ESTUDIO PRELIMINAR DE COLECCIÓN DE SEMEN EN OSO DE ANTEOJOS (Tremarctos ornatus)

Semen was collected in a Spectacled Bear (Tremarctos ornatus) reared in captivity using the electroejaculation technique. Four series of 6 volt discharges by 15 seconds each plus manual stimulation were carried out. An effective penis erection and small volume of ejaculate was obtained in the last series of electrical stimulus. Seminal motility was 50%. Further studies are required to optimize the use of the electroejaculator in order to obtain higher volumes and better semen quality.Semen was collected in a Spectacled Bear (Tremarctos ornatus) reared in captivity using the electroejaculation technique. Four series of 6 volt discharges by 15 seconds each plus manual stimulation were carried out. An effective penis erection and small volume of ejaculate was obtained in the last series of electrical stimulus. Seminal motility was 50%. Further studies are required to optimize the use of the electroejaculator in order to obtain higher volumes and better semen quality

EQUINE CHORIONIC GONADOTROPHIN (ECG) STIMULATION DURING THE LUTEAL AND NON-LUTEAL PHASES ON OVARIAN RESPONSE AND EMBRYO QUALITY IN LLAMAS

Se evaluó el efecto del tratamiento superovulatorio en las dos fases del ciclo ovárico sobre la respuesta folicular y la calidad embrionaria en 45 llamas hembras adultas. Se incluyeron en el estudio aquellos animales que a la ecografía presentaron un folículo preovulatorio >7 mm. Los animales se distribuyeron en tres grupos: T0 (no estimulado), T1 (tratamiento superovulatorio en fase no luteal) y T2 (tratamiento superovulatorio en fase luteal). Los animales de T1 y T2 recibieron 1 ml de LH (día 0) para sincronizar la onda folicular y 1000 UI de eCG (día 3) como tratamiento superovulatorio. Se utilizaron esponjas vaginales impregnadas con progesterona entre el día 3 y 7 para simular la fase luteal en el T2. La inducción de la ovulación se hizo mediante monta natural y aplicación de 1 ml de GnRH (día 8). La colección y evaluación de embriones se realizó 7 días post cópula (día 15) en T1 y T2. En el grupo T0 se realizó monta natural y aplicación de GnRH y 7 días después se realizó la colección de embriones. El número de folículos preovulatorios fue mayor en T1 (11.07 ± 7.53) y T2 (6.13 ± 7.11) con respecto a T0 (1.07 ± 0.26) (p<0.05). El número de cuerpos lúteos fue mayor en T1 (9.27 ± 3.37) con respecto a T0 (1.07 ± 0.26) y T2 (6.47 ± 4.29) (p<0.05). Asimismo, el número de embriones recuperados fue mayor en T1 (3.47 ± 4.26) con respecto a T0 (0.33 ± 0.48) y T2 (1.33 ± 2.53). Los resultados permiten concluir que la aplicación del tratamiento superovulatorio durante una fase no luteal permiten obtener una mejor respuesta ovárica y embrionaria en comparación con tratamientos superovulatorios aplicados en fase luteal.The effect of superovulatory treatment during the two phases of the ovarian cycleon follicular growth and embryo quality was evaluated in 45 sexually adult llamas. Animals bearing a >7 mm follicle, observed by ultrasonography, were selected and allocated into 3 groups: T0 (non-stimulated), T1 (superovulatory treatment during the non luteal phase), and T2 (superovulatory treatment during the luteal phase). Animals in groups T1 and T2 received 1 ml of LH (day 0) for synchronization of the follicular wave and 1000 IU of eCG (day 3) as superovulatory treatment. Vaginal sponges impregnated with progesterone were used on days 3 to 7 in T2 to simulate the luteal phase. The induction of the ovulation (day 8) was done through natural mating and the application of GnRH (1 ml). Embryo recovery was done 7 days after natural mating (day 15) on T1 and T2. Similarly, embryo recovery was done 7 days after natural mating and application of GnRH in T0. The number of preovulatory follicles was larger in T1 (11.07 ± 7.53) and T2 (6.13 ± 7.11) than in T0 (1.07 ± 0.26) (p<0.05). The number of corpora lutea was larger in T1 (9.27 ± 3.37) than in T0 (1.07 ± 0.26) and T2 (6.47 ± 4.29) (p<0.05). The number of recovered embryos waslarger in T1 (3.47 ± 4.26) than in T0 (0.33 ± 0.48) and T2 (1.33 ± 2.53). The results showed that superovulatory treatment during the non luteal phase had a better response than superovulatory treatment during the luteal phase

APPLICATION OF THE NON-SURGICAL BOVINE EMBRYO TRANSFER TECHNIQUE IN A DAIRY FARMIN THE LIMA MILKSHED

El estudio tuvo como objetivo evaluar la respuesta superovulatoria y la tasa de concepción al aplicar la técnica no quirúrgica de transferencia de embriones en vacas lecheras de un establo comercial de la cuenca de Lima. Se utilizaron ocho vacas donadoras, distribuidas en dos años de trabajo. Estas fueron sincronizadas con estrógenos, progestágenos y agentes luteolíticos, superovuladas con 400 mg de FSHe inseminadas con dos dosis de semen congelado. Se utilizaron 28 receptoras, también distribuidas en dos años. En el primer año se sincronizaron con el protocolo Pre-synchy en el segundo año con el protocolo CIDR-synch. Se hizo coincidir el día esperado del celo de las donadoras y receptoras. Los embriones fueron recolectados en el día siete del servicio, se clasificaron y se transfirieron de inmediato a las receptoras. Eldiagnóstico de gestación se realizó mediante ultrasonografía transrectal al día 28 postransferencia. Se obtuvieron 23 embriones, siendo la tasa de recuperación de 36.5% con gran variación entre años. Se transfirieron 17 embriones obteniéndose una tasa de concepción de 40.0%, con gran variación entre años (22.2 y 66.7%). La variada respuesta individual de las donadoras afectó la tasa de recuperación de embriones y el protocolo de sincronización afectó la tasa de concepción.The study aimed to evaluate the superovulatory response and conception rate byapplying the technique of non-surgical embryo transfer in dairy cows of a commercialfarm in the Lima milkshed. Eight donor cows were used and distributed in two workingyears. Donors were synchronized with estrogens, progestagens and luteolitic agents,superovulated with 400 mg of FSH, and inseminated with two doses of frozen semen. Therecipient animals (n=28) were also distributed in two years. The Pre-synch protocol wasused for estrus synchronization in the first year and the CIDR-synch protocol in thesecond year. The expected day of heat presentation coincided for both donors andrecipients. The recovery of embryos was done seven days post service where embryoswere classified and immediately transferred. Pregnancy diagnosis by transrectalultrasonography was done at day 28 post transfer. A total of 23 embryos were obtained.The embryo recovery rate was 36.5% with high variation between years. Seventeenembryos were transferred and the conception rate was 40% with high variation betweenyears (22.2 and 66.7%). The varied individual response of the donors affected the embryorecovery rate and the synchronization protocol affected conception rate

Flow cytometry evaluation of DNA integrity of alpaca sperm after cryopreservation with analogues of superoxide dismutase

Se evaluó la estabilidad del ADN en espermatozoides de alpaca mediante citometría de flujo en muestras congeladas con antioxidantes análogos de superóxido dismutasa (Tempo y Tempol). Doce muestras de semen de alpaca fueron congeladas utilizando un dilutor en base a leche descremada, fructosa, yema de huevo y etilenglicol. Cada muestra fue dividida en tres porciones: grupo control, grupo Tempo (1 mM) y grupo Tempol (1 mM). Los antioxidantes fueron agregados al dilutor durante la curva de enfriamiento (10 °C). Las muestras fueron descongeladas y fijadas en una solución de formaldehido al 2% y permeabilizadas utilizando una solución de Triton X-100 al 0.8%. La integridad del ADN espermático se evaluó con la técnica de TUNEL y una sonda fluorescente para determinar la viabilidad celular (Ioduro de propidio [PI]). Los espermatozoides marcados con la sonda del TUNEL y PI fueron considerados células permeabilizadas con el ADN fragmentado. Las muestras fueron analizadas mediante citometría de flujo utilizando un láser de 488 nm, contando un mínimo de 10 000 células por muestra y utilizando microscopía de fluorescencia. La frecuencia de espermatozoides con ADN fragmentado en el grupo control (38.8 ± 16.2%) fue significativamente mayor (p<0.05) al grupo Tempol (16.7 ± 8.4%), mientras que los resultados del grupo Tempo (25.4 ± 5.8%) fueron estadísticamente similares a los grupos Control y Tempol. Se concluye que la adición del análogo de superóxido dismutasa, Tempol (1 mM), durante el proceso de criopreservación de espermatozoides de alpaca puede prevenir parcialmente el daño al ADN espermático.DNA integrity in alpaca spermatozoa was evaluated by flow cytometric analysis in sperm cryopreserved using antioxidants analogues of superoxide dismutase (Tempo and Tempol). Twelve alpaca semen samples were frozen using an extender based on skim milk, fructose, egg yolk, and ethylene glicol. Each sample was divided into three aliquots: Control group, Tempo group (1 mM), and Tempol group (1 mM). Antioxidants were added during cooling at 10 °C. After thawing, samples were fixed using 2% formaldehyde solution and permeabilizated using 0.8% Triton X-100 solution. TUNEL assay and Iodure propidium (PI) were used for evaluation of DNA integrity and cell permeability. Spermatozoa labeled with TUNEL and PI was classified as cells with DNA damaged. Samples were analyzed by flow cytometric using a 488 nm laser, counting at least 10 000 cells per sample, and by epifluorescene microscopy. Frequency of DNA damaged sperm in control group (38.8 ± 16.2%) was significantly higher (p<0.05) than in the Tempol group (16.7 ± 8.4%), whereas the results in the Tempo group (25.4 ± 5.8) were similar to the control and Tempol groups. It was concluded that the addition of superoxide dismutase analogue Tempol (1 mM) during cooling (10 °C) in alpaca sperm cryopreservation partially prevents sperm DNA damage

Effect of extenders based on Tris, Tes and skim milk on cryopreservation of epididymal alpaca sperm

El estudio tuvo por objetivo evaluar el efecto de tres dilutores (Tris, Tes y leche descremada) en la criopreservación de espermatozoides obtenidos del epidídimo de alpaca. Previamente se determinó el efecto del tiempo entre el beneficio/castración y la recuperación de los espermatozoides del epidídimo. Se utilizaron 24 testículos de alpacas para la obtención de los espermatozoides directamente del epidídimo en una solución fisiológica buferada (PBS). La recuperación de espermatozoides se realizó a las 0, 35, 48 y 72 horas (6 testículos por grupo) y se evaluó la motilidad, concentración espermática e integridad funcional de membrana. Los espermatozoides recuperados a partir de 35 horas post beneficio/castración no fueron aptos para ser congelados. Las muestras recuperadas a las 0 horas fueron diluidas con Tris, Tes y leche descremada, enfriadas desde 35 a 5 oC en 90 minutos, envasadas en pajillas de 0.25 ml y congeladas en nitrógeno líquido. Se evaluó la motilidad, integridad funcional de membrana y vitalidad/integridad acrosomal en las muestras descongeladas. La motilidad fue de 14.0, 8.6 y 17.0% en los grupos Tris, Tes y leche descremada, respectivamente, donde el grupo leche descremada fue significativamente mejor que el grupo Tes (p<0.05). Los porcentajes de integridad funcional de membrana y vitalidad/integridad acrosomal fueron similares entre los tres grupos. Se concluye que los tres dilutores brindan efectos similares para la criopreservación de espermatozoides epididimarios de alpaca.The objective of this study was to evaluate the effect of three semen extenders (skim milk, Tris, and Tes) on cryopreservation of epididymal alpaca sperm. Previously, the effect of timespan since slaughtering or castration to the recovery of epididymal sperm was evaluated. Twenty-four alpaca testicles were used to obtain sperm from the epididymis in a buffered saline solution (PBS). The recovery of spermatozoa was performed at 0, 35, 48, and 72 hours (6 testes per group) after slaughtering or castration. Sperm motility, concentration, and sperm membrane functional integrity were analyzed. Sperm recovered after 35 hours was not usable for cryopreservation. Sperm samples recovered at 0 hours were subjected to the process of freezing. Samples were diluted with skim milk, Tris, and Tes, cooled from 35 to 5 °C in 90 minutes, packed into 0.25 ml straws and frozen in liquid nitrogen. After thawing, straws were evaluated by motility, sperm membrane functional integrity and vitality/acrosome integrity. Motility was 17.0, 14.0, and 8.6% on skim milk, Tris and Tes groups respectively, where the skim milk group was significantly better than the Tes (p<0.05). Percentages of sperm membrane functional integrity and vitality/acrosomal integrity were similar among the three extenders. It was concluded that all three extenders provided similar effects for the cryopreservation of epididymal alpaca spermatozoa

Determinación de la Concentración Óptima de Tres Crioprotectores para la Criopreservación de Espermatozoides Epididimarios de Alpaca

The aim of this study was to determine the optimal concentration of glycerol, ethylene glycol and dimethyl sulfoxide (DMSO) in the cryopreservation of epididymal spermatozoa of alpaca. The effect of different concentrations of glycerol, ethylene glycol and DMSO: T1 (0 M), T2 (0.25 M), T3 (0.5 M), T4 (0.75 M), T5 (1 M), T6 (1.25 M), T7 (1.5 M) and T8 (1.75 M) was evaluated. A polynomial regression model was used to determine the best concentration of each cryoprotectant, resulting 1.16, 1.02 and 0.9 M the optimal concentrations for glycerol, ethylene glycol and DMSO respectively. In Experiment 2, the effect of the optimal concentrations between glycerol, ethylene glycol and DMSO on motility, plasma membrane integrity, and acrosomal viability and integrity in alpaca epididymal spermatozoa were analyzed. The results showed a mean of 35.8, 51.8 and 38.3% for DMSO and 30.8, 45.0 and 33.8% for glycerol for motility, plasma membrane integrity and acrosome viability and integrity, respectively, and without significant differences between these cryoprotectants. However, the results were significantly better (p<0.05) than for ethylene glycol (1.02 M). It is concluded that the concentrations of 0.9 M DMSO and 1.16 M glycerol better preserved the functional characteristics of alpaca epididymal spermatozoa as compared to ethylene glycol (1.02 M).El objetivo del presente estudio fue determinar la concentración óptima de glicerol, etilenglicol y dimetil sulfóxido (DMSO) en la criopreservación de espermatozoides epididimarios de alpaca. En el experimento 1 se evaluó el efecto de ocho concentraciones de glicerol, etilenglicol y DMSO: T1 (0 M), T2 (0.25 M), T3 (0.5 M), T4 (0.75 M), T5 (1 M), T6 (1.25 M), T7 (1.5 M) y T8 (1.75 M). Se utilizó un modelo de regresión polinomial quíntuple para determinar la mejor concentración de cada crioprotector, resultando concentraciones óptimas para glicerol, etilenglicol y DMSO de 1.16, 1.02 y 0.9 M, respectivamente. En el Experimento 2, se comparó el efecto de las concentraciones óptimas entre glicerol, etilenglicol y DMSO sobre la motilidad, integridad de membrana plasmática y viabilidad e integridad acrosomal en los espermatozoides epididimarios de alpaca. Los resultados mostraron promedios de 35.8, 51.8 y 38.3% para DMSO (0.9 M) y de de 30.8, 45.0 y 33.8% para glicerol para las variables motilidad, integridad de membrana plasmática y viabilidad e integridad acrosomal, respectivamente, y sin diferencias significativas entre estos crioprotectores. Sin embargo, fueron significativamente mejores (p<0.05) que para etilenglicol (1.02 M). Se concluye que las concentraciones de 0.9 M de DMSO y 1.16 M de glicerol conservaron mejor las características funcionales de los espermatozoides epididimarios de alpaca en comparación con etilenglicol (1.02 M)

Effect of extenders based on tris, tes and skim milk on cryopreservation of epididymalalpaca sperm [Efecto de dilutores en base a tris, tes y leche descremada en la criopreservaciÓn de espermatozoides obtenidos del epidÍdimo de alpaca]

Se agradece al Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONCYTEC) por el financiamiento del presente trabajo a través del Proyecto PROCYT N.°157-2006 «Desarrollo de un protocolo de criopreservación de semen de alpacas mediante el estudio de diferentes dilutores y agentes crioprotectores sobre la funcionalidad espermática».Consejo Nacional de Ciencia, Tecnología e Innovación Tecnológica - Concyte