EFEITO DE ÁCIDO SOBRE O CRESCIMENTO E SOBREVIVÊNCIA DE Salmonella enterica ENTERITIDIS ISOLADA DE CARCAÇA DE SUÍNO

Considerando que a tolerância ao ácido é um importante fator de virulência relacionado à sobrevivência ao baixo pH da secreção gástrica em patógenos veiculados por alimentos e o expressivo aumento da prevalência de Salmonella sorovar Enteritidis nos últimos anos, como agente etiológico de salmonelose humana, este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito de ácido sobre o crescimento e sobrevivência de Salmonella sorovar Enteritidis. O crescimento de S. Enteritidis CCS3, isolada de carcaça suína, e S. Enteritidis ATCC 13076 foi determinado em Caldo Tripticaseína e Soja (TSB) com valores de pH que variaram de 3,5 a 7,2. A sobrevivência foi avaliada no mesmo meio com pH entre 1,5 e 3,5. Avaliou-se também a tolerância ao Fluido Gástrico Simulado (FGS) dessas bactérias. S. Enteritidis CCS3 apresentou valores maiores de velocidade específica de crescimento em TSB acidificado e sobreviveu por mais tempo em pH inferior a 3,5 do que S. Enteritidis ATCC 13076. As células de S. Enteritidis CCS3 apresentaram tolerância à exposição ao FGS por até uma hora. Contrariamente, células de S. Enteritidis ATCC 13076 perderam a culturabilidade após 10 minutos de desafio ao FGS

Filogenia molecular e caracterização morfológica do agente etiológico da podridão azeda em frutas e hortaliças no Brasil

Sour rot represents a serious problem in the field and postharvest of fruits and vegetables by limiting production and marketing. Geotrichum candidum has been reported as the main species causing this disease. In this study, 165 fungal isolates causing postharvest rot in different states of Brazil were characterized on the basis of molecular phylogeny and morphology. For molecular characterization, the genomic DNA was extracted, the D1/D2 domain of large subunit rRNA (LSU) gene was amplified and sequenced. The phylogenetic analyses revealed that 129 isolates of this study grouped with the species Geotrichum candidum, while other isolates did not cluster to any known species, probably representing new species. Moreover, other fungal genera, i.e. Hyphopichia, Magnusiomyces, Saccharomycopsis, Trichosporon and Zygoascus were identified associated with the sour rot disease on fruits and vegetables in Brazil. All species tested, including the putative new species, were pathogenic when artificially inoculated on healthy tomato fruit types, Long-self life, Italian tomato and sweet grape, as well as potato tubers and red mombin fruits. In conclusion, although Geotrichum candidum has been related as the only species causing sour rot, other species of Geotrichum and other genera are associated with sour rot on fruits and vegetables in Brazil, which demonstrates a diversity of fungi associated with this disease. Keywords: Dipodascaceae. Geotrichum . Postharvest disease. Rot disease.A podridão azeda representa um problema sério no campo e na pós-colheita de frutas e hortaliças, limitando a produção e a comercialização. Geotrichum candidum tem sido relatado como a principal espécie causando esta doença. Neste estudo, 165 isolados causadores de podridão pós-colheita em diferentes estados do Brasil foram caracterizados com base na filogenia molecular e morfologia. Para caracterização molecular, o DNA genômico foi extraído, e o domínio D1/D2 do gene rRNA da subunidade maior (LSU) foi amplificado e sequenciado. As análises filogenéticas baseadas no domínio D1/D2 revelaram que 129 isolados pertencem a espécie Geotrichum candidum, enquanto outros isolados não agruparam com nenhuma espécie conhecida, provavelmente representando novas espécies. Além disso, outros gêneros, isto é, Hyphopichia, Magnusiomyces, Saccharomycopsis, Trichosporon e Zygoascus, foram identificados associados a podridão azeda em frutas e hortaliças no Brasil. Todas as espécies testadas, incluindo as possíveis espécies novas, foram patogênicas quando inoculadas artificialmente em frutos sadios de tomate do tipo longa vida, italiano e sweet grape, bem como em tubérculos de batata e frutos de seriguela. Em conclusão, embora Geotrichum candidum tenha sido relatado como a única espécie a causar podridão azeda, outras espécies de Geotrichum e outros gêneros estão associados à podridão azeda em frutas e hortaliças no Brasil, o que demonstra uma diversidade de fungos associados a essa doença. Palavras-chave: Dipodascaceae. Geotrichum. Patologia pós-colheita. Podridões

Genetic diversity of isolated Geotrichum spp. associated with rots post-harvest in fruit and vegetables in Brazil

A podridão azeda causada pelo fungo Geotrichum é uma doença pós- colheita que ocorre em frutas e hortaliças. Visando caracterizar a diversidade genética de Geotrichum sp. para a escolha de estratégias de controle eficientes, este trabalho tem o objetivo de avaliar diferentes marcadores ISSRs e IRAPs para determinação da diversidade intra específica de Geotrichum. No total, 62 isolados de locais geograficamente distintos e diferentes hospedeiros foram utilizados neste estudo. Para a análise de diversidade genética, o DNA genômico foi extraído a partir do micélio. A região parcial dos genes que compreende o ISSR e transposon foram amplificadas usando sete oligonucleotídeos. A partir dos perfis de bandas foi construída uma matriz binária a qual foi adicionada ao software PAST3 onde o índice de similaridade de Jaccard foi calculado para cada combinação de duas amostras. Os dendrogramas foram construídos com base na matriz de similaridade de acordo com o método das médias aritméticas de grupos não ponderados (UPGMA- unweighted pair group method with arithmetic averages). Em todos marcadores moleculares analisados foram encontrados pelo menos um clado representado por dois ou mais isolados que apresentaram perfis idênticos. Existe uma tendência de isolados de um mesmo hospedeiro ou região geográfica serem semelhantes quando foi utilizado diferentes marcadores moleculares. Não houve semelhança entre os isolados quando os oligonucleotídeos IRAPs e microssatélites foram comparados pois o número de clados formados pelos marcadores IRAPS foram menores. Geotrichum possui grande diversidade genética e, portanto, pode permitir a este patógeno uma melhor adaptabilidade às condições ambientais e a diferentes hospedeiros.The sour rot caused by fungus Geotrichum genus is a disease that occurs in fruits and vegetables. In order to characterize the genetic diversity of Geotrichum sp. for the choice of efficient control strategies, this study aims to evaluate different ISSRs and IRAPs markers for determination of intraspecific diversity of Geotrichum. A total of 62 isolates from geographically different locations and different hosts were used in this study. For the analysis of genetic diversity, genomic DNA was extracted from the mycelium. The partial region of the genes comprising the ISSR and transposon were amplified using seven primers. From the bands profiles was built a binary matrix which were added to PAST3 software where the Jaccard similarity index was calculated for each combination of two samples. The dendrograms were constructed based on the similarity matrix according to the method of arithmetic averages of unweighted groups (UPGMA- unweighted pair group method with arithmetic averages). In all molecular markers analyzed were found at least one clade represented by two or more isolates that showed identical profiles. Strains not grouped according to the town which were isolated. There is a tendency of isolates from the same host or geographic region are similar when we used different molecular markers. There were not similarities between the isolated when IRAPs and microsatellite primer were compared because the number of clades formed by IRAPS markers were lower. Geotrichum has high genetic diversity and therefore may allow the pathogen better adaptability to environmental conditions and the different hosts.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológic

Efeito de ácido sobre o crescimento e sobrevivência de salmonella enterica enteritidis isolada de carcaça de suíno

Considerando que a tolerância ao ácido é um importante fator de virulência relacionado à sobrevivência ao baixo pH da secreção gástrica em patógenos veiculados por alimentos e o expressivo aumento da prevalência de Salmonella sorovar Enteritidis nos últimos anos, como agente etiológico de salmonelose humana, este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito de ácido sobre o crescimento e sobrevivência de Salmonella sorovar Enteritidis. O crescimento de S. Enteritidis CCS3, isolada de carcaça suína, e S. Enteritidis ATCC 13076 foi determinado em Caldo Tripticaseína e Soja (TSB) com valores de pH que variaram de 3,5 a 7,2. A sobrevivência foi avaliada no mesmo meio com pH entre 1,5 e 3,5. Avaliou-se também a tolerância ao Fluido Gástrico Simulado (FGS) dessas bactérias. S. Enteritidis CCS3 apresentou valores maiores de velocidade específica de crescimento em TSB acidificado e sobreviveu por mais tempo em pH inferior a 3,5 do que S. Enteritidis ATCC 13076. As células de S. Enteritidis CCS3 apresentaram tolerância à exposição ao FGS por até uma hora. Contrariamente, células de S. Enteritidis ATCC 13076 perderam a culturabilidade após 10 minutos de desafio ao FGS

Acid and low temperature treatments on Salmonella Enteritidis inoculated in pork and its subsequent survival in simulated gastric fluid

ABSTRACT: The objective of this study was to evaluate the acid resistance of Salmonella enterica serovar Enteritidis (S. Enteritidis) in stored pork and in simulated gastric fluid (SGF). A culture of S. Enteritidis was subjected to acid treatment prior to inoculation into pork, stored under refrigeration at frozen temperatures and exposed to SGF. The S. Enteritidis CCS3 and ATCC 13076 strains previously subjected to acid treatment (at pH 4.0-5.0) were inoculated in pork and stored at 4°C and -18°C. Storage at 4ºC did not affect the populations of both S. Enteritidis strains. After 84 days at -18°C, the mean population of both CCS3 and ATCC strains were reduced by 0.8 and 1.5 log cycles, respectively. Prior acid treatment did not enhance the survival of both strains at low temperatures. After acid treatment and low temperature storage, S. Enteritidis ATCC 13076 lost culturability after being exposed to SGF for 10 minutes. In contrast, S. Enteritidis CCS3 was tolerant until three hours of SGF exposure. S. Enteritidis CCS3 submitted to pH 4.0 was more tolerant to SGF exposure than when submitted to pH 4.5, 5.0 and without acid treatment. Therefore, this study indicates that exposure to an acidic and cold environment during processing enhanced the ability of S. Enteritidis to survive in the gastric environment of the human stomach, possibly increasing the risk of a Salmonella infection after consumption of pork