH cells, which decreased with 1 nM cGnRH-I, 15 vs. 30 min pulses, increased with 30 vs. 60 min pulses, and also with 10 nM cGnRH-I, 30 vs. 60 min pulses. Aggregated positive FSH cells, however, did not show significant differences in percentage at any GnRH dose or pulse frequencies, but did show activity at low pulse frequencies of 15 and 30 min. The results suggest that LH cells varied in percentage in a dose dependent manner at higher pulse frequency (15 min) and were dose independent at low pulse frequency (60 min) and showed inactive features; while FSH cell numbers were unaffected showing features of activity at low pulse frequencies. High and moderate pulse frequencies of cGnRH-I (15-30 min) increased the FSH release in dose independent manner without changes in features or percentage of FSH cells. Low pulse frequency (60 min) of cGnRH-I increased LH release dose independently disminished LH cell percentage and showed changes in cells’ features. These results in avian cells showed differences in responses to GnRH pulse frequencies from those reported earlier in mammals.Fil: Soñez, María Cristina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Cátedra de Histología y Embriologías; ArgentinaFil: Soñez, Carlos Alberto. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Agronomía y Veterinaria. Departamento de Anatomía Animal; ArgentinaFil: Mugnaini, María Teresa. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Agronomía y Veterinaria. Departamento de Anatomía Animal; ArgentinaFil: Haedo, Mariana. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología; ArgentinaFil: Romera, Sonia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas; ArgentinaFil: Lombardo, Daniel Marcelo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Cátedra de Histología y Embriologías; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Delhon, Gustavo Alfredo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Cátedra de Histología y Embriologías; Argentin

Determination of Cell Proliferation and Apoptosis in Placentas of Chronically Stressed Rats

Chronic stress during gestation can alter several mechanisms that maintain homeostasis in the placenta. The aim of this study was to determine both effects of chronic stress on the apoptotic and cell proliferation processes in placentas of rats, during the second half of pregnancy and the immunolocalization of apoptotic and proliferating marked nuclei in the different placental zones. Stress by immobilization was applied to rats from the 4th day of pregnancy until their sacrifice on days 12, 17 or 21. Placental sections were immunolabeled with anti-BrdU and TUNEL. The apoptotic index did not present significant differences between control and stress groups. The gestational day influenced significantly on the apoptotic index, which showed a significant decrease on day 17 of gestation and significant increase on day 21. The proliferating index presented significant differences between gestational stages studied, which showed a significant increase at day 17 and then a significant decrease at day 21. Moreover, the stress treatment applied highly influenced on the proliferation index. In conclusion, chronic stress by immobilization did not produce effects on apoptotic process. However it produces an increase in cellular proliferation index in the three gestation days analyzed, which could generate a deleterious environment for the fetus developmentFil: Cots, Debora Soledad. Universidad Nacional de Rio Cuarto. Facultad de Agronomia y Veterinaria. Departamento de Anatomia Animal. Laboratorio de Biología Cecular y Embriologia; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; ArgentinaFil: Rolando, Alicia Nelida. Universidad Nacional de Rio Cuarto. Facultad de Agronomia y Veterinaria. Departamento de Anatomia Animal. Laboratorio de Biología Cecular y Embriologia; ArgentinaFil: Mugnaini, Maria Teresa. Universidad Nacional de Rio Cuarto. Facultad de Agronomia y Veterinaria. Departamento de Anatomia Animal. Laboratorio de Biología Cecular y Embriologia; ArgentinaFil: Soñez, Carlos Alberto. Universidad Nacional de Rio Cuarto. Facultad de Agronomia y Veterinaria. Departamento de Anatomia Animal. Laboratorio de Biología Cecular y Embriologia; ArgentinaFil: Bozzo, Aida Andrea. Universidad Nacional de Rio Cuarto. Facultad de Agronomia y Veterinaria. Departamento de Anatomia Animal. Laboratorio de Biología Cecular y Embriologia; ArgentinaFil: Borghi, Damiana. Universidad Nacional de Rio Cuarto. Facultad de Agronomia y Veterinaria. Departamento de Anatomia Animal. Laboratorio de Biología Cecular y Embriologia; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; ArgentinaFil: Gauana, Hector Fernando. Universidad Nacional de Rio Cuarto. Facultad de Agronomia y Veterinaria. Departamento de Anatomia Animal. Laboratorio de Biología Cecular y Embriologia; ArgentinaFil: Romanini, María Cristina. Universidad Nacional de Rio Cuarto. Facultad de Agronomia y Veterinaria. Departamento de Anatomia Animal. Laboratorio de Biología Cecular y Embriologia; Argentin

Efectos del estrés crónico sobre la proliferación celular en la corteza suprarrenal en ratas preñadas

Chronic stress by immobilization during pregnancy may cause alterations in mechanisms maintaining homeostasis in the adrenal gland. The objective of this study was to quantify cellular proliferation index in the adrenal cortex during pregnancy second half and assess the effects of chronic stress on it. Adrenal cortex proliferation index in stressed rats showed a significant decrease at 12 and 17 days of gestation, while at day 21 it did not show differences with the control treatments. Moreover, proliferation index of reticular zones in control and experimental rats, exhibited a significant reduction in comparison to glomerular and fascicular zones of adrenal cortex during the three gestation days studied. In conclusion, chronic stress by immobilization produces a decrease in cellular proliferation index at 12 and 17 gestation days, which may be related to changes in plasmatic concentrations of corticosterone and prolactin and, to the reduction of specific growth factors. Furthermore, the observed proliferation diminishment in reticular zone regarding the other cortical zones would be consistent with the migration theory of adrenal cellsEl estrés crónico por inmovilización durante la gestación puede provocar alteraciones de los mecanismos que mantienen la homeostasis en la glándula adrenal. El objetivo de este trabajo fue cuantificar el índice de proliferación en la corteza adrenal durante la segunda mitad de la gestación y comprobar los efectos que produce el estrés crónico sobre el mismo. El índice de proliferación en la corteza adrenal de ratas estresadas presentó una disminución significativa a los 12 y 17 días de gestación, mientras que en el día 21 no presentó modificaciones con respecto a sus controles. Por otro lado, el índice de proliferación de la zona reticular en ratas controles y experimentales, presentó una disminución significativa con respecto a las zonas glomerular y fascicular de la corteza adrenal en los tres días de la gestación estudiados. Se puede concluir que el estrés crónico por inmovilización produce disminución del índice de proliferación celular a los 12 y 17 días de la gestación que podría estar en relación con las variaciones de las concentraciones plasmáticas de corticosterona, prolactina, y con la disminución de factores de crecimiento específicos. Asimismo, la disminución de la proliferación en la zona reticular en relación con las otras zonas corticales estaría en concordancia con la teoría de la migración celular adrena

Characterisation of glycoconjugate sugar residues in the vomeronasal organ of the armadillo Chaetophractus villosus (Mammalia, xenarthra)

Conventional carbohydrate histochemistry and the binding patterns of 21 lectins were analysed to characterise the glycoconjugate content in the components of the vomeronasal organ of the armadillo Chaetophractus villosus. The mucomicrovillous complex of the sensory epithelium bound most of the lectins studied. No reaction was observed with Con A, PSA, S‐Con A and SBA, and the sustentacular cells were stained with UEA‐I, DSL, LEL, STL and Con A. The vomeronasal receptor neurons were labelled with S‐WGA, WGA, PNA, UEA‐I, STL, Con A, S‐Con A, ECL and RCA120. The basal cell layer reacted with S‐WGA, WGA, LCA, UEA‐I, DSL, LEL, STL, Con A, JAC and VVA. The nonsensory epithelium exhibited a differential staining in relation to the different components. The mucociliary complex stained with ECL, DBA, JAC, RCA120, STL, LCA, PHA‐E, PHA‐L, LEL, BSL‐I and VVA. However, SJA and UEA‐I stained the mucus complex lining a subpopulation of columnar cells. The cytoplasm and cell membranes of columnar cells was labelled with DBA, DSL and LCA. The apical region of these cells exhibited moderate reactivity with LEL and SJA. None of the lectins bound specifically to secretory granules of the nonsecretory cells. Basal cells of the nonsensory epithelium were labelled with DSL, LEL, LCA, BSL‐I and STL. The vomeronasal glands showed a positive reaction with WGA, DSL, LEL, LCA, DBA, PNA, RCA120 and SBA. Subpopulations of acinar cells were observed with ECL, S‐WGA, Con A, S‐Con A and DBA. PNA and RCA120 stained the cells lining the glandular ducts. In comparison with previous results obtained in the olfactory mucosa of the same group of armadillos, the carbohydrate composition of the vomeronasal organ sensory epithelium differed from the olfactory sensory epithelium. This is probably related to the different nature of molecules involved in the perireceptor processes.Fil: Carmanchahi, Pablo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Ferrari, Carina Cintia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Aldana Marcos, Hernan Javier. Universidad de Morón; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Affanni, Jorge Mario. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Morón; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Soñez, Carlos Alberto. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Agronomía y Veterinaria; ArgentinaFil: Paz, Dante Agustin. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentin

Chronic stress and its effects on adrenal cortex apoptosis in pregnant rats

The model of chronic intermittent stress by immobilization during pregnancy may produce alterations in the mechanisms that maintain adrenal gland homeostasis. In earlier investigations using this model, signifi cant variations in plasma prolactin and corticosterone levels, and adrenal gland weights were observed. We hypothesized that chronic stress causes changes in apoptosis in the adrenal glands of pregnant rats. We identifi ed and quantifi ed apoptotic cells in the adrenal cortex and examined their ultrastructural characteristics using transmission electron microscopy. Adrenal glands of pregnant rats at gestation days 12, 17 and 21 were studied for control and experimental (stressed) rats. Immunolabelling techniques, stereological analysis and image quantifi cation of adrenal gland sections were combined to determine differences in apoptosis in the different cell populations of the adrenal cortex. The apoptotic index of the experimental rats showed a signifi cant reduction at gestation day 17, while at days 12 and 21 there were no differences from controls. Moreover, the apoptotic index of the reticular zones in control and experimental animals showed a signifi cant increase compared to the glomerular and fascicular zones at the three gestation times studied. Chronic stress by immobilization reduced the caspase-dependent apoptotic index at gestation day 17, which may be related to variations in plasma concentrations of estrogens and prolactin.Fil: Bozzo, Aida Andrea. Universidad Nacional de Rio Cuarto. Facultad de Agronomia y Veterinaria. Departamento de Anatomia Animal; ArgentinaFil: Soñez, Carlos Alberto. Universidad Nacional de Rio Cuarto. Facultad de Agronomia y Veterinaria. Departamento de Anatomia Animal; ArgentinaFil: Monedero Cobeta, I.. Universidad Autónoma de Madrid; EspañaFil: Rolando, Alicia Nelida. Universidad Nacional de Rio Cuarto. Facultad de Agronomia y Veterinaria. Departamento de Anatomia Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Romanini, María Cristina. Universidad Nacional de Rio Cuarto. Facultad de Agronomia y Veterinaria. Departamento de Anatomia Animal; ArgentinaFil: Cots, Debora Soledad. Universidad Nacional de Rio Cuarto. Facultad de Agronomia y Veterinaria. Departamento de Anatomia Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Lazarte, M. A.. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Agronomía y Veterinaria; ArgentinaFil: Gauna, Hector Fernando. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas Fisicoquímicas y Naturales. Departamento de Biología Molecular; ArgentinaFil: Mugnaini, M. Universidad Nacional de Rio Cuarto. Facultad de Agronomia y Veterinaria. Departamento de Anatomia Animal; Argentin

Efectos metabólicos, cardiocirculatorios y prenatales del estrés agudo y crónico.

Se proponen tres líneas de Proyecto: 1) Efectos del estrés crónico intermitente (180 días) sobre el metabolismo y la actividad cardiovascular. En este Proyecto se dará continuidad a la línea de trabajos relativos a los efectos del estrés agudo y crónico sobre el estrés oxidativo, el metabolismo lipídico, las lipoproteínas plasmáticas; y la aterosclerosis (Bianco, M. et al. 2008; Scoppa, H. et al, 2005 y 2006). La retención de sodio y agua demostrada en nuestro laboratorio podría explicar la hipertensión generada por el estrés (Bensi, N. et al, 1997; Bertuzzi, M. et al. 2003; Niebylski, A. et al. 2008). Es en esta búsqueda que se investigan los mecanismos endócrinos y/o nerviosos involucrados en cada caso. 2) Efectos del estrés prenatal sobre la función reproductiva de la madre gestante y sus crías. A partir de los resultados previos como alteraciones morfofuncionales de la hipofisis materna, de la migración de células GnRH de las crías y sus probables impactos funcionales y conductuales, se continuará con la evaluación placentaria de las hembras gestantes y los cambios de la función adrenal y adenohipofisiaria (Mugnaíni, MT, et al. 2006; Bozzo A. et al, 2006; Romanini MC. et al, 2007 y Soñez, C. Tesis Doctorales). 3) El estrés prenatal produce alteraciones neurológicas, conductuales y reproductivas en el hombre y animales; además afecta la producción en los animales domésticos, fundamentalmente cuando son criados en condiciones intensivas, bajo las cuales tienen mayor exposición a agentes infecciosos, produciendo grandes pérdidas económicas. En nuestro laboratorio hemos hallado que la aplicación de estrés por inmovilización en plancha (IMO) en las ratas preñadas produce en la cría estresada prenatalmente (EP) al estado adulto, hiperactividad del eje HHA, en condiciones basales y habituación cuando el animal es sometido, al mismo estrés. Algunos estudios muestran que la actividad del eje HHA podría producir alteraciones en algunos parametros inmunes de la crías adultas EP. El objetivo de este trabajo es investigar el efecto del estrés agudo, por nado forzado, en crías adultas EP por IMO, sobre la actividad del eje HHA y su relación con las células efectoras de la inmunidad. Para ello se utilizaron ratas Wistar, macho, de 90 días de edad, EP y sus controles no estresados (C). Se determinará la concentración de COR plasmática en respuesta a la aplicación de un estrés agudo distinto al aplicado <i>in utero</i> y su relación con la variación de los valores porcentuales de los leucocitos sanguíneos y la proliferación de linfocitos T.adrenal y adenohipofisiaria (Mugnaíni, MT,et al. 2006