Light-emitting diode (LED) photobiomodulation exerts anti-inflammatory action in murine thioglycolate-elicited macrophages stimulated by Bothrops jararacussu venom and by isolated PLA2s

Although the treatment currently recommended for snakebite accidents is serum therapy using antivenom, a need for adjunctive therapy associated with serum therapy for treating the local effects caused by snakebites is an effort of the WHO to reduce local signals and symptoms. Photobiomodulation with laser or LED therapy is one of the primary examples of adjuvant therapy to serum therapy to lessen these local effects caused by snakebite envenoming. For this purpose, the project aims to study the action of photobiomodulation with LED therapy in isolated thioglycolate-elicited macrophages stimulated with Bothrops jararacussu venom (BjV) and isolated bothropstoxins BthTX-I and BthTX-II focusing on cell dead mechanism such as necrosis and apoptosis, mitochondrial membrane potential, and cytokines [Interleukin (IL)-1β, IL-10, IL-6], and [tumor necrosis factor (TNF)-α] and lipid mediator [prostaglandin (PG)E2] liberation. Briefly, thioglycollate-elicited macrophages were harvested from Swiss male mice incubated with BjV or BthTXs irradiated or not with LED, and the following parameters were analyzed: necrosis and apoptosis, mitochondrial membrane potential, cytokines, and lipid mediator liberation. Herein, results showed that LED therapy was able to decrease necrosis cell death, caspase-3 activity, and TNF-α liberation. In addition, LED therapy induces mitochondrial membrane potential and modulates gene expression of lipid mediators. In conclusion, the data of this study support the use of phototherapy as an adjuvant therapeutical approach in combination with serum therapy to mitigate the local effects resulting from snakebite envenoming

Activation of J77A.1 macrophages by three phospholipases A2 isolated from bothrops atrox snake venom

Submitted by Claudete Queiroz ([email protected]) on 2016-05-03T17:00:14Z No. of bitstreams: 1 Activation of J77A.1 Macrophages by Three Phospholipases A2 Isolated from Bothrops atrox Snake Venom.pdf: 2090853 bytes, checksum: 0669d064c65a39c61c661542c067ee9b (MD5)Approved for entry into archive by EMERSON LEAL ([email protected]) on 2016-05-10T14:32:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Activation of J77A.1 Macrophages by Three Phospholipases A2 Isolated from Bothrops atrox Snake Venom.pdf: 2090853 bytes, checksum: 0669d064c65a39c61c661542c067ee9b (MD5)Made available in DSpace on 2016-05-10T14:32:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Activation of J77A.1 Macrophages by Three Phospholipases A2 Isolated from Bothrops atrox Snake Venom.pdf: 2090853 bytes, checksum: 0669d064c65a39c61c661542c067ee9b (MD5) Previous issue date: 2014Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunofarmacologia Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Universidade Federal de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunofarmacologia Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunofarmacologia Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunofarmacologia Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunofarmacologia Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunofarmacologia Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Universidade Federal de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Universidade Federal de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Universidade Federal de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunofarmacologia Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Universidade Federal de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Universidade Federal de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunofarmacologia Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Universidade Federal de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil.In the present study, we investigated the in vitro effects of two basic myotoxic phospholipases A2 (PLA2), BaTX-I, a catalytically inactive Lys-49 variant, and BaTX-II, a catalytically active Asp-49, and of one acidic myotoxic PLA2, BaPLA2, a catalytically active Asp-49, isolated from Bothrops atrox snake venom, on the activation of J774A.1 macrophages. At noncytotoxic concentrations, the toxins did not affect the adhesion of the macrophages, nor their ability to detach. The data obtained showed that only BaTXI stimulated complement receptor-mediated phagocytosis. However, BaTX-I, BaTX-II, and BaPLA2 induced the release of the superoxide anion by J774A.1 macrophages. Additionally, only BaTX-I raised the lysosomal volume of macrophages after 15 min of incubation. After 30 min, all the phospholipases increased this parameter, which was not observed within 60 min. Moreover, BaTX-I, BaTX-II, and BaPLA2 increased the number of lipid bodies on macrophages submitted to phagocytosis and not submitted to phagocytosis. However, BaTX-II and BaPLA2 induced the release of TNF- by J774A.1 macrophages. Taken together, the data show that, despite differences in enzymatic activity, the three toxins induced inflammatory events and whether the enzyme is acidic or basic does not seem to contribute to these effects

The effect of 3β, 6β, 16β-trihydroxylup- 20(29)-ene lupane compound isolated from Combretum leprosum Mart. on peripheral blood mononuclear cells

Submitted by EMERSON LEAL ([email protected]) on 2016-01-15T15:11:42Z No. of bitstreams: 1 The effect of 3β, 6β, 16β.pdf: 1570998 bytes, checksum: 49dcbf933a2c6dc5e2b9fccb9f221ab5 (MD5)Approved for entry into archive by EMERSON LEAL ([email protected]) on 2016-01-15T15:57:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 The effect of 3β, 6β, 16β.pdf: 1570998 bytes, checksum: 49dcbf933a2c6dc5e2b9fccb9f221ab5 (MD5)Made available in DSpace on 2016-01-15T15:57:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 The effect of 3β, 6β, 16β.pdf: 1570998 bytes, checksum: 49dcbf933a2c6dc5e2b9fccb9f221ab5 (MD5) Previous issue date: 2015Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental. Núcleo de Saúde. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental. Núcleo de Saúde. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental. Núcleo de Saúde. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental. Núcleo de Saúde. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental. Núcleo de Saúde. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental. Núcleo de Saúde. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental. Núcleo de Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnlogia. Porto Velho, RO, Brazil. / Centro de Pesquisa em Medicina Tropical, Porto Velho, RO, Brazil.Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnlogia. Porto Velho, RO, Brazil. / Laboratório Central de Saúde Pública de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental. Núcleo de Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnlogia. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental. Núcleo de Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnlogia. Porto Velho, RO, Brazil. / Fundação Oswaldo Cruz. Universidade Federal de Rondônia. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental. Núcleo de Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnlogia. Porto Velho, RO, Brazil. / Fundação Oswaldo Cruz. Universidade Federal de Rondônia. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental. Núcleo de Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnlogia. Porto Velho, RO, Brazil. / Fundação Oswaldo Cruz. Universidade Federal de Rondônia. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Porto Velho, RO, Brazil.Universidade Estadual de Santa Cruz. Departamento de Ciências Biológicas. Ilhéus, BA, Brazil.Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental. Núcleo de Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnlogia. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Departamento de Química. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental. Núcleo de Saúde. Porto Velho, RO, Brazil. / Universidade Federal de Rondônia. Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnlogia. Porto Velho, RO, Brazil. / Fundação Oswaldo Cruz. Universidade Federal de Rondônia. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Porto Velho, RO, Brazil.Background: The Combretum leprosum Mart. plant, popularly known as mofumbo, is used in folk medicine for inflammation, pain and treatment of wounds. From this species, it is possible to isolate three triterpenes: (3β, 6β, 16β-trihydroxylup-20(29)-ene) called lupane, arjunolic acid and molic acid. In this study, through preclinical tests, the effect of lupane was evaluated on the cytotoxicity and on the ability to activate cellular function by the production of TNF-α, an inflammatory cytokine, and IL-10, an immuno regulatory cytokine was assessed. The effect of lupane on the enzymes topoisomerase I and II was also evaluated. Methods: For this reason, peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were obtained and cytotoxicity was assessed by the MTT method at three different times (1, 15 and 24 h), and different concentrations of lupane (0.3, 0.7, 1.5, 6, 3 and 12 μg/mL). The cell function was assessed by the production of TNF-α and IL-10 by PBMCs quantified by specific enzyme immunoassay (ELISA). The activity of topoisomerases was assayed by in vitro biological assays and in silico molecular docking. Results: The results obtained showed that lupane at concentrations below 1.5 μg/mL was not toxic to the cells. Moreover, lupane was not able to activate cellular functions and did not alter the production of IL-10 and TNF-α. Furthermore, the data showed that lupane has neither interfered in the action of topoisomerase I nor in the action of topoisomerase II. Conclusion: Based on preclinical results obtained in this study, we highlight that the compound studied (lupane) has moderate cytotoxicity, does not induce the production of TNF-α and IL-10, and does not act on human topoisomerases. Based on the results of this study and taking into consideration the reports about the anti-inflammatory and leishmanicidal activity of 3β, 6β, 16β-trihydroxylup-20(29)-ene, we suggest that this compound may serve as a biotechnological tool for the treatment of leishmaniasis in the future

Purification and biochemical characterization of three myotoxins from bothrops mattogrossensis snake venom with toxicity against leishmania and tumor cells

Submitted by Claudete Queiroz ([email protected]) on 2016-05-03T17:49:34Z No. of bitstreams: 1 Purification and Biochemical Characterization of Three Myotoxins from Bothrops mattogrossensis Snake Venom with Toxicity against Leishmania and Tumor Cells.pdf: 2330661 bytes, checksum: d78a494a905fcd4ee4e7b030ef32d219 (MD5)Approved for entry into archive by EMERSON LEAL ([email protected]) on 2016-05-17T13:55:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Purification and Biochemical Characterization of Three Myotoxins from Bothrops mattogrossensis Snake Venom with Toxicity against Leishmania and Tumor Cells.pdf: 2330661 bytes, checksum: d78a494a905fcd4ee4e7b030ef32d219 (MD5)Made available in DSpace on 2016-05-17T13:55:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Purification and Biochemical Characterization of Three Myotoxins from Bothrops mattogrossensis Snake Venom with Toxicity against Leishmania and Tumor Cells.pdf: 2330661 bytes, checksum: d78a494a905fcd4ee4e7b030ef32d219 (MD5) Previous issue date: 2014Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Núcleo de Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Núcleo de Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Núcleo de Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Núcleo de Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil. / Fundação Oswaldo Cruz. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Porto Velho, RO, Brazil.Universidade Federal Fluminense. Instituto de Biologia. Departamento de Biologia Celular e Molecular. Niterói, RJ, Brazil.Universidade Federal Fluminense. Instituto de Biologia. Departamento de Biologia Celular e Molecular. Niterói, RJ, Brazil.Universidade de São Paulo. Faculdade de Ciências Farmacêuticas. Ribeirão Preto, SP, Brazil.Universidade Federal de São João del Rei. Ouro Branco, MG, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Núcleo de Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil. / Fundação Oswaldo Cruz. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Núcleo de Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil. / Fundação Oswaldo Cruz. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Núcleo de Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil. / Fundação Oswaldo Cruz. Porto Velho, RO, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Departamento de Medicina. Núcleo de Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Porto Velho, RO, Brazil. / Fundação Oswaldo Cruz. Porto Velho, RO, Brazil.Bothrops mattogrossensis snake is widely distributed throughout eastern South America and is responsible for snakebites in this region. This paper reports the purification and biochemical characterization of three new phospholipases A2 (PLA2s), one of which is presumably an enzymatically active Asp49 and two are very likely enzymatically inactive Lys49 PLA2 homologues. The purification was obtained after two chromatographic steps on ion exchange and reverse phase column. The 2D SDS-PAGE analysis revealed that the proteins have pI values around 10, are each made of a single chain, and have molecular masses near 13 kDa, which was confirmed by MALDI-TOF mass spectrometry. The N-terminal similarity analysis of the sequences showed that the proteins are highly homologous with other Lys49 and Asp49 PLA2s from Bothrops species. The PLA2s isolated were named BmatTX-I (Lys49 PLA2-like), BmatTX-II (Lys49 PLA2-like), and BmatTX-III (Asp49 PLA2). The PLA2s induced cytokine release frommouse neutrophils and showed cytotoxicity towards JURKAT (leukemia T) and SK-BR-3 (breast adenocarcinoma) cell lines and promastigote forms of Leishmania amazonensis. The structural and functional elucidation of snake venoms components may contribute to a better understanding of the mechanism of action of these proteins during envenomation and their potential pharmacological and therapeutic applications