Brucella abortus induces TNF-á-dependent astroglial MMP-9 secretion through mitogen-activated protein kinases

Central nervous system (CNS) invasion by bacteria of the genus Brucella results in an inflammatory disorder called neurobrucellosis. We have recently demonstrated that B. abortus infects microglia and astrocytes, eliciting the production of a variety of pro-inflammatory cytokines which contribute to CNS damage. Matrix metalloproteinases (MMP) have been implicated in inflammatory tissue destruction in a range of pathological situations in the CNS. Increased MMP secretion is induced by pro-inflammatory cytokines in a variety of CNS diseases characterized by tissue-destructive pathology.Fil: Miraglia, Maria Cruz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. R. A. Margni; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; ArgentinaFil: Scian, Romina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Est.de la Inmunidad Humoral Prof.r.a.margni;Fil: Garcia Samartino, Clara. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. R. A. Margni; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; ArgentinaFil: Barrionuevo, Paula. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. R. A. Margni; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; ArgentinaFil: Baldi, Pablo Cesar. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. R. A. Margni; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; ArgentinaFil: Cassataro, Juliana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. R. A. Margni; ArgentinaFil: Delpino, María Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. R. A. Margni; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; ArgentinaFil: Giambartolomei, Guillermo Hernan. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. R. A. Margni; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; ArgentinaFil: Rodríguez, Ana María. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martin; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Ibañez, Andres Esteban. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. R. A. Margni; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; ArgentinaFil: Coria, Lorena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. R. A. Margni; ArgentinaFil: Velasquez, Lis Noelia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. R. A. Margni; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; Argentin

Optimized production of virus-like particles in a high-CHO-cell-density transient gene expression system for foot-and-mouth disease vaccine development

Background/Objectives: Foot-and-mouth disease virus (FMDV) poses a continuous threat to livestock health and agricultural economies. Current vaccines require high biosafety standards and are costly to produce. While novel vaccine technologies have been explored, most fail to meet industrial scalability, cost-efficiency, or multiserotype flexibility required for effective FMD control. This study aimed to evaluate the feasibility of using a high-cell density transient gene expression (TGE) system in CHO cells for the production of FMDV virus-like particles (VLPs) as a recombinant vaccine platform. Methods: VLP expression was optimized by adjusting cDNA and polyethyleneimine (PEI) concentrations. Expression yields were compared at 24 and 48 h post-transfection to determine optimal harvest timing. We further tested the system’s capacity to express different serotypes and chimeric constructs, incorporating VP1 sequences from various FMDV strains. Immunogenicity was evaluated in swine using VLPs from the A2001 Argentina strain as a model. Results: Optimal VLP expression was achieved at 24 h post-transfection. Chimeric constructs incorporating heterologous VP1 regions were successfully expressed. Immunized pigs developed protective antibody titers as measured by a virus neutralization test (VNT, log10 titer 1.43) and liquid-phase blocking ELISA (LPBE, titer 2.20) at 28 days post-vaccination (dpv). Titers remained above protective thresholds up to 60 dpv with a single dose. A booster at 28 dpv further elevated titers to levels comparable to those induced by the inactivated vaccine. Conclusions: Our results demonstrate the feasibility of using CHO cell-based TGE for producing immunogenic FMDV VLPs. This platform shows promise for scalable, cost-effective, and biosafe development of recombinant FMD vaccines.Instituto de VirologíaFil: Mignaqui, Ana Clara. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas. INCUINTA; ArgentinaFil: Mignaqui, Ana Clara. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones Forestales y Agropecuarias Bariloche; ArgentinaFil: Mignaqui, Ana Clara. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Bariloche. Instituto de Investigaciones Forestales y Agropecuarias Bariloche; ArgentinaFil: Ferella, Alejandra. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas. INCUINTA; ArgentinaFil: Ferella, Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Sánchez, Cintia. Biogénesis Bagó; ArgentinaFil: Stuible, Matthew. National Research Council Canada. Human Health Therapeutics Research Center; CanadáFil: Scian, Romina. Biogénesis Bagó; ArgentinaFil: Filippi, Jorge. Biogénesis Bagó; ArgentinaFil: Cardillo, Sabrina Beatriz. Biogénesis Bagó; ArgentinaFil: Durocher, Yves. National Research Council Canada. Human Health Therapeutics Research Center; CanadáFil: Wigdorovitz, Andres. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas. INCUINTA; ArgentinaFil: Wigdorovitz, Andres. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Epigenetic Modifications in the Biology of Nonalcoholic Fatty Liver Disease: The Role of DNA-Hydroxymethylation and TET Proteins

The 5-Hydroxymethylcytosine (5-hmC) is an epigenetic modification whose role in the pathogenesis of metabolic-related complex diseases remains unexplored; 5-hmC appears to be prevalent in the mitochondrial genome. The Ten-Eleven-Translocation (TET) family of proteins is responsible for catalyzing the conversion of 5-methylcytosine to 5-hmC. We hypothesized that epigenetic editing by 5-hmC might be a novel mechanism through which nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD)-associated molecular traits could be explained. Hence, we performed an observational study to explore global levels of 5-hmC in fresh liver samples of patients with NAFLD and controls (n = 90) using an enzyme-linked-immunosorbent serologic assay and immunohistochemistry. We also screened for genetic variation in TET 1–3 loci by next generation sequencing to explore its contribution to the disease biology. The study was conducted in 2 stages (discovery and replication) and included 476 participants. We observed that the amount of 5-hmC in the liver of both NAFLD patients and controls was relatively low (up to 0.1%); a significant association was found with liver mitochondrial DNA copy number (R = 0.50, P = 0.000382) and PPARGC1A-mRNA levels (R = −0.57, P = 0.04). We did not observe any significant difference in the 5-hmC nuclear immunostaining score between NAFLD patients and controls; nevertheless, we found that patients with NAFLD (0.4 ± 0.5) had significantly lower nonnuclear-5-hmC staining compared with controls (1.8 ± 0.8), means ± standard deviation, P = 0.028. The missense p.Ile1123Met variant (TET1-rs3998860) was significantly associated with serum levels of caspase-generated CK-18 fragment-cell death biomarker in the discovery and replication stage, and the disease severity (odds ratio: 1.47, 95% confidence interval: 1.10–1.97; P = 0.005). The p.Ile1762Val substitution (TET2-rs2454206) was associated with liver PPARGC1A-methylation and transcriptional levels, and Type 2 diabetes. Our results suggest that 5-hmC might be involved in the pathogenesis of NAFLD by regulating liver mitochondrial biogenesis and PPARGC1A expression. Genetic diversity at TET loci suggests an “epigenetic” regulation of programmed liver-cell death and a TET-mediated fine-tuning of the liver PPARGC1A-transcriptional program.Fil: Pirola, Carlos José. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Scian, Romina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Fernández Gianotti, Tomás. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Dopazo, Hernán Javier. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Ecología, Genética y Evolución de Buenos Aires. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Ecología, Genética y Evolución de Buenos Aires; ArgentinaFil: Rohr, Cristian Oscar. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Ecología, Genética y Evolución de Buenos Aires. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Ecología, Genética y Evolución de Buenos Aires; ArgentinaFil: San Martino, Julio. Provincia de Buenos Aires. Ministerio de Salud. Hospital Municipal Dr. Diego Thompson; ArgentinaFil: Castaño, Gustavo Osvaldo. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital "Dr. Abel Zubizarreta"; ArgentinaFil: Sookoian, Silvia Cristina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; Argentin

Foot-and-Mouth Disease: Optimization, Reproducibility, and Scalability of High-Yield Production of Virus-Like Particles for a Next-Generation Vaccine

Inactivated Foot-and-Mouth Disease (FMD) vaccine has proven to be effective in the control of the disease. However, its production has some disadvantages, including the costly biosafety facilities required for the production of huge amounts of growing live virus, the need of an exhaustive purification process to eliminate non-structural proteins of the virus in the final formulations in order to differentiate infected from vaccinated animals and variable local regulatory restrictions to produce and commercialize the vaccine. Thus, a novel vaccine against FMD that overcome these restrictions is desirable. Although many developments have been made in this regard, most of them failed in terms of efficacy or when considering their transferability to the industry. We have previously reported the use of transient gene expression in mammalian cells to produce FMD virus-like particles (VLPs) as a novel vaccine for FMD and demonstrated the immunogenicity of the recombinant structures in animal models. Here, we report the optimization of the production system by assaying different DNA:polyethylenimine concentrations, cell densities, and direct and indirect protocols of transfection. Also, we evaluated the reproducibility and scalability of the technology to produce high yields of recombinant VLPs in a cost-effective and scalable system compatible with industrial tech-transfer of an effective and safe vaccine.Estación Experimental Agropecuaria BarilocheFil: Mignaqui, Ana Clara. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Bariloche. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Instituto de Investigaciones Forestales y Agropecuarias Bariloche; ArgentinaFil: Ferella, Alejandra. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas; ArgentinaFil: Cass, Brian. Human Health Therapeutics Research Center, National Research Council Canada; CanadáFil Mukankurayija, Larissa. Human Health Therapeutics Research Center, National Research Council Canada; CanadáFil: L’Abbé, Denis. Human Health Therapeutics Research Center, National Research Council Canada; CanadáFil: Bisson, Louis. Human Health Therapeutics Research Center, National Research Council Canada; CanadaFil: Sánchez, Cintia. Biogénesis-Bagó; ArgentinaFil: Scian, Romina. Biogénesis-Bagó; ArgentinaFil: Cardillo, Sabrina Beatriz. Biogénesis-Bagó; ArgentinaFil: Durocher, Yves. Human Health Therapeutics Research Center, National Research Council Canada; CanadáFil: Wigdorovitz, Andres. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas; Argentin

Mecanismos inmunológicos implicados en la patología osteoarticular por Brucella spp

Scian, R. (2013). Mecanismos inmunológicos implicados en la patología osteoarticular por Brucella spp (Tesis de Doctorado). Universidad Nacional de Quilmes, Bernal, Argentina.La brucelosis osteoarticular es la localización más común de la enfermedad activa en el hombre. Sin embargo, hasta el momento no habían sido investigados los mecanismos inmunológicos implicados en esta patología. Por lo tanto, el objetivo general de este trabajo de tesis fue dilucidar cuáles eran los mediadores responsables del daño osteoarticular por Brucella abortus. La hipótesis central que fue analizada es que B. abortus puede inducir inflamación y esta respuesta puede ocasionar la destrucción ósea mediante diversos mecanismos: 1) la producción de metaloproteasas de matriz (MMPs), 2) la inducción de la formación de osteoclastos (células que degradan matriz ósea) y 3) la alteración en el número y función de los osteoblastos (células encargadas de producir la matriz ósea). Nuestros resultados demuestran que B. abortus es capaz de infectar y replicarse intracelularmente en osteoblastos y fibroblastos sinoviales humanos. Estas células responden a la infección produciendo MMP-2, y las quemoquinas MCP-1 e IL-8, las cuales inducen la migración de monocitos y neutrófilos, respectivamente. Los monocitos y neutrófilos atraídos al sitio de infección osteoarticular responden a la infección con B. abortus y sus lipoproteínas, produciendo MMP-9. Como resultado de las interacciones de los osteoblastos y los fibroblastos sinoviales con las células inmunes a través de citoquinas y factores de crecimiento producidos por estos tipos celulares frente a la infección por B. abortus, pudimos demostrar que TNF-α sería una de las principales citoquinas implicadas en la producción de MMPs. Nuestros estudios sobre la implicancia de la osteoclastogénesis patológica en el daño óseo mediado por Brucella, revelaron que la infección por B. abortus, mediante un mecanismo que involucra a sus lipoproteínas vía TLR-2 y la molécula adaptadora MyD88, induce la diferenciación de osteoclastos a partir de precursores de médula ósea en presencia de M-CSF. Mediante la utilización de precursores de osteoclastos deficientes en el receptor de TNFR1 y anticuerpos neutralizantes demostramos que la inducción de la formación de osteoclastos también está mediada por TNF-α. La infección por B. abortus es capaz de inducir la apoptosis de los osteoblastos, así como también de inhibir la diferenciación y función de los mismos como células implicadas en la deposición de matriz orgánica y mineral. Además, demostramos que los macrófagos infectados contribuyen tanto en la inducción de la apoptosis, como en la inhibición de la diferenciación y función de los osteoblastos mediante la producción de TNF-α en respuesta a la infección. Por otro lado, tanto la infección directa de los osteoblastos como el estímulo con los sobrenadantes de los macrófagos infectados también inducen un incremento en la expresión de RANKL en la superficie de los osteoblastos. Esta molécula podría interactuar con RANK presente en la superficie de los precursores de osteoclastos y de ese modo contribuir a la inducción de osteoclastogénesis patológica. Nuestros resultados aportan evidencias de que B. abortus y sus lipoproteínas interaccionan con los osteoblastos y fibroblastos sinoviales atrayendo monocitos y neutrófilos al sitio de infección, los cuales contribuyen al establecimiento de una respuesta inflamatoria que produce daño osteoarticular, mediante un mecanismo en el que TNF-α sería la principal citoquina involucrada.Beca de la Agencia Nacional de Promoción Científica y Tecnológic

Mecanismos inmunológicos implicados en la patología osteoarticular por Brucella spp

Fil: Scian, Romina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; Argentina.La brucelosis osteoarticular es la localización más común de la enfermedad activa en el hombre. Sin embargo, hasta el momento no habían sido investigados los mecanismos inmunológicos implicados en esta patología. Por lo tanto, el objetivo general de este trabajo de tesis fue dilucidar cuáles eran los mediadores responsables del daño osteoarticular por Brucella abortus. La hipótesis central que fue analizada es que B. abortus puede inducir inflamación y esta respuesta puede ocasionar la destrucción ósea mediante diversos mecanismos: 1) la producción de metaloproteasas de matriz (MMPs), 2) la inducción de la formación de osteoclastos (células que degradan matriz ósea) y 3) la alteración en el número y función de los osteoblastos (células encargadas de producir la matriz ósea). Nuestros resultados demuestran que B. abortus es capaz de infectar y replicarse intracelularmente en osteoblastos y fibroblastos sinoviales humanos. Estas células responden a la infección produciendo MMP-2, y las quemoquinas MCP-1 e IL-8, las cuales inducen la migración de monocitos y neutrófilos, respectivamente. Los monocitos y neutrófilos atraídos al sitio de infección osteoarticular responden a la infección con B. abortus y sus lipoproteínas, produciendo MMP-9. Como resultado de las interacciones de los osteoblastos y los fibroblastos sinoviales con las células inmunes a través de citoquinas y factores de crecimiento producidos por estos tipos celulares frente a la infección por B. abortus, pudimos demostrar que TNF-α sería una de las principales citoquinas implicadas en la producción de MMPs. Nuestros estudios sobre la implicancia de la osteoclastogénesis patológica en el daño óseo mediado por Brucella, revelaron que la infección por B. abortus, mediante un mecanismo que involucra a sus lipoproteínas vía TLR-2 y la molécula adaptadora MyD88, induce la diferenciación de osteoclastos a partir de precursores de médula ósea en presencia de M-CSF. Mediante la utilización de precursores de osteoclastos deficientes en el receptor de TNFR1 y anticuerpos neutralizantes demostramos que la inducción de la formación de osteoclastos también está mediada por TNF-α. La infección por B. abortus es capaz de inducir la apoptosis de los osteoblastos, así como también de inhibir la diferenciación y función de los mismos como células implicadas en la deposición de matriz orgánica y mineral. Además, demostramos que los macrófagos infectados contribuyen tanto en la inducción de la apoptosis, como en la inhibición de la diferenciación y función de los osteoblastos mediante la producción de TNF-α en respuesta a la infección. Por otro lado, tanto la infección directa de los osteoblastos como el estímulo con los sobrenadantes de los macrófagos infectados también inducen un incremento en la expresión de RANKL en la superficie de los osteoblastos. Esta molécula podría interactuar con RANK presente en la superficie de los precursores de osteoclastos y de ese modo contribuir a la inducción de osteoclastogénesis patológica. Nuestros resultados aportan evidencias de que B. abortus y sus lipoproteínas interaccionan con los osteoblastos y fibroblastos sinoviales atrayendo monocitos y neutrófilos al sitio de infección, los cuales contribuyen al establecimiento de una respuesta inflamatoria que produce daño osteoarticular, mediante un mecanismo en el que TNF-α sería la principal citoquina involucrada

Brucella abortus invasion of osteoblasts inhibits bone formation

Osteoarticular brucellosis is the most common presentation of the active disease in humans. Loss of bone is a serious complication of localized bacterial infection of bones or the adjacent tissue, and brucellosis proved not to be the exception. The skeleton is a dynamic organ system which is constantly remodeled. Osteoblasts are responsible for the deposition of bone matrix and are thought to facilitate the calcification and mineralization of the bone matrix, and their function could be altered under infectious conditions. In this article, we describe immune mechanisms whereby Brucella abortus may invade and replicate within osteoblasts, inducing apoptosis, inhibiting mineral and organic matrix deposition, and inducing upregulation of RANKL expression. Additionally, all of these mechanisms contributed in different ways to bone loss. These processes implicate the activation of signaling pathways (mitogen-activated protein kinases [MAPK] and caspases) involved in cytokine secretion, expression of activating molecules, and cell death of osteoblasts. In addition, considering the relevance of macrophages in intracellular Brucella survival and proinflammatory cytokine secretion in response to infection, we also investigated the role of these cells as modulators of osteoblast survival, differentiation, and function. We demonstrated that supernatants from B. abortus-infected macrophages may also mediate osteoblast apoptosis and inhibit osteoblast function in a process that is dependent on the presence of tumor necrosis factor alpha (TNF-α). These results indicate that B. abortus may directly and indirectly harm osteoblast function, contributing to the bone and joint destruction observed in patients with osteoarticular complications of brucellosis.Fil: Scian, Romina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; ArgentinaFil: Barrionuevo, Paula. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; ArgentinaFil: Fossati, Carlos Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: Giambartolomei, Guillermo Hernan. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; ArgentinaFil: Delpino, María Victoria. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; Argentin

Brucella-infected hepatocytes mediate potentially tissue-damaging immune responses

Background & Aims: Hepatic involvement is frequent in human brucellosis. While different histopathological lesions have been reported in these patients, the underlying cellular and molecular mechanisms have not been addressed. Methods: This study assessed whether Brucella abortus can infect a human hepatoma cell line and induce a proinflammatory response in these cells. Results: The bacterium not only infected the human hepatoma cell line HepG2 but also exhibited intracellular replication. The infection induced hepatoma cells to secrete IL-8, and supernatants from Brucella-infected hepatoma cells were shown to induce the migration of human neutrophils. The infection also induced the expression of the intercellular adhesion molecule ICAM-1 on hepatoma cells, and the adhesion of neutrophils to these cells was significantly higher than to uninfected hepatoma cells. ICAM-1 expression was also induced by stimulation of hepatoma cells with supernatants from Brucella-infected neutrophils. While Brucella infection did not induce the expression of matrix metalloproteinases (MMPs) in hepatoma cells, it significantly induced MMP-9 in neutrophils. Hepatoma cell apoptosis was significantly induced by B. abortus infection and also by stimulation with supernatants from Brucella-infected neutrophils. Conclusions: The present study provides clues regarding potential mechanisms of tissue damage during liver brucellosis.Fil: Delpino, María Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: Barrionuevo, Paula. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; ArgentinaFil: Scian, Romina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: Fossati, Carlos Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: Baldi, Pablo Cesar. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; Argentin

Heat Shock Protein 27 is down-regulated in Ballooned Hepatocytes of Patients with Nonalcoholic Steatohepatitis (NASH)

Ballooning degeneration (BD) of hepatocytes is a distinguishing histological feature associated with the progression of nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD). Under the assumption that NAFLD severity is associated with metabolic stress we explored the hypothesis that heat shock 27 kDa protein 1 (HSP27),a protein chaperone involved in stress resistance and cytoskeletal remodeling, might be deregulated in ballooned hepatocytes. We observed that fasting plasma glucose (fpG) (p = 0.00002), total cholesterol (p = 0.02) and triglycerides (p = 0.01) levels, and female sex (p = 0.01) were significantly associated withthe presence of BD. A logistic regression model showed that BD was independently associated with fpG (p = 0.002); OR per unit of glucose concentration 1.05, 95% confidence interval 1.02?1.09. Furthermore, BD was associated with a significant 2.24-fold decrease in the expression level of HSP27-mRNA in comparison with the absence of ballooning, p = 0.002. Ballooned hepatocytes showed very low HSP27immunoreactivity compared with hepatocytes without ballooning (p = 0.009); HSP27 immunoreactivity was inversely correlated with fpG levels (R: −0.49, p = 0.01). In conclusion, BD is associated with downregulation of liver HSP27 gene and protein expression, suggesting that ballooned hepatocytes fail to ensure a robust physiological response to metabolic-induced stress.Fil: Sookoian, Silvia Cristina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Castaño, Gustavo Osvaldo. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital ; ArgentinaFil: Scian, Romina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: San Martino, Julio. Provincia de Buenos Aires. Ministerio de Salud. Hospital Municipal Dr. Diego Thompson; ArgentinaFil: Pirola, Carlos José. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; Argentin